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质粒会粘到超滤离心管上吗

发布时间:2021-11-25 01:31:07

① 在质粒提取中如有蛋白质残留会有什么现象如何去除蛋白污染

在质粒提取中如有蛋白质残留,会出现提取的质粒不纯净的现象,加入溶液III可以去除蛋白污染。

质粒抽主要的目的是为了去除RNA,将质粒与细菌基因组DNA分开,然后去除蛋白质及其它杂质,如果去除的不够彻底或者有残留,那么得到的质粒就不会相对纯净。

蛋白质的去除,主要是靠不溶解的 K-SDS-蛋白质复合物的形成。虽然将中和后的体系置于 4C 一段时间,可以形成更多的该不溶复合物,从而使蛋白质残留更少,但实践证明这样做并不是必须的,除非是大量抽提。

只要加入溶液 I 后的悬浮,加入溶液 II 后的裂解及加入溶液 III 后的中和是均匀彻底的,蛋白质的残留就应该在可以满足实验要求的水平;而只有溶液的用量足够,甚至过剩,才能确保裂解和中和是彻底的。当然,试剂盒及苯酚的使用,是可以更进一步降低蛋白质的残留的。


(1)质粒会粘到超滤离心管上吗扩展阅读:

质粒抽提窍门

1、加溶液II(裂解液)后,操作一定要温和,剧烈混合会导致基因组DNA污染。[4]

2、洗脱时60℃温育(Ellution Buffer)洗脱缓冲液或去离子水效果更好。

3、若质粒提取含量低,可增加菌液样或换用ArtMediaPlasmid Culture,其比LB培养基质粒得量高

4、菌体应彻底悬浮 , 如果没有彻底悬浮菌体,则残留的菌体团块在溶液 II 加入后,变成难以完全裂解的团块。这个团块在溶液 III 加入后,会有一部分蛋白质继续存在于溶液中,成为蛋白质残留的最大根源。

5、加入溶液 II 后,混匀,体系最好能立即变得清澈。体系如果变得清澈了,马上加入溶液 III 中和。

6、中和的操作 ,在 1.5ml 离心管中加入溶液 III 后,先颠倒两次,使管底朝上,用指头弹击管底数次,再颠倒混匀。效果非常好。

② 在超净工作台不能加质粒吗

超净工作台不是防静电工作台,加了会是产品变质。所以你还是不要加的好。

③ 真核基因能否用质粒导入会不会因为真核基因太大而不能导入。如果是...

我很无语。。。。。。基因的概念你看没看?!基因是指有遗传效应的DNA片段。。。。。片段啊!大爷!!!。。。。片段能有多长?与整个细胞核比起来小得多了。。。就好像你在地球上一样,能说大么?!载体就是质粒啊!!!。。。。你妹的,你生物经常考D吧??

④ 关于质粒载体转化时如果使用同种质粒载体那么在转化过程中会不会有多个质粒载体进入转化子里呢

会的。在最初的转化时,一个宿主菌内很可能转进去多个载体。
但是最后能在宿主菌中稳定复制并存在的,只有一种载体,或者说,复制子不互相干扰的载体才能稳定共存。

⑤ 质粒的问题

质粒本身就是条DNA 在许多生物上.很多抗性的基因就在质粒上,比如说抗药性什么的,所以他能编码蛋白质 你那插入重组DNA的意思就是把2个DNA连一起

⑥ 提取质粒实验中,质粒最后在离心管里,还是AC柱中,急急急,求神人帮忙

最后?最后是在离心管里啊。 不知道你们用的试剂盒是不是p1 p2 p3那种。加完p3上柱离心之后,质粒就在柱子里,乙醇洗也是洗柱子,晾干。最后洗脱就是把质粒从柱子中洗到管子里,所以最后在管子里咯。

⑦ RT-PCR出一段目的基因,为什么要把它先TA克隆呢为什么不能直接把它连接到相应的质粒上呢

确实可以不一定要TA克隆。

你可以在设计引物的时候在引物的5'端加上酶切位点,比如你选中XXXYYY位点你可以把引物设计为AA-XXXYYY-AGCT(AGCT 代表你原来的引物序列).我一般在头上加2个A,这样酶切效果好一些。两个引物可以加相同,也可以不同酶切位点。取决于2点:
1。扩增区没有该位点,(必须知道你扩增区的序列)
2。对应于你的目标分子。

TA克隆的好处在于选择灵活,万一一个位点不好使,同一批质粒还可以用其他酶再切。随时可以扩增。还有方便下游作业,比如说你要连接两端PCR产物,先克隆会比较方便一些。

所以2种方法各有优缺点,你可以根据情况选用。

⑧ 真核基因会不会因为太大而不能用质粒做载体。如果是用什么做载体

当然不会。
质粒就是一个DNA环,加入真核生物的目的基因,顶多周长长些~

⑨ 质粒连接会出现几种情况

根据题意目的基因和质粒露出的粘性末端是相同的,所以考虑两两结合的情况,可能有目的基因与目的基因相连,形成环状的外源DNA;质粒与质粒相连,形成环状的载体DNA;质粒与目的基因相连,形成重组质粒.
故选:C.

⑩ 基因工程中质粒会整合到基因组上吗

有可能会!

有的质粒上含有转座子,它可以自己单独复制或者断裂下来,环化后插入核区DNA链。

另外,质粒上如果和宿主DNA链有同源区段,也有机会直接发生重组。(就像减数分裂前联会时发生的一样。)

一般细菌想要稳定遗传某个性状,而不是细胞质遗传导致有的质粒没进子细胞的话,一般用后者来实现,相对比较稳定。

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