① 超滤离心管用材要求
② 如何用蛋白浓缩管
选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,最常见的是Ultra-15(10kD)。
通常应回截留分子量答不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同。
新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
(2)8kDa的超滤膜扩展阅读:
超滤浓缩离心管,最新推出专利产品Hydrosart膜2K型,具有极低的蛋白吸附特性,高流速、高通量,是免疫球蛋白浓缩和脱盐的理想用膜。
备有四种材质的超滤膜:聚醚砜、三醋酸纤维素、再生纤维素和Hydrosart,可根据不同要求灵活选用;两种回收浓缩液的方法:既可用吸管直接吸取并回收,又可将离心管放入离心机反甩,将浓缩液甩入回收帽中,加盖保存。这两种方法都可使浓缩液达到近乎完全回收;
③ 蛋白浓缩管节流范围
选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,最常见的是Ultra-15(10kD)。
通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的三分之一,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同
④ 8KDa蛋白在SDS-PAGE电泳时分离胶的浓度该选择多大
聚丙烯酰胺凝胶浓度与蛋白质分离范围的关系:
聚丙烯酰胺凝胶浓度/% 蛋白质分离范围/kd
5 36—200
7.5 24—200
10 14—200
12.5 14—100
15 14—60
浓缩胶浓度低;分离胶浓度高于浓缩胶,一般不小于5%。
8KD的蛋白质可能就要用Tricine–SDS-PAGE系统,因为浓缩胶和分离胶浓度太大,电泳速度很忙,很可能引起电泳带弥散。
⑤ 选择分离60KDa 的蛋白选择什么种类的超滤膜想让蛋白留在浓缩液里
那就是浓缩,如果要提高回收率用10K的超滤膜
⑥ 用超滤膜(3kDa)抽滤后,如何收集滤膜上的高分子物质
这个只能清洗了,就看你截留的是什么物质,用溶剂去洗,或者也可以借助离心机。
⑦ 超滤管能用于强碱或强酸溶液的超滤吗
1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,最常见的是Ultra-15(10kD)。
通常应截留分子量版不应大于目的蛋白分子量的权1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。
若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。
认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同,表格中有。
2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。
然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。
操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。
质量和重心二者都要达到平衡。
注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。
注意,一定要等离心机达到目的转速之后,方可离开
离心机,否则离心机出问题时,无法第一时间处理,后果不可预测。
膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。
在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
⑧ 分离22KD的蛋白质选择什么型号的超滤膜
如果是分离22kDa及分子量远小于它的小蛋白,推荐用millipore的超滤管,截留分子量10kDa,体积1-15ml都有。主要还是看你的目的蛋白是集中于浓缩液部分,还是滤液部分,从而选择合适的截留分子量
⑨ 15ml,10kd超滤管转速要多大
1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,最常见的是Ultra-15(10kD)。
通常应截版留分子量不应大于权目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。
若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同,表格中有。
2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。
注意,一定要等离心机达到目的转速之后,方可离开
离心机,否则离心机出问题时,无法第一时间处理,后果不可预测!膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
⑩ 过滤膜 的孔径大小,10kd 的蛋白选用多少的孔径过滤
第一超滤管达不来到100%的与孔径源完全一致。任何滤膜都达不到和标称孔径完全一致,只能是无限的接近孔径。 其二分子量是质量,而孔径是长度单位,原则上不具有匹配性。原因是,标的物的结构会直接影响过滤精度。球状的和链状的,分子量相同,但是用相同孔径可以截住球状的,而链状的就会透过去。 因此,两者之间没有绝对的联系。
早上好,这个看你要过滤的材料要求了。如果是低黏度的,通常选择小孔径的比如0.22,如果是高黏度的,一般选择0.8或者更高的,特别粘稠比如甘油那样超过300cps的就不要过滤了……含有大量固体颗粒的,请先选择二级过滤,比如先用0.8再用0.45,直接用0.45或者0.22将会导致过滤器压力急剧升高爆膜掉。你是要过滤水相,还是有机相的?