糖化血红蛋白离子交换层析法

A. 什么是糖化血红蛋白

糖化血红蛋白测定（glycosylated hemoglobin A，GHb） 成人红细胞中的血红蛋白有HbA（占95％～97％以上），HbA2（占2.5％），HbF（占0.2％）。当HbA中的部分血红蛋白被糖基化后，其中由于HbA的β链N末端的缬氨酸分子与葡萄糖等己糖分子相结合而使其在血红蛋白电泳中成为HbA之前的快泳、HbA1组分，在离子交换柱层析中亦在HbA之前首先被洗脱，糖化Hb可分为HbA1a（其中与1，6-二磷酸果糖结合的为HbA1a1；与6-磷酸葡萄糖结合的为HbA1a2），HbA1b（尚无明确定义，包括HbA1b1，HbA1b2，HbA1b3），HbA1e（与葡萄糖结合）和HbA1d（α链和β链内氨基以及α链的N末端基团上的烯化血红蛋白；包括HbA1d1，HbA1d2，HbA1d3）共九种。最重要的是HbA1c.HbA1e的生成量取决于血糖的浓度，正常人约占4％～6％。由于红细胞的半寿期是60天，所以GHb的测定可以反映测定前8周左右病人的平均血糖水平。

B. 糖化血红蛋白分析仪的检测方法

临床实验室中应用的GHB测定方法主要分为两类：
一是基于GHB与非GHB的电荷不同，如离子交换层析、电泳和等电聚集方法
二是基于血红蛋白上糖化基团的结构特点，如亲和层析和免疫实验
（1）亲和层析法：该方法特异性强，不受异常血畿蛋白的干扰。适合于临床科室使用，尤其对小儿患者而言更有优势。其检测结果也完全达到并超过临床要求，CV值5%以内。以中兴科仪（北京）贸易公司的挪威小旋风糖化血红蛋白仪NycoCard READER II为代表。
（2）高压液相方法(HPLC)，可全自动分离测定糖化血红蛋白及血蛋白的变异体和亚型，但仪器的操作保养要求较高，CV值1%以内。以北京执信医疗公司的HLC-723 G7为代表。
（3）免疫凝集法：原理是糖化血红蛋白与相应的单抗结合进而发生凝集反应，通过测定吸光度来表示凝集量，可用于全自动生化分析仪上进行测定。每次试验均应使用一个新试剂盒，操作前应注意混匀试剂。指出的是免疫凝集法测定糖化血红蛋白，精密度较差，CV值一般不大小5%。以中仪康辉（北京）贸易有限公司的DCA Vantage为代表。
（4）离子捕获法，其原理是糖化血红蛋白与相应抗体结合后，联以荧光标记物，而在IMX反应孔中的玻璃纤维预先包被了高分子的四胺合物，使纤维表面带正电，使前述的反应复合物吸附在纤维表面，经过一系列的清洗后测定其荧光强度，从而得到糖化血红蛋白的浓度，该方法适用于成批糖化血红蛋白标本的检测。以北京东南化学的IMX为代表
（5）电泳方法：毛细管电泳也能分离检测糖化血红蛋白和血红蛋白质的变异体，但目前尚无商品化，具有批量样本通过能力的仪器面世，相当程度地限制了该方法的临床应用。

C. 如何糖化筛检

那位网友（ 我信内经）混淆概念了，葡萄糖耐量试验和糖化血红蛋白完全不是一回事！

空腹血糖和餐后血糖是反映某一具体时间的血糖水平，容易受到进食和糖代谢等相关因素的影响。糖化血红蛋白可以稳定可靠地反映出检测前120天内的平均血糖水平，且受抽血时间，是否空腹，是否使用胰岛素等因素干扰不大。因此，国际糖尿病联盟推出了新版的亚太糖尿病防治指南，明确规定糖化血红蛋白是国际公认的糖尿病监控“金标准”。如果空腹血糖或餐后血糖控制不好，糖化血红蛋白就不可能达标。

糖化血红蛋白检测方法很多，常用的有微柱法离子交换层析、亲和层析、高压液相、免疫凝集、离子捕获法、电泳法等。主要生产厂家包括美国Bio-Rad的SD10、Primus、日本TOSOH的G7、英国DREWSCIENTIFIC、德国SIEMENS公司的DCA Vantage，挪威小旋风糖化Nycocard Reader II等等。 准确率最好的是高压液相法(HPLC),最适于普及的是挪威小旋风糖化Nycocard Reader II。

D. 糖化血红蛋白仪的检测方法

糖化血红蛋白检测方法很多，常用的有微柱法离子交换层析、亲和层析、高压液相、免疫凝集、离子捕获法、电泳法等。 如毛细管电泳也能分离检测糖化血红蛋白和血红蛋白质的变异体，但目前尚无商品化，具有批量样本通过能力的仪器面世，相当程度地限制了该方法的临床应用。
金标法的糖化血红蛋白仪,CV值小于5%。
综上所述，糖化血红蛋白是糖尿病患者疾病控制程度一项良好的指标，糖尿病患者应定期检测糖化血红蛋白，并据此制定，修正相关治疗方案。各医院可根据自身标本的多少，选择使用有关糖化血红蛋白的检测仪器，开展该项目的检测。

E. 糖化血红蛋白分析仪的工作原理

【检测原理】
血样与配套的糖化血红蛋白(HbA1c)(硼酸亲和色谱层析法)检测试剂反应后，剩下蓝色糖基化血红蛋白与红色血红蛋白沉积于层析卡上。糖化血红蛋分析仪再运用干化学光电比色法分别收集红色(总血红蛋白)和蓝色(HbA1c)的光学反射值，结合标准曲线计算出对应的浓度值，从而计算出血液样本中糖化血红蛋白的含量占总血红蛋白的比例含量。

F. mq2000糖化血红蛋白仪做出结果为0怎么解决

糖化血红蛋白测定（glycosylated hemoglobin A，GHb）

成人红细胞中的血红蛋白有HbA（占95％～97％以上），HbA2（占2.5％），HbF（占0.2％）。当HbA中的部分血红蛋白被糖基化后，其中由于HbA的β链N末端的缬氨酸分子与葡萄糖等己糖分子相结合而使其在血红蛋白电泳中成为HbA之前的快泳、HbA1组分，在离子交换柱层析中亦在HbA之前首先被洗脱，糖化Hb可分为HbA1a（其中与1，6-二磷酸果糖结合的为HbA1a1；与6-磷酸葡萄糖结合的为HbA1a2），HbA1b（尚无明确定义，包括HbA1b1，HbA1b2，HbA1b3），HbA1e（与葡萄糖结合）和HbA1d（α链和β链内氨基以及α链的N末端基团上的烯化血红蛋白；包括HbA1d1，HbA1d2，HbA1d3）共九种。最重要的是HbA1c.HbA1e的生成量取决于血糖的浓度，正常人约占4％～6％。由于红细胞的半寿期是60天，所以GHb的测定可以反映测定前8周左右病人的平均血糖水平。

GHb测定方法很多，两种最基本的方法是：测定HbA1组分和仅测定HbA1c.高压液相色谱（HPLC）法可精确分离HbA1各组分；并分别得出HbA1a、HbA1b、HbA1c、HbA1d的百分比，CV3％，是参考方法，其次还有低压液相色谱（LPLC），目前二者均有高精度的自动化仪器，作为常规方法用于临床；硼酸亲和柱层析法CV（1％～4.7％），阳离子交换柱层析法CV（2％～16％），测定的血红蛋白类型为HbA1.前者在样本量不大的实验室仍可使用；后者在分离过程中对pH和温度的要求极高，HbF是其干扰因素。电泳法CV（4％～10％），分离Hb类型和干扰因素与阳离子交换柱层析法相同；比色法可用于自动生化仪，无血红蛋白分离步骤，干扰因素小，具特异性和敏感性，但CV较大（4％～18％），且样品用量大，用浓度单位报告的方式还未被广大临床医师接受。

G. 糖化血红蛋白的检测方法

1、阳离子交换色谱法
原理：糖化导致血红蛋白分子表面阳离子丢失。在弱的阳离子交换剂中，例如Biorex70，伴有增加的离子浓度和（或）pH下降，糖化血红蛋白在非糖化血红蛋白前先洗脱。这现象产生了糖化血红蛋白最初的术语“快速血红蛋白”。阳离子交换色谱法可用于小型、微型或大型柱层析方法或部分或全自动的PHLC/FPLC方法。因为，其他翻译后修饰血红蛋白，例如醛亚胺型、甲酰化、乙酰化、乙醛加合物、降解物、老化人工物品和异常血红蛋白电荷交换也不同于正常的HbA0，所以已经列出了许多阳离子交换层析法的干扰因素。使用常规HPLC的方法。分离糖化血红蛋白亚组分是能达到满足需求的临床精密度。然而，已知HbA1c的峰不是均一的而是包含一重要的非糖化血红蛋白部分。少数糖化血红蛋白也整合到HbA0主峰中。通过使用特殊的柱原料（poly-CATA）和30～40 min分离时间可以改善分离效果。这些方法可以作为参考步骤但不适合常规使用。所有的阳离子交换色谱法对pH和温度的变化敏感，因此要控制pH和温度。
说明：根据红细胞代谢动力学推测初始HbA1c值大约每日破坏1/120（≈0.83%）。因为糖化在合适的治疗下甚至健康人也产生，故这个理论值在体外不能达到。控制不理想的糖尿病患者通过加强治疗而达到血糖量正常，可以发现HbA1c值最大下降率以大约每10 d下降正常血糖的1%（绝对的）。由于测定糖化血红蛋白方法的精确性，两次测定值HbA1c的差异大约1%就可认为具有临床相关性。因为这些原因，在HbA1c两次测定间至少有2周的时间，推荐4～6周的间隔。
因为升高的糖化血红蛋白值是长期高糖血症的糖尿病患者相当可靠的指示剂，因而是可能诊断糖尿病的。在未治疗的个体，正常的糖化血红蛋白值临床上可以排除明显的糖尿病。但由于它不能检测糖耐量受损，所以作为诊断和（或）筛选目的唯一的参数，使用糖化血红蛋白是存在问题的。
2、电泳法
原理：相比于非糖化血红蛋白，因糖化而变化的总电荷和糖化血红蛋白的等电点变化是琼脂糖凝胶或者pH梯度5.0～6.5的凝胶等电聚焦电泳分离的基础。琼脂糖凝胶电泳的血红蛋白亚组分分辨率很小，而等电聚焦可以更好地使亚组分分离。可能由于试验的自动化程度不足，重要性已经下降。
3、亲和层析法
原理：硼酸结合顺式-羟基。商品化的m-氨基苯硼酸琼脂糖共价结合的亲和柱已可用于微柱分析检测。将血样本中的血红蛋白加到层析柱后，所有的糖化血红蛋白（HbA1和旁链糖化的血红蛋白；总糖化血红蛋白）与硼酸结合而非糖化血红蛋白通过层析柱可被测量。在加入高浓度也包含顺式-羟基的多羟基复合物，例如山梨醇后，糖化血红蛋白与硼酸的结合被替换而从柱子上洗脱下来。亲和层析法对经翻译以后修饰的血红蛋白和病理血红蛋白的影响相对不敏感。利用亲和层析法，仅能测定总糖化血红蛋白。广泛使用的亲和层析方法，允许用经验算法从总糖化血红蛋白值计算出“标准的HbA1c”。
4、免疫分析法
在缬氨酸β-N-末端糖化的血红蛋白提供了一个容易被抗体识别的抗原表位。可以用单克隆抗体或多克隆抗体进行放射免疫分析和免疫酶学分析测定，抗体特异识别β链N-末端糖化的血红蛋白最后4～8个氨基酸组成的抗原表位。异常的血红蛋白或翻译后经修饰的血红蛋白无干扰。
目前的免疫化学试验不仅检测HbA1c，通常也同时检测HbA2c，因为血红蛋白A2糖化δ链的表位是相同的。抗体直接抗β-链的最后四个氨基酸的糖化表位的免疫化学试验也可用进行检测，例如HbS1c。在大多数情况下HbA2c意义不大，虽然镰刀细胞病时可以准确地测定缬氨酸β-N-氨基末端糖化程度，但它仍不能100%代表HbA1c。
5、离子层析法
离子层析法精密度高、重复性好且操作简单, 被临床广泛采用。检测原理由于血红蛋白β-链N 末端缬氨酸糖化后所带电荷不同, 在偏酸溶液中总糖化血红蛋白( GH b) 及H bA 均具有阳离子的特性, 因此经过阳离子交换层析柱时可被偏酸的缓冲液平衡过的树脂来吸附, 但二者吸附率不同, GH b正电荷较少吸附率较低, H bA 正电荷较多吸附率较高。用不同pH 的磷酸盐缓冲液可以分次洗脱出GH b 和H bA, 用KCN 可将H b转化为高铁氰化血红蛋白, 用分光光度计测定。或者得到相应的H b层析谱, 其横坐标是时间, 纵坐标是百分比。HbA1c值以百分率来表示。现在大部分都用全自动测定仪测定。
6、等电点聚集法
是测定GH b的新技术, 它是在聚丙烯酞凝胶中加人载体两性介质的薄板上形成一个由阳极到阴极逐渐增加的pH 梯度, 溶血液中各个组份将移动到各自的等电点的pH 位置上, 这样就得到比一般电泳法更好的分划效果和比较集中的色带, 通过分辨率高的微量光密度仪扫描, 可以准确地测定出各自组份的含量。由于它能够分辨出一级结构不同的HbA、HbAc、HbF、HbS 及HbC等, 可完全避开各种物质的干扰。
7、化学发光法
采用离子捕捉免疫分析法, 应用抗原抗体反应原理, 联以荧光标记物, 通过连接带负电的多阴离子复合物, 吸附到带正电的纤维表面, 经过一系列彻底清洗等步骤后, 测定荧光强度变化率, 计算浓度。采用专用试剂包和免疫发光分析仪,其检测系统易于规范和重复, 可减少操作技术误差, 检测的灵敏度和特异性高, 批内、批间变异系数小, 回收率高, 准确度高, 交叉污染率小, 影响因素少。
8、酶法
原理为用特殊蛋白酶分解Hb, 3~ 5 min内果糖基氨基酸从H b分离, 果糖基氨基酸氧化酶( FAOD )从果糖基氨基酸产生H2O2, H2O2经POD与DA- 64反应, 选择751 nm 测吸光度改变求得GHb浓度。

H. 糖化血红蛋白仪价格

糖化血红蛋白仪价格报价全国代理--上海天呈上海天呈医流专业销售糖化血红蛋白仪及糖化血红蛋白试剂盒，品牌有英国Drew ds5糖化血红蛋白仪、DS1糖化血红蛋白仪、挪威小旋风金标检测仪、德国拜耳糖化血红蛋白仪等。电话：021-65532080 www.touching.cn

产品介绍：
名称 规格 价格
SS48DS1糖化血红蛋白仪 亲和层析法 35000元
DS5糖化血红蛋白分析仪 离子交换层析法 100000元
Bayer DCA2000+糖化血红蛋白及微量白蛋白尿分析仪 免疫法 60000元
NycoCard Reader II多功能全定量特种蛋白金标检测仪 全定量金标检测仪 30000元

I. 糖化血红蛋白仪器，哪个品牌的好用些，操作简单，耗材低，价位适中，知道的给介绍一下，谢谢

奥迪康糖化血蛋白分析仪，操作简单，价格适中。具体可电话联系0511-88880053

AC6600详细参数

●准确的方法学原理

采用经典准确的方法学原理--离子交换液相层析法，HbA1C分析的金标准，现有测试方法中唯一真正直接分离出HbA1C并通过在线连续测出逐点吸光度，通过积分得出准确面积百分比的分析方法。

●精准分离的4梯度洗脱法

独创的HbA1C四梯度洗脱法，不采用常规的高低浓度混和产生梯度的洗脱方法，而是针对HbA1C采用四种对应浓度试剂梯度洗脱，精准分离糖化血红蛋白。

●高分离度液相层析柱

高分离度液相层析柱，体积为Φ 9mm x 45mm重达2.5克进口树脂，是普通微型层析柱的15-20倍，高达300个测试的高柱效确保测试结果准确。

●高灵敏度415nmLED一体化光度计

高灵敏度415nm LED一体化光度计，波长准确，光源稳定，全铝合金结构，抗干扰能力强，多镜片聚焦，微量比色池，灵敏度高，精确记录分析曲线。

●配套原厂校准品

采用国际规范的量值溯源方法，采用权威的标准质控物质进行数值传递，每套试剂均配2组校准品，可适时校准确保测试结果准确可靠，彻底避免仅靠因数校准带来的仪器个体误差。

●精密的层析柱恒温装置

精准的层析柱及试剂恒温控制装置，确保层析柱及试剂不受环境温度变化的影响，有效保证测试结果的重复性、准确性。

●实时层析图谱，智能化过程监测

先进的嵌入式微处理系统+智能化控制软件，可以实时显示测试曲线，测试过程真实再现，可对测试结果、吸
光度、信号电位、峰值时间和试剂消耗进行监测报警，操作得心应手。
●全自动25位进样盘，批量急诊自由选择

全自动25位盘式进样，无需复杂的条架式进样装置，无需复杂的机内溶血装置，批量自动检测，急诊随时插入。

●全开放结构，合理的流路，低故障，易维护

全开放式结构，全电磁阀流路，无需复杂的样品机械六通旋转分配控制阀，可靠耐用方便维护。

●5μl全血，三步测试，实验室及临床门诊均可使用

5μl 全血，前处理极其简单，只需取血加入溶血剂三步简单操作即可上机测试，静脉全血和手指末梢血均可使用,可适用实验室批量测试，亦可适应临床门诊即时提供检测结果。

●采用气体溶解及气泡排除技术. 全面消除误差

采用独创的试剂溶解性气体消除装置和比色池气泡自动检测排除技术，无需复杂的脱气装置，将气泡对检测结果的影响全面消除。

●糖化浓度、面积百分比、平均血糖同时报告

测试报告同时输出IFCC浓度值、NGSP面积百分比、ADAG平均血糖，满足全球标准化要求，内存1 000个含测试曲线报告，配有RS232通迅接口，可与HIS/LIS系统连接。