Ⅰ wesrerm牛奶封闭的作用
每个人口腔内后边大牙的咬合面(咀嚼食物的一面)是凹凸不平的,凹陷的部位就叫窝沟。如果发育不好,这些窝沟非常深,食物和细菌嵌塞进去,很容易发生龋齿(也叫“虫牙”,“蛀牙”),医学上称这种龋为窝沟龋。根据口腔流行病学调查,我国青少年90%以上的龋发生在窝沟部位。“六龄齿”就是窝沟龋的好发部位,它是萌出时间最早的恒磨牙,其咀嚼功能最强大,也最容易发生龋病,甚至造成过早脱落,所以保护儿童的第一恒磨牙很重要。窝沟封闭是预防恒磨牙窝沟龋的最有效方法。
Ⅱ southern blot 牛奶封闭液如何配置
Southern Blot 为什么要配牛奶封闭液啊?是最后孵育的一部要加抗体吗?
如果是封闭抗体的话,一般就配5%的脱脂奶粉,5%多半指的是个g/100ml。也就是5g奶粉,100ml水的比例,完全溶解即可。如果担心牛奶里面有小颗粒没有溶解,可以用0.22um的膜过滤一下,防止有颗粒在膜上形成斑点的背景。
Ⅲ wb封闭用的牛奶还能再稀释抗体吗
封闭及稀释抗体最好用脱脂奶。
wb封闭用的还能再稀释抗体,但是效果会变差。不值得浪费你的时间还抗体等试剂,脱脂奶很便宜(比较抗体而言)。
建议另用新鲜配置的。
建议在配制封闭液(脱脂奶加缓冲液等)时 多配点,到足够封闭和稀释抗体用的,分开使用为好。
Ⅳ 做WB为什么用牛奶封闭能显出来 用BSA就显不出来了
在蛋白印迹 WB 实验的封闭环节,我们经常疑惑该用脱脂牛奶还是牛血清白蛋白(BSA)来封闭,这两种封闭稀释液对实验有什么影响?
首先,我们需要了解封闭的目的:减少因非特异性结合而产生的背景。其次,我们需要知道 BSA 和牛奶的区别:BSA 仅由一种蛋白组成,即 60 kDa 的牛血清白蛋白;而牛奶则由许多大小不一的蛋白构成。
所以,CST (Cell Signaling Technology) 推荐牛奶封闭最佳,因为牛奶有更大的机会来减少更多的非特异性结合。我们建议您用经 TBST 稀释的 5% 牛奶,在室温下摇晃一小时,来封闭CST所有非偶联一抗,这包括磷酸化特异性和总抗体。
现在,曾有同学问过,“牛奶中的磷酸酶会怎么样?” 或许有一些文章反对使用牛奶来检测磷酸化信号,这一误区的出现可能是由于实验者使用了非实验级奶粉引起的(国内许多奶粉含有磷酸酶等杂质),但在 CST 的所有内部检测中,科学家们进行了多次蛋白印迹实验,从未发现任何这样的问题。CST建议转膜后迅速在TBS中洗涤膜几秒,以便移除残留的转膜缓冲液,随后使用5%脱脂牛奶(请使用实验级的#9999)的TBST室温封闭1h。另外,CST科学家们每天至少要新鲜配制一次牛奶,有时甚至一天配制多次,因为如果牛奶缓冲液放置了一周、两周甚至更长时间不使用,那么磷酸酶影响信号的机率将会增加。
上图是(Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb) #13038 用来检测经 PDGF 处理的 3T3 细胞裂解物的结果图片。左侧膜是用牛奶封闭,右侧膜用 BSA 封闭。显然,用 BSA 封闭的膜的背景更高。但用牛奶封闭膜时,磷酸化信号仍然很强且清晰。
封闭后,请仔细查看一抗的说明书,根据推荐的一抗缓冲液来稀释一抗,一般推荐牛奶或 BSA,但取决于不同抗体。
Ⅳ western blot中封闭起什么作用
一般使用脱脂牛奶来封闭,目的是要将除目的蛋白外其他无结合蛋白位置封闭起来,防止后面一抗非特异性结合产生较深背景。
Ⅵ 封闭液为什么用TBST而不是双蒸水溶解牛奶
封闭液为什么用TBST而不是双蒸水溶解牛奶
润滑脂是将稠化剂分散于液体润滑剂中所组成的一种稳定的固体或半固体产品,其中可以加入旨在改善润滑脂某种特性的添加剂及填料。润滑脂在常温下可附着于垂直表面不流失,并能在敞开或密封不良的摩擦部位工作,具有其它润滑剂所不可替代的持点。因此,在汽车和工程机械上的许多部位都使用润滑脂作为润滑材料。
Ⅶ western牛奶封闭液怎么配
推荐用TBST进行稀释获得5%的牛奶封闭液(5g/100mL)。
拓展:
一、牛血清白蛋白(BSA),又称第五组分,是牛血清中的一种白蛋白,包含583个氨基酸残基,分子量为66.430 kDa,等电点为4.7。牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用,例如在western blot中作为Blocking agent;在酶切反应缓冲液中加入BSA,通过提高溶液中蛋白质的浓度,对酶起保护作用。防止酶的分解和非特异性吸附,能减轻有些酶的变性,能减轻有些不利环境因素如加热,表面张力及化学因素引起的变性。
二、用途说明
1、 在酶切反应缓冲液中加入BSA,通过提高溶液中蛋白质的浓度,对酶起保护作用。防止酶的分解和非特异性吸附,能减轻有些酶的变性,减轻不利环境因素如加热,表面张力及化学因素引起的变性的。
2 、ELISA中也常常用到,比如封闭液,样本稀释液,酶结合物稀释液都可以用BSA。
3、生化研究,遗传工程和药物研究。
Ⅷ ELISA实验的封闭剂(5%脱脂奶粉)为什么要用PBS配制用去离子水配的话会有什么影响
蛋白要在一定的盐离子条件下才稳定,如果你直接用去离子水配封闭液,包被的蛋白可能会有影响.如果觉得用PBS麻烦,可以用生理盐水.
Ⅸ wb牛奶封闭太久会怎么样
不可以。一是有的保温瓶的内胆不适合装出了水以外的任何液体,容易起反应二是牛奶入锅装在保温瓶里超出一定的时间就会发酵变质。
Ⅹ elisa封闭液怎么配
推荐用tbst进行稀释获得5%的牛奶封闭液(5g/100ml)。
很多人的经验是:脱脂牛奶封闭后背景比较干净,而检测磷酸化蛋白则用bsa(因脱脂牛奶含有较多的磷酸化蛋白,会干扰的)