A. 抗体fitc与hrp哪个适合做分选
这四个不是一码事，HRP和AP是酶，二抗上挂了酶，要给相应的底物才能显色，显色方式可专以属通过发荧光也可以不发荧光（例如给予ECL底物，其中的H2O2和鲁米诺在HRP的作用下，能在黑暗中发出荧光；也可以给予双氧水和DAB，反应产生棕色不溶于水的物质）；FITC为异硫氰酸荧光素，本身就是黄绿色荧光，二抗结合后可直接在荧光显微镜下观察；生物素一般也是挂在二抗上的，利用卵白素分别连接生物素标记的第二抗体和生物标记的酶，由酶催化底物，生成终产物，这个终产物也是不溶于水的。
B. 荧光抗体FITC和488有什么区别 我知道他们都是绿色荧光，不知道他们还有没有其他的区别
你说的是用来标记抗体的FITC和Alexa 488的区别吧。
488只是激发光（蓝色激光）的波长。FITC和Alexa 488都能专在488 这个波长被激属发而发出绿色激发光。
Alexa488的优点是光线强度大，光褪色少，pH耐受性好
C. 我用FITC标记抗体，不知道哪里出了问题，不显荧光、显肉眼可见橙黄色光，有哪位专家给分析一下原因 谢谢
可能出问题的地方很多：抗原（你的样品）、抗体、标记过程都可能出问题，你需要针对不同环节设置阳性对照一步一步检测。
D. 如何在抗体上标记荧光 透析方法
透析标记法
此法适用于小量抗体的荧光素标记，标记简便，非特异性染色较少。回
(1)试剂和材料答 试剂和材料同改良法。
(2)方法及步骤
①用0．025mol／L碳酸盐缓冲液pH9．0，将欲标记免疫球蛋白稀释成1％浓度，装入透析袋中。
②用同一缓冲液将FITC配成0．1mg／ml的溶液，按10mg／ml球蛋白溶液体积的10倍，将FITC稀释液盛于圆柱形容器内，并使透析袋浸没于FITC液中。
③容器顶端盖紧，底部放搅拌棒，在4~C电磁搅拌下透析标记24h。取出透析袋中标记液，即刻用SephadexG50凝胶过滤，去除游离荧光素，分装，贮存于4℃中。
E. FITC怎样标记抗体
FITC 标记抗体-Chadwick氏法
试剂：
抗体球蛋白溶液、异硫氰酸版荧光素、3%重碳酸钠水溶液、pH8.0的0.01mol/L PBS、1%硫柳权汞；
材料：
离心机及离心管、三角烧瓶（25ml）、冰槽、无菌吸管及毛细滴管、透析袋、玻璃棒、棉线及烧杯（500ml）等；
方法与步骤：
1.
F. 荧光二抗标记用HRP、AP、FITC、生物素法各发什么颜色荧光
这四个不是一码事，HRP和AP是酶，二抗上挂了酶，要给相应的底物才能显色，内显色方式可以通过发容荧光也可以不发荧光（例如给予ECL底物，其中的H2O2和鲁米诺在HRP的作用下，能在黑暗中发出荧光；也可以给予双氧水和DAB，反应产生棕色不溶于水的物质）；FITC为异硫氰酸荧光素，本身就是黄绿色荧光，二抗结合后可直接在荧光显微镜下观察；生物素一般也是挂在二抗上的，利用卵白素分别连接生物素标记的第二抗体和生物标记的酶，由酶催化底物，生成终产物，这个终产物也是不溶于水的。
G. DAPI和FITC标记的荧光抗体可以同时在荧光显微镜下观察到吗
DAPI和FITC标记的荧光抗体可以同时在荧光显微镜下观察到
DAPI能快速进入活细胞中与DNA结合，内因此DAPI对生物体而言，也被视容为一种毒性物质与致癌物。 CM-Dil是标记细胞膜的,而DAPI是标记细胞核的可以是活细胞,一人做兔子的膀胱肿瘤，他说在14天的时候很强，21天的时候比较弱，再长的时间就没有检测过。
H. 荧光素fitc标记抗体的方法 是什么方法
免疫荧光技术是将荧光素如异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)与相应抗体（或抗原）以化学的方法结合，将荧光标记抗体（或抗原）与标本中相应的抗原结合形成荧光标记的抗体- 抗原复合物，用荧光显微镜观察。在镜下见到有荧光存在即推断有抗原抗体复合物的存在，根据已 知的抗体（或抗原）即可推知另一个未知抗原（或抗体）的存在。
直接免疫荧光法直接免疫荧光法是利用荧光色素标记的特异性抗体直接与相应的抗原结合，以鉴定未知抗原。本法具有操作简单、时程短、特异性高的优点，但也 存在缺点如不能检查抗体，敏感性较差。
（1）在标本上滴加荧光素标记抗体，放入湿盒中。37℃温育30min。
（2）PBS 冲洗后，再用PBS分三缸浸泡，每缸3min。
（3）PBS浸泡1～2min，风干。
（4）缓冲甘油封片。在荧光显微镜下观察。
进行直接免疫荧光法时应注意：①温育时一定要将玻片放在湿盒中，以防液体蒸发。②用PBS浸泡时应不断振荡。
2. 间接免疫荧光法间接免疫荧光法以荧光素标记抗球蛋白抗体，抗体与相应抗原结合后，荧光标记的抗球蛋白抗体与已结合的抗体发生作用，从而推知抗原或抗体的 存在。间接荧光技术可以用已知的抗原检测未知的抗体，也可用已知的抗体测出未知抗原。现以检测流行性热病毒抗体（IgM）为例介绍如下：
（1）将待测病人血清加至抗原片（流行性热病毒感染的Vero-E6细胞片）上，每个稀释 度加2孔，最后2孔加PBS做对照。将玻片放置湿盒中，37℃温育 60min。取出玻片，弃去反应液，用PBS洗涤5min，风干。
（2）加入1∶40稀释的FITC标记的羊抗人IgM，37℃温育60min。取出玻片，按步骤2洗涤，风干。
（3）PBS甘油封片，荧光显微镜下观察。阳性结果：在细胞膜及细胞质中可见颗粒状荧光颗粒，细胞核 呈红色。
注意事项：温育时将玻片放在湿盒中，以防液体蒸发。选择低温、干燥、洁净的环境风干。
I. FITC标记的二抗是绿荧光还是红荧光
5mmol#47。
(3)抗原抄对照?
参考见解。因未免疫动物袭的血清中无特异性抗体:标本直接滴加二抗:标本加同种动物的未免疫血清:最好是同一视野在未用荧光激发下进行对照:如果你做的是石蜡切片免疫组化，看是否非特异性染色，应呈阴性反应(1)你的二抗是用FITC标记的，目的是使DNA变性;2N盐酸需要使用，呈阴性反应，如果是用过氧化物酶做标记.0-9，为避免荧光分解，后者能使玻片透明，分装及荧光显微镜观察时均要避光，在加抗免疫球蛋白荧光抗体;L pH9，这个对照必须有。
做间接法免疫荧光染色，目的是看自发荧光，以PBS冲洗后，如何设置对照.5的碳酸氢盐缓冲液;
(3)关于免疫酶染色。
(2)阴性对照，脱蜡后直接在荧光显微镜下观察，就必须用3%H2O2以去除内源性过氧化物酶。
(1)空白对照，让Br抗体能够充分地与已经掺入的Br结合;
(2)封片最好用甘油加0
J. 如何用FITC荧光素标记细菌（细菌，荧光素标记
免疫荧光技术是将荧光素如异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)与相应抗体（或抗原）以化学的方法结合，将荧光标记抗体（或抗原）与标本中相应的抗原结合形成荧光标记的抗体- 抗原复合物，用荧光显微镜观察。在镜下见到有荧光存在即推断有抗原抗体复合物的存在，根据已 知的抗体（或抗原）即可推知另一个未知抗原（或抗体）的存在。直接免疫荧光法直接免疫荧光法是利用荧光色素标记的特异性抗体直接与相应的抗原结合，以鉴定未知抗原。本法具有操作简单、时程短、特异性高的优点，但也 存在缺点如不能检查抗体，敏感性较差。（1）在标本上滴加荧光素标记抗体，放入湿盒中。37℃温育30min。 （2）PBS 冲洗后，再用PBS分三缸浸泡，每缸3min。（3）PBS浸泡1～2min，风干。（4）缓冲甘油封片。在荧光显微镜下观察。进行直接免疫荧光法时应注意：①温育时一定要将玻片放在湿盒中，以防液体蒸发。②用PBS浸泡时应不断振荡。 2. 间接免疫荧光法间接免疫荧光法以荧光素标记抗球蛋白抗体，抗体与相应抗原结合后，荧光标记的抗球蛋白抗体与已结合的抗体发生作用，从而推知抗原或抗体的 存在。间接荧光技术可以用已知的抗原检测未知的抗体，也可用已知的抗体测出未知抗原。现以检测流行性热病毒抗体（IgM）为例介绍如下：（1）将待测病人血清加至抗原片（流行性热病毒感染的Vero-E6细胞片）上，每个稀释 度加2孔，最后2孔加PBS做对照。将玻片放置湿盒中，37℃温育 60min。取出玻片，弃去反应液，用PBS洗涤5min，风干。（2）加入1∶40稀释的FITC标记的羊抗人IgM，37℃温育60min。取出玻片，按步骤2洗涤，风干。（3）PBS甘油封片，荧光显微镜下观察。阳性结果：在细胞膜及细胞质中可见颗粒状荧光颗粒，细胞核 呈红色。注意事项：温育时将玻片放在湿盒中，以防液体蒸发。选择低温、干燥、洁净的环境风干。