⑴ 分离22KD的蛋白质选择什么型号的超滤膜
如果是分离22kDa及分子量远小于它的小蛋白,推荐用millipore的超滤管,截留分子量10kDa,体积1-15ml都有。主要还是看你的目的蛋白是集中于浓缩液部分,还是滤液部分,从而选择合适的截留分子量
⑵ millipore 超滤管区别
1、装量:0.5ML 4ML 15ML
2、截留分子量3K 10K 30K 50K 100K
⑶ 离心超滤管 millipore 滤膜上好像有孔,离心后发现有大分子蛋白过来,怎么回事该怎么办
离心超滤管是一次性的,原则上不能反复用的,所以滤膜上有孔就要更换了
⑷ 有谁知道用什么仪器可以从蛋白溶液中脱糖
用超滤关键搞清你需要保留产物的分子量和要去除物质的分子量,如果差异较大用超滤离心管是可以的,如果差异小,可以用柱层析试
⑸ millipore filter是什么意思
millipore filter
微孔滤器,超滤器
Eggsamples , defatted bedetermined by the method.
鸡蛋样品以氨化乙腈提取,正己烷去脂,微孔滤膜过滤后检测;
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⑹ 超滤离心管怎么使用
蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管(MWCO10kD)。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选,视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用。
1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。
2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时,【取50ul国产Bradford溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管,用5mg/ml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测】,继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的Buffer,直到蛋白不发生沉淀为止。
5、前面几步用以浓缩蛋白,如果要换Buffer,在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候,轻轻加入新的Buffer(经0.22um超滤膜超滤),再浓缩至1ml左右,连续三次,最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定,一般不多于500ul,也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算,三次达到1000倍以上,基本上可以达到换buffer的目的。
6、取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作,用黄枪头(200ul)取,轻轻顺着边缘插入枪头,轻轻吹打、混匀蛋白液,注意不要碰到超滤膜,然后吸取浓缩液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的最后一点浓缩液不必吸取,否则难度太大,有可能损坏超滤膜。最后加入MilliQ水到超滤管中,没过超滤膜,防止膜失水变干。
7、以下是处理超滤管,重复利用超滤管的步骤。
8、倒出超滤管里的水,用milliQ水轻轻润洗几次,【若管底有可见的蛋白沉淀,可以先加入水,然后用枪头吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉淀悬起,然后倒掉,不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液,室温放置20min,期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液,将管芯浸入MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时,不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗,内壁再用MilliQ水洗干净。
9、取出浸没的管芯,加至接近满的MilliQ水,50ml管也加满MilliQ水,将管芯慢慢放入50ml
离心管,排出部分水,然后盖上盖子,放4度保存,直到下次使用。一般来说,按照上述步骤和注意事项,每根管用三四年不会坏。
⑺ 在5支试管中的酪蛋白各带什么电荷
都带正电荷。
蛋白质粒子整体带上正电荷,即酪蛋白趋向分散溶解,使一度凝聚型携的大粒子分散开,形成不稳定的溶胶。
当溶液pH小于埋租缺蛋白质的等电点时,其羧基电离受到抑制而氨基电离,蛋白质成为带正电荷的阳离子弯辩。
⑻ 净水器带电的好还是不带电的好
带电的一般是纯水机,净化的水是纯净水,去除有害物质级对人体有益的矿物质,不适合有老人小孩的家庭使用,并且需要用电和接废水口,损耗比较大;
不带电的是滤媒型净水器,去除有害物质的同时保留对人体有益的钙镁离子及矿物质,主要如果你家用的是市政自来水,完全可以装滤媒型净水器,市政自来水都是经过处理合格,最多的污染物就是氯化物,管道老化带来的泥沙铁锈胶质物之类,滤媒型净水器就可以搞定了。
净水器分很多种的,前置过滤器都是不带电,因为它主要是靠滤网工作的,跟电没有什么关系。中央净水机和软水机一般都是要用电。末端直饮机如果是反渗透的话就需要用电,超滤的话就不有的需要有的不需要。具体还要看机器,不能单纯的用带电不带点来评价好坏。
⑼ 超滤净水机和纯水机的区别
超滤净水机和纯水机的区别
一、技术不同,纯水机反渗透技术和超滤机超滤膜技术最大的区别就在于过滤精度。
反渗透:是指在膜的进水一侧施加比溶液渗透压高的外界压力,只允许溶液中水和某些组分选择性透过,其他物质不能透过而被截留在膜表面的过程,简称为RO,其过滤精度为0.0001微米。
超滤:以压力差为动力,分离分子量范围为几百至几百万,膜孔径约0.001~0.2微米的物理筛分过程,简称为UF,其过滤精度为0.001微米。
二、结构不同,纯水机:有增压泵,需要电源,有储水罐,一般为五级过滤。第一级为PP棉滤芯,第二和第三级为活性炭,第四级为用于宇航技术的RO逆渗透膜,第五级为精致活性炭,主要用于改善口感。
管道超滤机:没有电机,不需要电源,靠水压驱动过滤,采用不锈钢管为机身,内置大流量超滤膜。依托物理筛分原理进行水源净化
矿物质多级超滤机:无需用电,一般为5级以上滤芯搭配,过滤工艺有拦截、吸附、调节的功能,适用于水质硬度低以及水垢含量少的以地表水水源为主的南方城市。以及北方局部城市。
三、功能方面。反渗透纯水机:可以将杂质、铁锈、泥沙、胶体、细菌、病毒,以及对人体有害的放射性粒子、有机物、荧光物、农药去除掉,还可以将水碱和重金属去除掉;去除水中所有微量元素。
超滤膜净水机:能够过滤掉自来水中的杂质、铁锈、部分细菌、病毒、胶体等,过滤后的水保留水中原有的矿物质含量。
四、缺点方面。反渗透纯水机:纯水机在制水过程中会产生废水,一般适用于水垢重、水的硬度较高、以及水污染严重的地区。就目前我国情况而言,纯水机是解决大部分地区水污染的有效途径。
超滤净水机:吸附余氯、去除异色异味、杂质,但对重金属和水碱的作用不是很大。根据区域水质环境确定安装哪种技术的净水器才是最关键的要素。
一、净水机的功能
根据不同的滤芯,粗滤净水器能够过滤掉自来水中的杂质、铁锈、部分细菌、病毒、胶体等, 但是对重金属和水碱的作用不是很大,5级以上超滤净水器增加了美国KDF滤芯和离子交换树脂滤芯有效去除重金属和水碱,7级以上还增加了活化和矿化滤芯。
净水机不但能够达到用户的直接饮用的目的,还有养生保健的目的。
二、净水机的特点
没有电机,不需要电源,靠水压驱动过滤。没有储水罐,比较好的为九级过滤。
三、纯水机的特点
有增压泵,需要电源,有储水罐,一般为五级过滤,第一级为滤芯,第二和第三级为活性炭,第四级为用于宇航技术的RO逆渗透膜(此为核心),第五级为精致活性炭,主要用于改善口感.也可把第五级放置麦饭石滤芯,成为矿物质饮用纯水机.
四、纯水机的功能
它不仅可以将杂质、铁锈、泥沙、胶体、细菌、病毒驱除掉,还可以将对人体有害的放射性粒子、有机物、荧光物、农药驱除,可以说除了水分子以外的说有物质,是非常干净的水。