chelex100树脂

⑴ 10%chelex-100溶液怎么配，我配的为什么溶不了，请做过的朋友详细讲一下

Chelex-100是一种树脂，本来就无法溶解到水中的，用它来提DNA的时候，主要是能吸附一些干扰离子，用水配的目的是：让小颗粒吸水溶胀，变成小微球。
所以，你不用费力去把它溶解了，这是没有必要的。

⑵ 枕巾被单枕套上面能提取到dna吗

(一)Chelex100法
原理：Chelex100是一种螯合树脂，由苯乙烯、二乙烯苯共聚体组成，含有成对的亚氨基二乙酸盐离子，起着螯合基团作用，对多价金属离子有极强亲和力。在低离子强度、碱性及100℃煮沸条件下，可以使细胞膜裂解，并使与DNA结合的蛋白质变性，DNA游离。检材基质中一般含有大量金属离子，在低离子强度及加热条件下，金属离子可以辅助脱氧核糖核酸酶降解DNA，也可以抑制PCR反应，所以在提取DNA时，加入Chelex100，螯合了金属离子，防止了DNA降解，提高了PCR扩增成功率。

方法：剪取适量血斑、精斑、汗斑、鼻涕斑、指甲、毛根、软组织等等生物检材，置于0.5ml离心管内，加入适量纯水，室温浸泡，13,000rpm离心5min，上清丢弃，管底留约20μl左右液体及检材基质，加入100-200μl 5%Chelex100(有时需加适量PK)56℃15min至数10小时不等，100℃8min，13,000rpm离心5mim，上清备用。

评述：
1、 Chelex100法已经成为DNA提取的基本方法，Chelex100法是万能的。目前，我们一切纯化方法都在Chelex100法的基础上进行，Chelex100法又不是万能的。
2、 Chelex100法提取前的检材清洗非常重要，因为现场检材往往均较脏，脏东西可以抑制PCR反应，所以往往不止清洗一次，清洗检材时可能损失部分DNA。所以应平衡清洗抑制剂与损失DNA之间的关系。特别强调清洗时应“把根留住”，很多情况下已知样本DNA检验失败的原因是把根没有留住。DNA检验时还有另外一句名言：“一个萝卜一个坑”，防止混乱检材。肝素抑制PCR反应，血红素抑制PCR反应，所以长时的浸泡、多次清洗往往可能洗除肝素及血红素。在已知样本多次无检验结果疑为肝素抗凝的情况下，多洗是检验成功所必须的。血红素对普通Taq酶的抑制作用是明显的，而目前mtDNA扩增一般用普通Taq酶，所以同一样品除进行STR检验外尚需进行mtDNA检测时，尽量去除干净血红素，显得尤为重要。现场提取毛发或样本毛发，用毛根进行STR检验时，纯水清洗也非常重要，如果没有清洗干净，毛根DNA本身很少，很易检出为混合型。因为现场毛发及样本毛发很易粘附另一人成份。毛根清洗的特点为振荡洗涤，不离心，多换水。
3、 清洗后检材中加入5%Chelex100量视检材而定。检材参考加入量
0.5×0.5cm血斑 150ul-200ul
二步法精斑 100ul
毛根 10ul
烟头 30-50ul
4、 对于组织，难溶检材，有疑问检材，均可加入终浓度为100ug/ml左右PK，有时间隔一段时间，补加适量PK，PK(蛋白水解酶K)作用最佳pH为8.0。
5、加入Chelex100后，56℃浸泡时间，血斑≥15min;组织≥30min，二步法精斑≥1h。
6、PCR扩增前应离心。PCR扩增时不应吸入Chelex100，因为Chelex100为PCR抑制剂。
7、Chelex100使用浓度5%，有些人用10%，有些人用20%，各人爱好。配制好5%Chelex100 pH应在10—11之间，否则应丢弃，不应人为调整Chelex100悬液pH值。

(二)有机法
原理：有机法提取DNA一般是指用平衡酚(又叫饱和酚)、氯仿等按不同比例混合，采用不同方法提取DNA。DNA易溶于水，不溶于有机溶剂，蛋白质分子表面带有亲水性基因，很容易进行水合作用，并在表面形成一层水化层，使蛋白质分子能够顺利地进入到水溶液中，形成稳定的胶体溶液。在有机溶剂存在的情况下，破坏了蛋白质胶体溶液的稳定性，使蛋白质变性沉淀，离心后，有机溶剂于试管底层(有机相)，DNA继续稳定的存在于上层水相，蛋白质沉淀存在于两相之间。水相中的DNA在大量冷无水乙醇及单价阳离子存在的情况下，水会溶于乙醇中，而DNA从水相中析出，沉淀，通过离心回收。有机法中常用试剂为平衡酚、氯仿，酚及氯仿作用是使蛋白质变性，氯仿的另一作用是有助于水相与有机相分离，并抽提溶于水中(有时达12%)的酚。平衡酚、氯仿及乙醇，三者互溶。
方法：剪取适量检材，置于0.5ml离心管内，清洗方法同用Chelex100法提取DNA，加入适量纯水及终浓度为100μg/ml PK，37℃-56℃孵育15min至数10小时，有时间隔一段时间补加适量PK → 13,000rpm 5min→吸上清于另一管→ 加入等体积平衡酚→振荡或颠倒彻底混匀→13,000rpm 5min→吸上清水相于另一管，加入等体积1：1混合平衡酚：氯仿→振荡或颠倒彻底混匀→13,000rpm 5min→吸上清水相于另一管→加入等体积氯仿→振荡或颠倒彻底混匀→13,000rpm 5min→吸上清水相于另一管→加入2.5倍体积冷无水乙醇冷冻保存10min以上 →13,000rpm 5-10min→弃上清→室温凉干或100℃ 5min烤干→加入10-20μl纯水→室温溶解或100℃5min帮助溶解→离心上清备用
评述：
1、有机法是经典DNA提取方法，目前国内外仍大量采用，其提取DNA特点为双链，纯度高。
2、有机法缺点是应用有毒有机试剂，对人体有害，污染环境；多次换管，容易引起检材污染及编号混乱。有机法提取DNA的另一个缺点是不能去除某些染料，血红素等，而这些恰好是PCR抑制剂。

⑶ 重金属形态的研究方法

从狭义上讲，水、土中重金属形态研究，指的是从分析化学的角度出发，去研究如何区别和测定在水、土壤环境中重金属的不同形式，并利用这种形态分析去研究环境问题。重金属形态的研究与分析方法目前尚无统一的划分标准和分析程序，常根据研究的具体要求和实验条件而定。通常使用阳极溶出法，0.45μm滤膜分离，Chelex-100树脂柱和紫外光照一系列处理技术，可将重金属区分为溶解态与颗粒态两大类（用0.45μm孔径滤膜）。在溶解态重金属中再区分为不稳定态和稳定态、离子态和胶体态、有机态和无机态；把颗粒态重金属再区分为可换态、碳酸盐结合态、铁锰氧化物态、成硫化合物和有机质结合态以及残渣态等。国外有人将水体中Cu、Pb、Zn、Cd溶解态分离出9种形态。我国松花江和湘江等河流进行了重金属的形态研究，弄清了上游与下游河段的Cu有不同存在形态。

⑷ 论文翻译~

材料与方法
从Sierra Madre当地渔民用电捕捞、扫网、海滩围网、钓捕或手捉技术采集的鳟鱼中抽取腹鳍组织样(2mm2)。我们能采到20世纪50年代首次被认为有鳟鱼栖息的几座高山灌渠内的干涸河床中栖息的鳟鱼(R.R.Miller,个人通讯；图1插图)。由于难以进入采样区，即使可进入的地点采集到的鱼的数量也很有限，所以这些种群多数样本容量较小。这些腹鳍组织用空气干燥并运回室内做DNA分析。全基因组DNA用Chelex-100树脂(BioRad公司)或Purgene (Gentra Systems公司)遵照Nielsen、Gan和Thomas(1994)及制造商给出的方法进行提取。测定了墨西哥鳟鱼的13个微卫星扩增的质量及全等位基因多样性(表1)。 把这些结果同美国西南部其他鳟鱼种群相同基因座发现的等位基因多样性相比较(附1)。该比较把发现的墨西哥鳟鱼等位基因多样性放入标记物中来比较它们和其他南方鳟鱼种群中发现的等位基因的关系，并允许我们来鉴定墨西哥鳟鱼微卫星多样性分析中合适的基因座。
由于使用标准PCR法难以获得Rio Mayo鳟鱼一致性的结果，这些分析中排除了2个基因座 (One? 和Ssa14)。采用11个高度多态性基因座 (Omy2、Omy27、Omy77、Omy207、Omy325、One?、One- ?1、Ots1、Sfo8、Ssa85和Ssa289)扩增法测定了12个墨西哥鳟鱼种群 (表2) 的微卫星等位基因多样性。微卫星扩增步骤见Nielsen、Crow和Fountain (1999) 及Nielsen和Fountain (1999)，除了在USGS-BRD分子生态实验室我们使用LI-COR Long Reader 4200型自动测序仪和3.00版本的Gene ImagIR软件来可视化和测定微卫星等位基因的大小。我们实验室对所有基因座使用ABI 373型自动测序仪和LI-COR型自动测序仪获得结果之间的等位基因进行标准化。这些结果提供给需要的作者们。

⑸ 自然界金属存在的形态

概念：重金属形态是指重金属元素在环境中的某种离子、分子或其它结合方式存在的物理-化学形式。如铜在水溶液中可能以7种溶解的形态存在：Cu2+、CuCO30、Cu(OH)20、CuOH+、Cu(OH)22+、CuHCO30、Cu(CO)22-等；大气中的汞可有元素汞、无机汞（如氯化汞）和有机汞（如甲基汞）等不同化学状态。
分类：重金属形态包括元素具体存在的物理的聚集状态（physical state）（气态、液态、固态）和化学的（原子、分子的）结合方式（chemical species）。金属的形态与其来源和进入水体后与水中其它物质可能发生的相互作用有关，不同的形态表现出不同的生物毒性和环境行为。
研究方法：从狭义上讲，水、土中重金属形态研究，指的是从分析化学的角度出发，去研究如何区别和测定在水、土壤环境中重金属的不同形式，并利用这种形态分析去研究环境问题。重金属形态的研究与分析方法目前尚无统一的划分标准和分析程序，常根据研究的具体要求和实验条件而定。通常使用阳极溶出法，0.45μm滤膜分离，Chelex-100树脂柱和紫外光照一系列处理技术，可将重金属区分为溶解态与颗粒态两大类（用0.45μm孔径滤膜）。在溶解态重金属中再区分为不稳定态和稳定态、离子态和胶体态、有机态和无机态；把颗粒态重金属再区分为可换态、碳酸盐结合态、铁锰氧化物态、成硫化合物和有机质结合态以及残渣态等。国外有人将水体中Cu、Pb、Zn、Cd溶解态分离出9种形态。我国松花江和湘江等河流进行了重金属的形态研究，弄清了上游与下游河段的Cu有不同存在形态。
重金属危害：水体中重金属的污染的程度与对生物危害的作用，与其存在形态的不同有直接关系；重金属污染对生物活性及毒性的影响大小，决定于其中影响最大的某种形态的含量（或浓度），所以重金属形态研究与分析水体中重金属的迁移转化、生物效应是非常重要的内容。近年来，正发展一种用计算机程序，根据热力学平衡，计算重金属在天然水体中存在的各种形态及其占总浓度的百分比；还考虑了吸附、沉淀及挥发等多相平衡的问题。