A. 离心时tris-HCl缓冲液中tris的具体作用是什么
tris是三(羟甲基)甲胺的英文缩写.tris-HCl缓冲液中tris的具体作用是作为抗酸成分,防止溶液PH大幅度下降.
B. 缓冲液是什么
缓冲液一般指平衡溶液。
是一种能对溶液酸度起稳定作用的溶液。
能使溶液酸碱性维持在一定范围内。
缓冲液是一种能在加入少量酸或碱时抵抗pH改变的溶液。PH缓冲系统对维持生物的正常pH值,正常生理环境起重要作用。
C. 超滤离心管离心蛋白时离心干了怎么办
不建议用离心管离蛋白。最好还是膜处理比较好。
蛋白会粘附在渣里,只有用缓冲液再润洗咯。
D. 求助:第一次使用超滤离心管应该怎么处理
可能不同厂家的产品保存运输条件不一样。
如果有甘油等保护剂,那就一定要洗干净再加样品。版权
干的超滤管也要先润湿再用,否则可能不能完全利用膜面积。
最好,用样品buffer润洗下再加样,最大程度保证蛋白活性。尤其是用过后保存在NaOH或乙醇中后。
一般还是离心机甩一下好,使膜充分浸润。
降低吸附的办法有:
1,蛋白浓度不要过低
2,尽量选用纤维素的低吸附超滤管
3,用前可以用Tween 80等去垢剂润洗(不影响蛋白活性的前提下)
4,加入保护蛋白,如BSA(不影响蛋白后续使用的前提下)
用完保存在20% EtOH中,4C保存,防止长菌,依不同样品可以重复使用不同的次数。
E. 【求助】超滤离心是怎么回事
超滤离心机是使用带超滤膜的离心管,这个膜有分子量的区别,可以截留大于回膜孔径的答分子,一般的离心机就可以了,还要选好你的离心管体积,这样才能和你离心机配套使用 情非所属(站内联系TA)一般一百左右一根,特殊的可能更贵,有50ml,10ml,一般的离心机都可以,只要管子能套上,同一种物质在膜完好不堵塞的情况下可以重复下,但是不能太多次数,两三次就好了!
F. 超滤离心管怎么使用
蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管(MWCO10kD)。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选,视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用。
1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。
2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时,【取50ul国产Bradford溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管,用5mg/ml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测】,继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的Buffer,直到蛋白不发生沉淀为止。
5、前面几步用以浓缩蛋白,如果要换Buffer,在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候,轻轻加入新的Buffer(经0.22um超滤膜超滤),再浓缩至1ml左右,连续三次,最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定,一般不多于500ul,也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算,三次达到1000倍以上,基本上可以达到换buffer的目的。
6、取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作,用黄枪头(200ul)取,轻轻顺着边缘插入枪头,轻轻吹打、混匀蛋白液,注意不要碰到超滤膜,然后吸取浓缩液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的最后一点浓缩液不必吸取,否则难度太大,有可能损坏超滤膜。最后加入MilliQ水到超滤管中,没过超滤膜,防止膜失水变干。
7、以下是处理超滤管,重复利用超滤管的步骤。
8、倒出超滤管里的水,用milliQ水轻轻润洗几次,【若管底有可见的蛋白沉淀,可以先加入水,然后用枪头吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉淀悬起,然后倒掉,不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液,室温放置20min,期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液,将管芯浸入MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时,不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗,内壁再用MilliQ水洗干净。
9、取出浸没的管芯,加至接近满的MilliQ水,50ml管也加满MilliQ水,将管芯慢慢放入50ml
离心管,排出部分水,然后盖上盖子,放4度保存,直到下次使用。一般来说,按照上述步骤和注意事项,每根管用三四年不会坏。
G. 我纯化的抗体,甘氨酸盐酸洗脱,TRIS-HCL中和,我要把缓冲液改成PBS,超滤可以吗透析要用多大浓度的PBS
您好!你这个是换缓冲体系,超滤能达到你需要的目的,用连续洗滤的方法需要5倍体积的PBS,就能达到对之前缓冲液99.3%的去除。
体积小的样品可用超滤离心管,体积大用超滤系统
如还有疑问可QQ89347157交流
H. 缓冲液在试验中的作用具体是什么
实验中也需要一个最合适实验的环境啊~比如受PH值,温度,离子浓度,液体环境以及纯度等等影响。缓冲液其实就是个调节实验环境作用,以提供一个最合适的化学反应环境。其中有pbs磷酸盐,醋酸盐等系列缓冲液~你要的是作用,不是配方,我就不详细介绍咯。需要的话继续追问就是哈!或者QQ联系嘛。
I. 超滤离心管的介绍
超滤离心管,备有四种材质的超滤膜:聚醚砜、三醋酸纤维素、再生纤维素和Hydrosart,可根据不同要求灵活选用;
J. 什么是PBS缓冲液
PBS是磷酸缓冲盐溶液一般作为溶剂,起溶解保护试剂的作用。它是生物化学研究中使用最为广泛的一种缓冲液,主要成分为Na₂HPO₄、KH₂PO₄、NaCl和KCl。PBS缓冲液不仅伪狂犬病毒要用它稀释,一般的有活性的生物制剂都要用它来稀释。
由于Na₂HPO₄和KH₂PO₄它们有二级解离,缓冲的pH值范围很广;而NaCl和KCl主要作用为增加盐离子浓度。如有需要PBS还可以补加1 mmol/L CaCl₂和0.5 mmol/L MgCl₂,以提供双价阳离子。
(10)超滤离心管中的缓冲液是什么扩展阅读
PBS是磷酸缓冲盐溶液作用:
1、因为PBS缓冲液具有可调整的适宜pH缓冲作用和盐平衡的作用。不使用蒸馏水的原因在于水会破坏生物蛋白的结构和生物特性。不使用生理盐水的原因在于它不能够调整PH值。所以,对生物细胞进行清洗首选是PBS缓冲液。
2、PBS缓冲液的PH值是细胞最适合的PH值范围,而且在酸碱微量的刺激下,PH值一般也没有任何的变化。培养基的PH值时很容易变化的,对于细胞具有极大的损伤,但是PBS缓冲液可以保持细胞能在适合的PH值范围之内健康的生活活。