⑴ millipore 超滤管区别
1、装量:0.5ML 4ML 15ML
2、截留分子量3K 10K 30K 50K 100K
⑵ 澄清过滤后超滤用多少KD的膜进行比较合适
100KD和300KD都可以,因为HCD, HCP和RNA的分子量一般会小于100KD而质粒的分子量较大,因此这两款膜包都可回以对质粒进行快速有答效的超滤浓缩以及洗滤换液。Sartorius赛多利斯拥有膜配方和生产专利,通过对树脂规格,配方和制膜工艺的专业引领着一次性行业的发展。
⑶ 做超滤实验时,超滤膜上标的10KD、30KD单位如何对应分子的大小是否单位越大,超滤得到的物质分子越小
首先与超滤膜的材质有关,比如聚醚砜的和再生纤维的,同样是10KD的,截流能力专是不相同的属,一般要求在截流分析量的2倍-5倍以上方可实现良好的分离,同时不同公司的超滤膜本身应该有自己的说明的,参照说明要求即可。
⑷ 蛋白分子量为45KD应选用截留分子量30kd的超滤管合适吗
超滤膜上标的10KD、30KD都是指截留率.单位越大,超滤得到的物质分子也越大.
⑸ 超滤离心管用材要求
摘要 (1)选择合适的超滤离心管。通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的产品。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同。
⑹ 过滤膜 的孔径大小,10kd 的蛋白选用多少的孔径过滤
第一超滤管达不来到100%的与孔径源完全一致。任何滤膜都达不到和标称孔径完全一致,只能是无限的接近孔径。 其二分子量是质量,而孔径是长度单位,原则上不具有匹配性。原因是,标的物的结构会直接影响过滤精度。球状的和链状的,分子量相同,但是用相同孔径可以截住球状的,而链状的就会透过去。 因此,两者之间没有绝对的联系。
早上好,这个看你要过滤的材料要求了。如果是低黏度的,通常选择小孔径的比如0.22,如果是高黏度的,一般选择0.8或者更高的,特别粘稠比如甘油那样超过300cps的就不要过滤了……含有大量固体颗粒的,请先选择二级过滤,比如先用0.8再用0.45,直接用0.45或者0.22将会导致过滤器压力急剧升高爆膜掉。你是要过滤水相,还是有机相的?
⑺ 超滤膜包35000kd是什么意思
是指超滤的切割分子量 在3.5万分子量,通俗的说是超滤膜的过滤孔径
3.5万分子量的超滤大部分用于 物料的澄清,分离浓缩等应用。
⑻ 超滤离心管怎么使用
蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管(MWCO10kD)。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选,视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用。
1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。
2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时,【取50ul国产Bradford溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管,用5mg/ml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测】,继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的Buffer,直到蛋白不发生沉淀为止。
5、前面几步用以浓缩蛋白,如果要换Buffer,在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候,轻轻加入新的Buffer(经0.22um超滤膜超滤),再浓缩至1ml左右,连续三次,最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定,一般不多于500ul,也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算,三次达到1000倍以上,基本上可以达到换buffer的目的。
6、取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作,用黄枪头(200ul)取,轻轻顺着边缘插入枪头,轻轻吹打、混匀蛋白液,注意不要碰到超滤膜,然后吸取浓缩液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的最后一点浓缩液不必吸取,否则难度太大,有可能损坏超滤膜。最后加入MilliQ水到超滤管中,没过超滤膜,防止膜失水变干。
7、以下是处理超滤管,重复利用超滤管的步骤。
8、倒出超滤管里的水,用milliQ水轻轻润洗几次,【若管底有可见的蛋白沉淀,可以先加入水,然后用枪头吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉淀悬起,然后倒掉,不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液,室温放置20min,期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液,将管芯浸入MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时,不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗,内壁再用MilliQ水洗干净。
9、取出浸没的管芯,加至接近满的MilliQ水,50ml管也加满MilliQ水,将管芯慢慢放入50ml
离心管,排出部分水,然后盖上盖子,放4度保存,直到下次使用。一般来说,按照上述步骤和注意事项,每根管用三四年不会坏。
⑼ 如何选择超滤管
你看你要截留那部分物质,就选择比最小分子量小的,如果你要截留26KD的,你要的超滤管内就要比26小。但两者也要有一定容的差距,比如,选择20-25KD之间的就不合适,因为26的也可能会出去(这是由制造工艺决定的)。所以选择20KD以下的超滤管比较合适。
⑽ 15ml,10kd超滤管转速要多大
1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,最常见的是Ultra-15(10kD)。
通常应截版留分子量不应大于权目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。
若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同,表格中有。
2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。
注意,一定要等离心机达到目的转速之后,方可离开
离心机,否则离心机出问题时,无法第一时间处理,后果不可预测!膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。