A. 离子交换层析法分离纯化蛋白质有哪些局限性
因为抄离子交换吸附蛋白质并不是特异性吸附，在某些情况下可能难以判断结合的蛋白质是否为当初设计的目的蛋白。
离子交换吸附依赖于蛋白质表面的静电荷，如果蛋白质结构比较特殊，可能会有在各种pH都难以结合上离子交换层析的情况。
离子交换层析对于等电点与目标蛋白接近的杂蛋白并没有很好的分离效果。
B. 离子交换层析法分离纯化蛋白质有哪些局限性
1，离子交换树脂固定床的床层压力会随着分离过程的进程而不断加大，需要重回新填充答。同时，也造成固定床填充过程操作麻烦，而且密封性要求高。2，蛋白质分离纯度问题，如果在出峰之后再行切换接收馏分，而在峰行下降后提前切换，虽可以保证纯度，但蛋白分离收率则会下降。3，由于交换层析介质决定，不同蛋白质相互分离效果也不确定，这种分离，也易造成各蛋白峰重叠，造成分离纯度下降。4，自动化程度不高。主要也是受固定床以及树脂交换饱和当量无法保持长期稳定造成的。无法像液相色谱柱那样，可以在标样标定后，建立方法，自动分离目标蛋白。5，不过，规模化分离纯化蛋白质过程，使用这种层析法，还是具有一定优势的。
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详细资料请参考：
离子交换层析: http://proct.bio1000.com/100474/
C. 我要分离纯化一种未知酶，一切未知，想用凝胶层析和离子交换层析分离，不知选用什么填料合适有好的建议
建议用离子交换层析。凝胶过滤层析流速慢，上样量低，而且分离效果一般，凝胶回过滤答一般用于层析的后期包括除盐，去除降解片段之类的。
离子交换一般就用到DEAE，因为大部分蛋白都偏酸。要是你的酶是碱性蛋白，那就更好办，上个CM柱，其他杂蛋白就留不下多少了。
所以先拿DEAE试试吧。
D. 用离子交换法纯化蛋白如何选定缓冲液
也可以用AEC，主要以流穿模式做。sspxiaoji(站内联系TA)用阳离子交换柱，可以考虑pH6.0-7.0的缓冲液，因内为容大部分蛋白质的等电点在这附近，带电荷少，这样容易穿透除去其他杂蛋白。而你的目的蛋白PI在11，挂柱应该比较牢固。但是有个问题需要注意，PH离你的目标蛋白PI太远，有可能导致挂柱后难以洗脱。
E. 采用离子交换柱纯化蛋白时，洗脱采用的离子强度的大小范围应该如何确定
离子交换纯化是利用离子交换剂上的可解离基团（活性基团）对各种离子的亲和力内不一样人达容到分离的目的的一种分离技术。离子交换剂是含有若干活性基团 的不溶性物质，即在不溶性母体上引入若干可解离基团而成，根据引入解离基团的不同，可以分为阳离子交换剂和阴离子交换剂。各种离子对离子交换剂的亲和力各 不相同，亲和力随离子的价数与原子序数增加而增加，而随离子水化膜半径的增加而降低。对具体离子交换纯化，需要主要离子交换剂的选择和处理。洗脱不同蛋白 的最恰当的离子强度液不一定一样，通常采用浓度梯度和PH梯度相结合的方式洗脱，纯化不同的蛋白最好先摸一摸洗脱液的离子浓度和PH值……
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离子交换介质 http://proct.bio1000.com/100025/
F. 建立离子交换法纯化蛋白质的方法需要摸索哪些条件
pH值，缓冲液的pH值对于蛋白结合离子交换层析有非常大的影响，需要先摸索出合适的版pH值，既能权保证蛋白结合上离子交换层析，又不会出现不稳定沉淀的情况。
盐浓度，盐浓度是离子交换层析洗脱的关键，需要摸索出蛋白能在什么样的盐浓度下被洗脱，且洗脱后纯度能够达到最初的要求。
柱体积，尽管各种离子交换层析均有理论结合蛋白量，但各种蛋白情况不一样，需要摸索出能够完全结合目的蛋白合适的柱体积。既不会太大造成洗脱浓度过稀，也不会太小造成目标蛋白过载。
温度，温度可能会造成蛋白变性等等。
G. 离子交换色谱法是蛋白质纯化技术中的一种吗
是的，蛋复白质纯化技术分为制电泳和色谱法两种。离子交换色谱法是色谱法的一种，所以也是蛋白质纯化技术中的一种。其实在伯乐生命医学上有很详细的介绍，蛋白质纯化技术就是为了获得的蛋白质去除杂质而是用的各种方法，并且根据不同的蛋白质采用的方法也有所不同，蛋白质纯化的工作是较为复杂的。
H. 某蛋白质等电点为8.14,如采用离子交换色谱法来纯化,如何选择填料和缓冲体系
我的话，第一步会选择pH7.0-7.4左右过阴离子交换，让大多数杂蛋白（大多数杂蛋白pI在6左右）、核酸、色素等杂质结合，收集流穿液，此时蛋白溶液的纯度和澄清度会大大提高，再校pH7.0或更低pH过阳离子交换进行纯化。讲究一点的话，在缓冲选择上可以区分一下阴阳离子缓冲，多数情况影响不大，不必纠结。