凝胶过滤多糖

1. 多糖样品做凝胶层析为什么会有多个洗脱峰

多糖样品做凝胶层析为什么会有多个洗脱峰
凝胶层析操作中应注意的一些具体问题.
(1)层析柱的选择
层析柱大小主要是根据样品量的多少以及对分辨率的要求来进行选择.一般来讲,主要是层析柱的长度对分辨率影响较大,长的层析柱分辨率要比短的高；但层析柱长度不能过长,否则会引起柱子不均一、流速过慢等实验上的一些困难.一般柱长度不超过100cm,为得到高分辨率,可以将柱子串联使用.层析柱的直径和长度比一般在1:25－1:100之间.用于分组分离的凝胶柱,如脱盐柱由于对分辨率要求较低,所以一般比较短.
(2)凝胶柱的鉴定
凝胶柱的填装情况将直接影响分离效果,关于填装的方法前面已有介绍,这里主要介绍对填装好的凝胶柱的鉴定.凝胶柱填装后用肉眼观察应均匀、无纹路、无气泡.另外通常可以采用一种有色的物质,如蓝色葡聚糖-2000、血红蛋白等上柱,观察有色区带在柱中的洗脱行为以检测凝胶柱的均匀程度.如果色带狭窄、平整、均匀下降,则表明柱中的凝胶填装情况较好,可以使用；如果色带弥散、歪曲,则需重新装柱.另外值得一提的是,有时为了防止新凝胶柱对样品的吸附,可以用一些物质预先过柱,以消除吸附.
(3)洗脱液的选择
由于凝胶层析的分离原理是分子筛作用,它不象其它层析分离方式主要依赖于溶剂强度和选择性的改变来进行分离,在凝胶层析中流动相只是起运载工具的作用,一般不依赖于流动相性质和组成的改变来提高分辨率,改变洗脱液的主要目的是为了消除组分与固定相的吸附等相互作用,所以和其它层析方法相比,凝胶层析洗脱液的选择不那么严格.由于凝胶层析的分离机理简单以及凝胶稳定工作的pH 范围较广,所以洗脱液的选择主要取决于待分离样品,一般来说只要能溶解被洗脱物质并不使其变性的缓冲液都可以用于凝胶层析.为了防止凝胶可能有吸附作用,一般洗脱液都含有一定浓度的盐.
(4)加样量
关于加样前面已经有所介绍,要尽量快速、均匀.另外加样量对实验结果也可能造成较大的影响,加样过多,会造成洗脱峰的重叠,影响分离效果；加样过少,提纯后各组分量少、浓度较低,实验效率低.加样量的多少要根据具体的实验要求而定：凝胶柱较大,当然加样量就可以较大；样品中各组分分子量差异较大,加样量也可以较大；一般分级分离时加样体积约为凝胶柱床体积的1％－5％左右,而分组分离时加样体积可以较大,一般约为凝胶柱床体积的10％－25％.如果有条件可以首先以较小的加样量先进行一次分析,根据洗脱峰的情况来选择合适的加样量.设要分离的两个组分的洗脱体积分别为Ve1和Ve2,那么加样量不能超过(Ve1－Ve2).实际由于样品扩散,所以加样量应小于这个值.
从洗脱峰上看,如果所要的各个组分的洗脱峰分得很开,为了提高效率,可以适当增加加样量；如果各个组分的洗脱峰只是刚好分开或没有完全分开,则不能再加大加样量,甚至要减小加样量.另外加样前要注意,样品中的不溶物必须在上样前去掉,以免污染凝胶柱.样品的粘度不能过大,否则会影响分离效果.

2. 凝胶过滤分离多糖 多糖样品的浓度范围

多糖样品的浓度在20mg/ml左右

3. 凝胶过滤方法有什么局限性

葡聚糖凝胶对蛋白质往往有不可逆的吸附性能，需先用易得到的蛋白质进行预层析，以便消除其影响(虽然吸附的数量较少，但是在制作测定蛋白质分子质量的标准曲线时，或者分离纯化极难得到的物质时,需预层析)。

4. 凝胶过滤的介质有哪些,各过滤介质的异同是什么

加油，首先，是这样的话
①粒状介质:如焦炭,石砾,细砂,锯屑,活性炭,玻璃渣,酸性白土等;常用于过滤固相含量较少的悬浮液,如水的过滤和糖的脱色等。

5. 怎样用葡聚糖凝胶测定多糖分子量，有原理和过程。

多糖的分子量测定
常用的是凝胶滤过法。将充分膨胀好的SephadexG-200、G-150或G-75湿法装柱，用一定离子强度的氯化钠水溶液进行平衡，然后将各种不同的已知分子量的多糖分别相继上柱，同一离子强度的氯化钠水溶液洗脱，分步收集，苯酚-硫酸法监测，分别求得洗脱体积Ve，然后再将兰葡聚糖（MV>200万）上同一条柱，求出柱的空体积Vo，根据Ve/Vo与logM之间存在着线性关系，可绘制标准曲线。最后，将待测样品按上述不变的条件上柱，求得待测多糖的Ve。通过标准曲线上的Ve/Vo，查得待测多糖的分子量对数，便可求出M。
对于黏度大的多糖，可采用黏度法求得。亦有用蒸汽压渗透法（VPO，基本原理是根据理想溶液的拉乌尔定律，参考文献：崔锡红, 等. 蒸汽压渗透法分析异丁烯的数均分子量. 河南化工. 2001, 1: 32. 骆传环. 蒸气压渗透计测定多糖分子量. 现代科学仪器, 1994, 4:11.）、超速离心法（骆传环, 等. 香姑多糖的分子量测定. 科学技术与工程. 2006, 6(8): 1058~1060）、光散射法（LS，光散射法测定高分子量基于高分子溶液的瑞利散射，垂直偏振光通过溶液产生的不同角度散射光的强度与溶质分子的大小即分子量成正比。参考文献：魏立平, 姜雄平. 光散射法在医学分子生物学中的应用. 国外医学分子生物学分册. 2000, 22(2): 123.）、玻璃纤维纸电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳（原理：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠）， SDS能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂，蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中，与SDS分子按比例结合，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物，这种复合物由于结合大量的SDS，使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异，由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的，因此在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。应用如，将标准相对分子量蛋白质与样品进行SDS-PAGE凝胶电泳，以标准蛋白质的迁移率为纵坐标，lgM为横坐标，绘制相对分子质量曲线。根据样品迁移率得出相对分子质量。）测分子量，黏度法及超滤法估计分子量。利用不同方法测定多糖分子量可以从不同角度对多糖分子量进行确证，同时也是对多糖纯度的考察。在测定过程中要注意标准品的选择，尽量使用与被测多糖结构相似的标准品，因为不同结构的标准品虽然其绝对分子量相同而在一定条件下所表现的分子量会有所不同。
多糖分子量的测定没有一种绝对的方法，其分子量只代表相似链长的平均配比而不是确切的分子大小。往往用不同的方法会得到不同的分子量。
摘自：季宇彬 《中药多糖的化学与药理》人民卫生出版社

6. 如何选择凝胶过滤填料

首先琼脂糖凝胶可以排除，这是大孔凝胶，用于分子量较大的成分。
我做分回子筛用的比答较多的柱子都是葡聚糖凝胶凝胶，我的蛋白比你的大，用g50和g100的填料，做的结果都没什么问题。
你的蛋白7kd，如果没有什么特别的性质（高级结构是球形还是其他的，有无多聚），g50应该可以。如果你不放心，也可以考虑聚丙烯酰胺凝胶，它和葡聚糖凝胶相比更适合于分子量稍小的蛋白，可能更实用于你的实验。
聚苯乙烯凝胶没用过，不发表意见。

7. 凝胶过滤技术有哪些具体应用

凝胶过滤色谱法：分辨率较高，但是上样量仅为柱体积的1%，而且对流速也有严格的限制。内离子交换色谱法：根容据目的蛋白质表面所含有的氨基酸残基带有的净电荷分离蛋白质，但是分辨率没有凝胶过滤高。亲和层析法：根据生物分子的特异性分离目的蛋白，特异性很高，但是配件容易丢失适合含有特异性的标签的或者抗体。疏水色谱：根据疏水性来分离蛋白质,缺点是有的蛋白质在高盐中溶解度降低，所以应用范围受到限制，适合蛋白质表面含有较多疏水性氨基酸残基的疏水性蛋白质。

8. 凝胶过滤 丙烯葡聚糖凝胶 s-100 s-200 s-300

为什么s-100那条线 流速横坐标的时候再上 而样品体积横坐标的时候在下
根据我的理解，因为内这两个测试分辨率容的上样样品是不一样的，一个写的是混合蛋白的样品，一个写的是单纯的卵白蛋白。所以这两个测试图之间没什么关联。只能说明S-100在不同流速时对三个混合蛋白的分辨率高于S-300，而在不同上样体积时对卵白蛋白分辨率低于S-300。

这个填料的100、200、300指代什么
Sephacryl是一种合成柱料，是由烯丙基葡聚与N,N-甲叉二丙烯酰胺共价交联形成的高机械强度的疏水性填料，葡聚糖的组成比例决定了填料孔洞的不同。所以-100，-200，-300在不同的分子量范围时选择性不同，也就是分辨率不同。
具体来说，S-100适合分子量1000~10000的球蛋白。S-200适合分子量5000~25000的球蛋白，S-300适合分子量10000~1500000的球蛋白。

9. 凝结多糖的凝胶多糖发展

凝胶多糖是一种新的微生物多糖，具有很多独特的功能。自1997年美国的专卫生组织批准属凝胶多糖作为食品添加剂以来，凝胶多糖的功能性质在食品工业得到淋漓尽致的体现，而且应用范围不断地扩大。除应用于食品工业外，最近有科学家研究了用凝胶多糖代替葡聚糖作为柱中的填料应用于化工行业，取得了较好的分离效果。
目前国外已开始生产用于此用途的凝胶多糖。在化妆品工业中凝胶多糖作为增稠剂、悬浮剂、稳定剂、保湿剂以及流变性改进剂也很有效，因而可应用于各种类型的化妆品中。据专家分析，凝胶多糖的需求将以30%的速度增长，世界形势处于供不应求的状态。而中国对凝胶多糖的研究还处在认识阶段，离工业化生产还有很长的一段距离，因此加快对凝胶多糖的开发对调整中国的农村产业结构、提高农产品的附加值、增加农民收入有重要作用。

10. 凝胶过滤,凝胶电泳,超过滤的相同点

凝胶过滤,凝胶电泳,超过滤的相同点
。凝胶过滤又称为分子筛，是用一版根柱子里面有填料权，填料是一些粒子，粒子里面有很多的孔，分子比较小的能进入到粒子的孔里面，二分子比较大的就会在粒子旁边流下来。所以用一些蛋白或者是多糖过分子筛，分子大的会先流下来，分子小的后流下来。。。凝胶电泳是运用电泳仪，让蛋白质或者是核酸在凝胶中移动，移动的速率和分子的大小成反比，分子大的跑得慢，分子小的跑得快