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析出DNA沉淀物时加入蒸馏水

发布时间:2020-12-18 16:07:32

A. 下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是()A.析出DNA时要缓慢地加蒸馏水使氯化钠浓度降低,然后过

A、析出DNA时要缓慢地加蒸馏水使氯化钠浓度降低,待粘稠物不再增加为止,此粘版稠物即为DNA,因权此过滤后保留粘稠物,A错误;
B、在探究洗涤剂对植物细胞DNA提取的影响实验中,自变量是否加洗涤剂,食盐的用量属于无关变量,B错误;
C、鉴定DNA用二苯胺时需要沸水浴加热才能产生蓝色,C错误;
D、由于蛋白质在高温条件下易变性,而DNA对温度的耐受性较强,因此将含有DNA的滤液放在60~75℃的恒温水浴箱中保温后过滤,能去除蛋白质杂质,D正确.
故选:D.

B. DNA的粗提取和鉴定为什么要四次过滤第四次过滤有什么用

1、实验中两次使用蒸馏水。
第一次百,取血细胞液时加蒸馏水,目的是让血细版胞吸水权涨破
第二次是在析出含DNA的粘稠物后,目的是稀释NACL溶液,使DNA逐渐析出
2、加3次NACL,
第一次,在溶解核内DNA时,加入NACL后充分搅拌,加速染色质中度DNA与蛋白质的分离,使DNA充分游离并融入NACL中
第二次在DNA粘稠物在溶解时,家NACL是使DNA再溶解
第三次是在DNA的鉴定中,目的是溶解DNA
3、过知滤3次
第一次在道提取血细胞核物质时进行过滤专,取得的滤液中含有染色质,而滤出的是细胞膜、核属膜和细胞器等的破碎结构
第二次在滤去含有DNA粘稠物只能够,滤液中含有仍然溶解在NACL中的细胞中的一些成分,如蛋白质等
第三次在过滤含DNA的2mol/L的NACL溶液时,过滤后的滤液中含有DNA
(三次过滤就行了,四次过滤是为了提取的更纯而已,要求不高时,可以省略)

C. 在DNA的粗提取实验中,将核内DNA溶解于2mol/L的NaCl溶液中后,缓缓加入蒸馏水直到丝状物不再增加,此时如

在2mol/L的NaCl溶液中DNA溶解抄,缓缓加袭入蒸馏水使得NaCl溶液浓度降低,则DNA的溶解度降低不断析出;DNA丝状物不再增加时,此时NaCl溶液的浓度为0.14mol/L;如继续加蒸馏水,DNA的溶解度增加,DNA丝状物量减少.
故选:C.

D. 高中生物:为什么错 正确的方法是什么在“析出DNA黏稠物”时,要缓缓加酒精,直至溶液中黏稠物不

步骤3:析出含DNA黏稠物:沿烧杯内壁缓慢加入蒸馏水,同时用玻璃棒沿一个方向内不停地轻轻搅拌。由于溶容液浓度的下降,使得DNA溶解度下降,蛋白质溶解度上升,DNA析出成白色丝状黏稠物,当黏稠物不再增加时,停止加入蒸馏水。(这时溶液中NaCl的物质的量浓度相当于0.14 mol/L)

E. 有关实验“DNA的提取及检测”的问题

实验准备工作:

1 所用离心管、枪头要洗净、烘干(最好灭菌)。

2 试剂配制:

1 M Tris-HCl (pH 8.0): 称取Tris-Base 121g, 加入约 ml 水在磁力搅拌器上搅拌,使其充分溶解后加入浓盐酸调整pH至8.0后加水定溶至1000 ml. 灭菌后于室温保存。

0.5 M EDTA (pH 8.0): 称取EDTA-Na2盐 187 g 加入约 800 ml水,在磁力搅拌器上边搅拌边加入固体NaOH,当EDTA和NaOH均完全溶解,溶液变清时其pH值刚好达到8.0左右,再用pH试纸略加调整即可, 灭菌后于室温保存。

5.0 M NaCl: 称取NaCl 300 g, 加入蒸馏水约800 ml 于磁力搅拌器上充分搅拌,约5分钟后停止搅拌,静止2~3分钟,倒出上清液,再加入100 ml蒸馏水重复前面的步骤,直到NaCl充分溶解后定溶至1000 ml., 灭菌后于室温保存。

酚:氯仿:异戍醇(25:24:1)的配制:可参考《分子克隆》亦可按如下方法配制取重蒸酚100 ml ,蒸馏水50 ml,8-羟基喹咛0.05g 加入500 ml玻璃烧杯于磁力搅拌器上边加热边搅拌,待酚达到水饱和后加入18 g Tris-Base,等Tris-Base 完全溶解后加入100 ml氯仿:异戌醇(24:1),搅拌10~20分钟,静止约10分钟,除去上层水相后,装入棕色瓶,最后加入20 ml 0.1M的Tris-HCl保护液于4℃保存。

DNA Buffer的配制:

1 M Tris-HCl (pH 8.0)
100 ml

0.5 M EDTA (pH 8.0):
100 ml

5.0 M NaCl:
300 ml

H2O
500 ml

灭菌后于室温下保存3个月左右,用时按1.5%往Buffer中加入CTAB,在电炉上烧开;在通风橱里加入1%的巯基乙醇( 现配现用)。

DNA的提取:

1 取2~5 g叶片或愈伤组织,加入适量液氮研碎,转入预冷的50ml离心管,加入20 ml DNA提取缓冲液充分摇匀,于65℃水浴60~90 min,中途轻轻摇匀两次。

2 加入15 ml 氯仿:异戍醇(24:1)轻轻摇匀10分钟,于BECKMAN离心机中4000 rpm离心15分钟。

3 取上清液于另一50 ml离心管加入10 ml 氯仿:异戍醇(24:1)重复步骤2。

4 吸上清液于一干净的50 ml 离心管,加入15 ml 冷冻的异丙醇,轻轻摇匀后于-20℃冷冻半小时,4000 rpm离心10分钟。弃上清液,加入5 ml 76%的乙醇(含10 mM

NH4Ac)浸泡5 h(或过夜),中途换乙醇2-3次。

5 弃乙醇风干沉淀约半小时,加入3.0 ml TE缓冲液(10 mM Tris-HCl pH 8.0;1 mM EDTA , pH 8.0),20 µl RNase A(10 mg/ml),37℃温浴过夜。

6 溶液转入一10 ml离心管,加入3.0 ml苯酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)充分颠倒混匀,4000 rpm离心15 min,吸上清液于另一10 ml的离心管中,(可重复一次)。

7 加入1 ml 5.0 M的NaCl和3.0 ml水饱和乙醚,充分混匀,4000 rpm离心5 min。

8 弃乙醚,用20 µl枪头挡住离心管管口内侧,用力下压枪头,使枪头与管壁间形成一狭缝,让下清液从缝中流入另一10 ml离心管。

9 加入5 ml冷冻的异丙醇,轻轻摇匀后于-20℃冷冻半小时,4000 rpm离心10分钟。弃上清液,加入3 ml 70%的乙醇浸泡4~6 h(或过夜),中途换乙醇2-3次。风干乙醇,加入500 µl TE溶解,或浸在乙醇中长期保存。

DNA检测

1 取DNA原液15 µl稀释至3.0 ml,用UV-1601型紫外分光光度计测定230 nm、 260 nm及280 nm的吸光值。

高质量的DNA要求:A260/A230>2.0; 1.7<A260/A280<1.9

2 将DNA原液适当稀释后,用1 Χ TAE,0.8%琼脂糖凝胶2V/cm电泳1 h进行质量检测。

3 向一定量的DNA中加入限制性内切酶EcoR I至4-5U/μg DNA,37℃消化过夜,用0.5 Χ TBE,0.8%琼脂糖凝胶2.5V/cm电泳3 h进行检测。

CTAB法微量提取DNA

1. 药品的配制:

CTAB提取液:

(1)100mM Tris-HCl(PH 8.0),1.5M NaCl,50mM EDTA(PH 8.0)

(2)1% PVP,2% CTAB

(3)取少许(1)加到(2)中,搅拌成糊状,后加(1)至足量,65℃水浴充分溶解备用。使用前要在65℃温浴一会儿,然后加入1-4%巯基乙醇,混均匀。

苯酚:氯仿:异戊醇(25∶24∶1): 重蒸酚65℃水浴溶解,在烧杯中加入80ml温热的蒸馏水,加入少许8-羟基喹啉,溶解后加入100ml重蒸酚,再加入100ml氯仿:异戊醇(24:1),加入20克Tris Base,磁力搅拌器上搅拌1.5 h左右至停止搅拌后很快分层,然后装入棕色瓶中,4℃冰箱中储存备用。

2. 材料的采取与保存:

在超净工作台上,取试管苗叶片,放入无菌的1.5 ml离心管中,置于冰盒中,然后把装有叶片的离心管一起装在纱布袋中,置液氮中冷冻10分钟,取出后置于—70℃冰箱中可长期保存,需要用时,取出置于冰盒中。

3.DNA的粗提

在装有叶片的离心管中加入石英砂少许(约0.07克),用事先灭过菌的—20℃冰箱中预冷的尖头玻棒将材料戳到底部,先压后研磨,研细后加入600 ul CTAB提取液,再继续研磨一会儿使其悬浮均匀,然后在65℃水浴锅中温浴60-90分钟,隔30分钟取出上下轻轻颠倒几次,水浴之后,加入700ul苯酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),,上下晃动10分钟以上,其间置于37℃水浴锅中温浴一会(冬季),使之充分混匀,然后10000-12000rpm离心5-10分钟,吸取上清液转至另一离心管中,加入60 ul 5M NaCl,再加入-20℃冰冻无水乙醇1ml,轻轻颠倒数次,混合均匀后冰冻30分钟沉淀DNA,然后8000-10000rpm离心5分钟,弃上清液,加入1 ml 70%酒精浸泡2小时或过夜,8000rpm离心5分钟,弃酒精之后在工作台上风干DNA,注意不要过干,否则会使以后溶解困难。

4. DNA的纯化:

向风干后的DNA中加入500 ul 1xTE,37℃水浴15-30分钟至DNA完全溶解,然后加入700ul苯酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),上下颠倒离心管约10分钟,至充分混匀,其间置于37℃水浴锅中温浴一会(冬季);10000-12000 rpm离心5分钟,吸取上层液至另一离心管中,加入700ul氯仿:异戊醇(24:1),颠倒10分钟(方法同上),10000 -12000rpm离心5分钟,吸取上层液至另一离心管中,加入60 ul 5M NaCl,再加入1ml冷冻的无水乙醇,轻轻颠倒,然后在-20℃冰箱中置30分钟沉淀DNA,8000-10000 rpm离心2-3分钟,使DNA分散状紧贴在管壁上,弃酒精,加70%酒精1ml浸泡,2小时后换一次,后浸泡过夜,8000rpm离心3分钟后弃酒精,风干,加50-100ul1xTE充分溶解,然后每管加5ul 5mg/ml Rnase,37℃水浴6小时或过夜。

5. DNA检测:

(1)0.8%琼脂糖凝胶电泳30-60分钟:

TAE 100ml,EB 30ul,样品3-5ul,电压90V,

观察A:DNA是否跑出,带型是否整齐划一;B:RNA是否除尽

(2)分光光度计检测D260/D280的比值:在1.8-2.0的范围内认为纯度较高上述方法提取的DNA比值在1.65-1.95之间。浓度=30000xOD260(DNA样品为5ul时)。

不知道你说的是动物的还是植物的,我当年做的是动物的。用的是鸡血,因为在学校,没有生物书,只能粗略的查一下了
1、实验中两次使用蒸馏水。
第一次,取血细胞液时加蒸馏水,目的是让血细胞吸水涨破
第二次是在析出含DNA的粘稠物后,目的是稀释NACL溶液,使DNA逐渐析出
2、加3次NACL,
第一次,在溶解核内DNA时,加入NACL后充分搅拌,加速染色质中DNA与蛋白质的分离,使DNA充分游离并融入NACL中
第二次在DNA粘稠物在溶解时,家NACL是使DNA再溶解
第三次是在DNA的鉴定中,目的是溶解DNA
3、过滤3次
第一次在提取血细胞核物质时进行过滤,取得的滤液中含有染色质,而滤出的是细胞膜、核膜和细胞器等的破碎结构
第二次在滤去含有DNA粘稠物只能够,滤液中含有仍然溶解在NACL中的细胞中的一些成分,如蛋白质等
第三次在过滤含DNA的2mol/L的NACL溶液时,过滤后的滤液中含有DNA

F. dna的粗提与鉴定实验为什么加入2m的nacl后不过滤就加蒸馏水 博客

1、实验中两次使用蒸馏水。
第一次,取血细胞液时加蒸馏水,目的是让内血细胞吸水涨破
第二次是容在析出含DNA的粘稠物后,目的是稀释NACL溶液,使DNA逐渐析出
2、加3次NACL,
第一次,在溶解核内DNA时,加入NACL后充分搅拌,加速染色质中DNA与蛋白质的分离,使DNA充分游离并融入NACL中
第二次在DNA粘稠物在溶解时,家NACL是使DNA再溶解
第三次是在DNA的鉴定中,目的是溶解DNA
3、过滤3次
第一次在提取血细胞核物质时进行过滤,取得的滤液中含有染色质,而滤出的是细胞膜、核膜和细胞器等的破碎结构
第二次在滤去含有DNA粘稠物只能够,滤液中含有仍然溶解在NACL中的细胞中的一些成分,如蛋白质等
第三次在过滤含DNA的2mol/L的NACL溶液时,过滤后的滤液中含有DNA

G. DNA能溶于蒸馏水吗

在2mol/L的NaCl溶液中DNA溶解,缓缓加入蒸馏水使得NaCl溶液浓度降低,则DNA的溶解度降低不断析出;DNA丝状内物不再增加时,容此时NaCl溶液的浓度为0.14mol/L;如继续加蒸馏水,DNA的溶解度增加,DNA丝状物量减少.故选:C.

H. DNA的粗提取与鉴定怎么做!

实验原理:

1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。

2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。

3.DNA在沸水浴时被专二苯属胺染成蓝色。

方法步骤:

1.提取细胞核物质:顺时针方向搅拌,稍快,稍重。 5 min

2.溶解DNA:

3.析出含DNA的黏稠物:蒸馏水300mL,逆时针方向搅拌,缓慢

4.过滤:取黏稠物

5.再溶解:顺时针方向搅拌,较慢。3 min

6.过滤:取滤液。

7.提取出含杂质较少的DNA,逆时针方向搅拌,稍慢。5 min

8.DNA的鉴定:沸水浴5min

I. DNA的粗提取实验中,先后两次加入蒸馏水的作用分别是

选C.第二次降低NaCl溶液浓度是为了让DNA析出。100%正确!

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