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纯化酶用阴离子还是阳离子交换

发布时间:2022-02-02 05:17:44

『壹』 离子交换纤维素有何特点.为什么人们常用它来分离纯化酶

离子交换纤维素复有何特点.为什制么人们常用它来分离纯化酶
⑴具有开放性支持骨架,大分子可以自由进入和迅速扩散,故吸附容量大.⑵具有亲水性,对大分子的吸附不大牢固,用温和条件使可以洗脱,不致引起蛋白质变性或酶的失活.⑶多孔性,表面积大、交换容量大,回收率高,可用于分离和制备.

『贰』 一般,用于分离蛋白质的离子交换层析,应该用阴离子交换树脂,还是阳离子交换树脂

氨基酸一般用强酸性阳离子交换树脂,蛋白质用阴离子交换树脂

『叁』 阳离子交换树脂和阴离子交换树脂的区别和用法

阳离子交换树脂:活性基团为阳离子,比如氢离子,钠离子等。树脂上的活性基团与上样液中的阳离子发生交换,那么氢离子或钠离子流出,上样液中的阳离子留在了树脂上,再经过洗脱,将目的物阳离子洗脱下来,从而达到分离纯化的目的。阴离子交换树脂:活性基团为阴离子,比如氢氧根离子,氯离子等。上样液中的阴离子与氢氧根离子或氯离子发生交换,目的物结合到了树脂上,再洗脱下来。树脂用法:以阳离子树脂为例。1,树脂用50~60℃热水泡,不时搅拌,开始每隔15分钟换水一次,换4次,再每隔半小时换水一次,换4次。此时水应为透明,若不透明还有其他颜色或浑浊,继续水洗。2,树脂装柱。用1N盐酸缓慢流过树脂柱,大约每小时走1.5倍柱体积,共走3~4柱体积,换去离子水冲柱至中性。3,用1N 氢氧化钠缓慢流过树脂柱,大约每小时走1.5倍柱体积,共走3~4柱体积,换去离子水冲柱至中性。4,重复2,树脂变为氢型。不重复2,树脂为钠型。 一般树脂厂商都会告诉你如何处理活化的。

『肆』 我要分离纯化一种未知酶,一切未知,想用凝胶层析和离子交换层析分离,不知选用什么填料合适有好的建议

建议用离子交换层析。凝胶过滤层析流速慢,上样量低,而且分离效果一般,凝胶回过滤答一般用于层析的后期包括除盐,去除降解片段之类的。
离子交换一般就用到DEAE,因为大部分蛋白都偏酸。要是你的酶是碱性蛋白,那就更好办,上个CM柱,其他杂蛋白就留不下多少了。
所以先拿DEAE试试吧。

『伍』 在生化血清γ-球蛋白的分离纯化实验中,如果用阳离子交换柱,该怎么操作

缓冲液改成酸性的 而且要根据不同的pI进行

『陆』 纯化可以先阳离子结合再阴离子结合吗

离子交换层析(Ion Exchange Chromatography简称为IEC)是以离子交换剂为固定相,依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。
1848年,Thompson等人在研究土壤碱性物质交换过程中发现离子交换现象。
本世纪40年代,出现了具有稳定交换特性的聚苯乙烯离子交换树脂。
50年代,离子交换层析进入生物化学领域,应用于氨基酸的分析。
目前离子交换层析仍是生物化学领域中常用的一种层析方法,广泛的应用于各种生化物质如氨基酸、蛋白、糖类、核苷酸等的分离纯化。
常用的离子交换剂有:离子交换纤维素、离子交换葡聚糖和离子交换树脂 .
离子交换层析中,基质是由带有电荷的树脂或纤维素组成。
带有正电荷的称之阴离子交换树脂;
而带有负电荷的称之阳离子树脂。
离子交换层析同样可以用于蛋白质的分离纯化。
由于蛋白质也有等电点,当蛋白质处于不同的pH条件下

『柒』 离子交换柱层析能分离纯化蔗糖酶的主要依据是什么

DEAE-纤维素为二乙氨乙基纤维素,是阴离子交换剂。
其原理基于离子交换层析:离版子交换层析中,基质是由带权有电荷的树脂或纤维素组成。
由于蛋白质也有等电点,当蛋白质处于不同的pH条件下,其带电状况也不同。阴离子交换基质结合带有负电荷的蛋白质,所以这类蛋白质被留在柱子上,然后通过提高洗脱液中的盐浓度等措施,将吸附在柱子上的蛋白质洗脱下来。结合较弱的蛋白质首先被洗脱下来。反之阳离子交换基质结合带有正电荷的蛋白质,结合的蛋白可以通过逐步增加洗脱液中的盐浓度或是提高洗脱液的pH值洗脱下来。

『捌』 做酶的分离纯化是做离子交换和凝胶层析时使用普通的玻璃层析柱,只选择填料行不行

没问题的。
普通的玻璃层析柱只是做离子交换、凝胶层析压力没问题,一般也用不到什么有机溶剂,所以放心用吧。

『玖』 酶分离纯化离子交换柱预装柱怎么使用

如果不限定纯化方法,可以考虑亲和层析或离子交换,但根据你问题的意思,是内选定离子交换。
此时容就要考虑你蛋白的等电点了,如果等电点在你稳定pH之上,就用阳离子交换柱:
设计阳离子交换层析:将你的样品置换到你所指的稳定pH的running buffer。同时装柱,平衡,然后上样,平衡,洗脱(因为你的pH不稳定,建议盐洗脱),收峰。得你的蛋白;
如果你的等电点在稳定pH之下,就用阴离子交换柱,其步骤如上,只是改变柱子类型。

『拾』 高考电化学问题中如何判断用的是阴离子交换膜还是阳离子交换膜

经验:高中所用到的更多是:⑴质子交换膜:H+离子 ⑵阴离子交换膜:OH-离子

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