反相为什么不用纯水

A. 我的液相C18反相柱，用纯乙腈冲洗的压力由开始的3、4MPa上升到现在的20几MPa，怎么回事急需解救！

如果你接其他的柱子没有问题的话，肯定是你的柱子之前的盐没有冲洗干净导致盐结晶了。盐用有机相是冲不掉的，只能用水冲，但是像这种反相柱不能用纯水冲，纯水会溶解硅胶，导致相坍塌。

你可以视情况改变有机相与水的比例来冲。一般可用5%的甲醇溶液小流速冲洗。 不行就反冲吧。

希望对你有帮助，望采纳！！

B. 反相与正相色谱法有什么区别

反相还是正相，是根据流动相相对于固定相的极性而言的。 流动相极性强于固定相的，称作反相色谱；流动相极性弱于固定相的，称作正相色谱。

反相色谱流动相的极性强，容易带着极性分子走，而留下非极性分子。这主要用于非极性样品的分离。常用的高压液相色谱都是这种，也有人喜欢说反相液相色谱，其实是一个意思，就是显得博学一点。

正相色谱固定相极性强，容易把极性分子留下，故主要用于极性样品的分离。如离子色谱。

实际应用好像没有太注意正相还是反相，倒是都很注意柱子能承受什么样极性的物质。反相液相色谱柱不可以用强极性的纯水，都是要加入至少5%的有机溶剂来弱化水的极性。 正相的离子色谱柱则坚决不可以进入有机物质。但是气相色谱实际也是一种正相色谱，却往往要求不可以有水进入。

C. 反相柱怎么过

反相柱的具体操作方法如下：

1、基本操作和硅胶柱相同，湿法装柱好些，匀浆液用甲醇。

2、流动相基本是水、有机相混合物，有机相可选择甲醇、乙腈、乙醇等。不能使用乙酸乙酯，氯仿，正己烷等正相溶剂。一般C18填料怕碱，多数C18填料使用pH范围2-8。慎用三乙胺，氨水之类的改性剂。流动相可加0.1%三氟乙酸或醋酸改善拖尾。

3、梯度洗脱从高水相开始，但有机相比例不低于5%，最好不要用纯水，有机相比例越高越容易洗脱。

4、洗脱结束用纯有机相，如纯甲醇冲洗。

5、使用后的填料不要干燥，保存在纯甲醇里，也方便下次装柱。

硅胶基质键合反相柱的清洗：

再生被污染HPLC柱子的关键是知道污染物的性质并且能找到适当的溶剂来去除。如果污染是因为重复进样时强保留物质的累积引起的，利用简单的清洗步骤来除去这些污染物往往就能恢复其色谱性能。

经过等度运行后的色谱柱，有时用90～100％含量的溶剂B（双溶剂反相系统中洗脱能力较强的溶剂，如甲醇、乙晴、四氢 呋喃等）冲洗20个柱体积可以清除污染物（色谱柱的柱体积和空柱管体积概念不同，一根4.6x250mm柱子的柱体积只有2.5ml，2.1x150mm的是0.28ml）。

如果使用的是缓冲盐系统，不要直接切换到强溶剂，突然转换到高浓度有机溶剂可能会使HPLC流动体系中的缓冲盐沉淀，这样会导致更大的问题，如柱头筛板堵塞、连接管路堵塞、泵泄漏、活塞损伤或进样阀转轴失灵。应该先用无缓冲盐流动相（即把缓冲液换成水），冲洗5～10个柱体积以后才切换到用强溶剂清洗。

有时候，强溶剂B也没法把残留在色谱柱上的污染物洗掉。那么就需要用更强的溶剂或者是系列溶剂组合。如果污染物不是生物质的，一种强溶剂或几种溶剂组合清洗基本能解决问题。柱子生产厂家的网页和产品说明书上很多也有清洗方法推荐。

D. 那些HPLC色谱柱可以用纯水

你问的应该是反相色谱抄柱，因为凝胶过滤用纯水相是司空见惯的。
Agilent的Bonus系列，Aichorm的Aqua系列，都是可以做纯水相的。
但你如果只是考虑梯度起点的高水相比例，那就不必了，普通的C18、C8都可以用纯水相短时间冲洗，不超过10个柱体积，是没什么问题的。

E. 在冲洗高效液相C18反相柱的时候，为什么不能用纯水

相C18色谱柱（即憎水柱子）如果用纯水冲洗后，如果立即停泵则由于其憎水（疏水专）的缘故使得柱子内属的水因而流失掉，长时间停泵使得柱子干掉（变干），会造成柱子内固定相填料表面键合的硅烷基结构塌陷（也说成是失去支撑倒下），柱子就这样报废了。那么一旦冲洗柱子用了纯水相怎么办呢？诶！不要惊慌，只要你不停泵，上述情况不会立即发生，我们只要保证最后用有机相冲洗柱子，停泵后使柱子内留存的是有机相，就无大碍，

F. 何为正相色谱及反相色谱在应用上有何特点

正相色谱基本上可以看作液固吸附色谱。其柱填料为吸附剂，表面有活性吸附点。溶剂和溶质分子可以吸附在活性中心。反相色谱是流动相极性大于固定相极性的色谱。

反相色谱的应用特点：反相介质性能稳定。分离效率高，它能分离蛋白质、肽、氨基酸、核酸、甾体、脂类、脂肪酸、碳水化合物、生物碱等含有非极性基团的物质。

正相色谱法的应用特点：全多孔型的微球型或无定型硅胶，然而，球形硅胶更适合于有效分离。用球形硅胶填充的正相柱具有较好的渗透性、较低的操作压力和较好的稳定性。

(6)反相为什么不用纯水扩展阅读：

反相色谱中最常用的有机溶剂有甲醇和乙腈。此外，乙醇、四氢呋喃、异丙醇和二氧六环等常用作改性剂。有机溶剂的梯度也会影响分辨率。梯度越小，分辨率越大。

正相色谱的保留机理类似于吸附过程。极性样品分子和溶剂分子吸附在柱填料表面的极性基团（吸附剂）上。对于常用于正相的氰基、氨基或二醇基固定相柱，吸附中心通常为键合配体或硅烷。在使用硅胶时，吸附位点为硅烷醇(一SiOH)。

G. 液相色谱里面能只用水做流动相吗

这个得看你的色谱柱。
一般的反相色谱柱不耐纯水。如果用的话会特别费。专
我当初做过属一个实验，流动相是0.025mol/L的KH2PO4，色谱柱是C18柱，大概半个月换一根吧。
特殊的色谱柱可以耐受纯水，但是可能分离效果不好，峰型也不一定好。

另外，纯水很 容 易 长微生物。一般纯净水开瓶之后在25℃放置1天，过滤的速度就会缓慢，放三天就浑浊了。如果你的流动相是纯水，那么系统、色谱柱很容易堵塞。所以不建议使用。

H. 苯基键合硅胶色谱柱柱为什么不能用纯水冲洗

这个问题比较难回答。因为注意的东西比较多，比如：
首先是色谱柱的方向问题。大多数色谱柱会标明方向。这个傻子都知道，安装的时候要顺着方向安装。不过也有一些色谱柱没有方向，这些是双相填料的色谱柱。第一次使用时的方向就是它的方向。不过所有的色谱柱都是，一旦开始使用，就不要转换方向。这样会损毁色谱柱。
第二个是柱压问题。一般的色谱柱压力最好不要超过20MPa，压力过高会加速损毁色谱柱。
第三，柱温。色谱柱温度最好不要超过45℃。也是会加速损毁色谱柱。
还有pH值。色谱柱的pH值范围是不同的。大多数色谱柱的pH值范围是4-7左右。有些偏向酸性，有些偏向碱性的，还有一些pH值广泛的。这些按照说明书操作即可。

除此之外，色谱柱还有别的一些需要注意的事情。
首先，键合硅胶色谱柱分成几种。比如C18、C8、苯基柱这些的使用方法都差不多。是反相色谱柱。它们的流动相中还有大量的水，还有无机盐。这个时候需要注意，无机盐是不能够长时间留在色谱柱里面的。色谱柱最好保存在纯甲醇或者纯乙腈里面。但是无机盐不能溶于纯甲醇或者纯乙腈。所以中间要过渡甲醇水或者乙腈水。
而有些色谱柱比较特殊，比如氨基柱、氰基柱。他们是可以用于正相，也可以用于反相。所以使用的时候注意区分。配置流动相的时候也避免使用大量的水相。

其他的暂时想不到。或者说你想问的问题可以提出来，大家讨论讨论。

I. 为什么水是反相液相色谱中最弱的洗涤溶剂

极性 溶解度参数
水 10.2 21
甲醇 5.1 12.9
乙腈 5.8 11.8
四氢呋喃 4.0 9.1
反相色谱柱，就是固定相是非极性的，流动相是极性的。流动相极性越强（溶解参数），则洗脱能力越差。网络下原理吧，叫疏溶剂作用，不是很好理解。

J. 何谓正相色谱和反相色谱在应用上有什么特点

反相还是正相,是根据流动相相对于固定相的极性而言的.流动相极性强于固定相的,称作反相色谱；流动相极性弱于固定相的,称作正相色谱.
反相色谱流动相的极性强,容易带着极性分子走,而留下非极性分子.这主要用于非极性样品的分离.常用的高压液相色谱都是这种,也有人喜欢说反相液相色谱,其实是一个意思,就是显得博学一点.
正相色谱固定相极性强,容易把极性分子留下,故主要用于极性样品的分离.如离子色谱.
实际应用好像没有太注意正相还是反相,倒是都很注意柱子能承受什么样极性的物质.反相液相色谱柱不可以用强极性的纯水,都是要加入至少5%的有机溶剂来弱化水的极性.正相的离子色谱柱则坚决不可以进入有机物质.但是气相色谱实际也是一种正相色谱,却往往要求不可以有水进入.