① 饲料中蛋白氮和非蛋白氮的测定有什么快速法吗
一、硫酸铜沉淀法
根据非蛋白氮的化学性质来看,大部分溶于水,一部分在常温下不溶水,但在沸水中溶解。根据此种性质,可以先将样品煮沸,用硫酸铜将样品中的蛋白质沉淀下来,由于非蛋白氮已经溶于水,故可用过滤方法将其与样品中的蛋白质分离。在过滤时,水的温度一定不能太低,否则象双缩脲一类的物质会因为不溶于常温水而不能被过滤掉。用此种方法测定出的蛋白质含量称为样品的真蛋白质。但实际上,此种方法有很大的局限性。如果非蛋白氮不溶于沸水,或者将一般的非蛋白氮微囊化,此种方法测出的结果会与样品中的实际真蛋白有很大的差异。
二、氨基酸测定法
为了真正能够判定样品中是否掺有非蛋白氮,需测定样品中的氨基酸含量。无论采用经典的氨基酸自动分析仪分析(柱后衍生),还是采用比较快捷的HPLC分析(往前衍生),将所测定的氨基酸总量相加得到一个总氨基酸数值,然后将此数值乘以6.25为M,和用凯氏定氮法测定的粗蛋白质N相比较,M至少为N的85%(M可能略大于N)。如果低于此数值,则可以判定该样品中掺有非蛋白氮。
三、水解蒸馏法
1、原理:非蛋白氮主要包括五类:尿素及其衍生物类、氨态氮类、铵类、肽类及其衍生物、动物粪便及其它废弃物类。如果在原料中掺有氨态氮类、铵类和粪便比较容易判断(可采用硫酸铜沉淀法加镜检),一般很少将肽类及其衍生物掺入其中,剩下比较难鉴别的就是尿素及其衍生物。尿素和尿素衍生物经过强酸或强碱水解为氨盐或氨和其它的物质,在强碱的条件下可以蒸馏出氨气,原料中的蛋白质经过水解成氨基酸盐,氨基酸盐在强碱条件下稳定,从而可将非蛋白氮和真蛋白氮进行分离。
2、仪器和设备:酒精喷灯,试管和其它常用的仪器。
3、试剂与溶液:6mol/l的盐酸溶液和其它常用的试剂。
4、测定方法:本文只列出用酸水解的方法。采集有代表性样品约100g,混匀后用四分法缩分出209左右,将其粉碎,使其全部通过60目样品筛。精确称取0.3000g的样品,置于容积为60ml的试管底部(注意样品勿沾在管壁上),加入30ml 6mol/l的盐酸溶液,将试管在距试管口1~2cm处用喷灯加热并封口。将封好的试管置于干燥箱内,于110℃下水解24h。冷却后打开试管,将水解液过滤至100ml容量瓶中,用蒸馏水反复多次冲洗试管和滤纸,然后定容至刻度。用10ml移液管移取10ml样液移入半微量式定氮仪的反应室中,加入20ml 1∶1的氢氧化钠溶液蒸馏10 min,余下的步骤按照测定粗蛋白的方法进行操作,得出样品所消耗的盐酸的体积为V1(ml)。同时作空白滴定可得消耗的盐酸的体积为V0,设所称样品的质量为M(g)。
5、非蛋白氮的粗蛋白质计算公式
CP(%)=(V1-V0)×C×O.14×6.25/M 蛋白就用凯氏定氮法1、 样品处理:精密称取0.2-2.0g固体样品或2-5g半固体样品或吸取10-20ml液体样品(约相当氮30-40mg),移入干燥的100ml或500ml定氮瓶中,加入0.2g硫酸铜,3g硫酸钾及20毫升硫酸,稍摇匀后于瓶口放一小漏斗,将瓶以45度角斜支于有小孔的石棉网上,小火加热,待内容物全部炭化,泡沫完全停止后,加强火力,并保持瓶内液体微沸,至液体呈蓝绿色澄清透明后,再继续加热0.5小时。取下放冷,小心加20ml水,放冷后,移入100ml容量瓶中,并用少量水洗定氮瓶,洗液并入容量瓶中,再加水至刻度,混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸铵同一方法做试剂空白试验。
2、 按图装好定氮装置,于水蒸气发生器内装水约2/3处加甲基红指示剂数滴及数毫升硫酸,以保持水呈酸性,加入数粒玻璃珠以防暴沸,用调压器控制,加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。
3、 想接收瓶内加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示剂1滴,并使冷凝管的下端插入液面下,吸取10.0ml样品消化液由小玻璃杯流入反应室,并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内,塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞。将10ml 40%氢氧化钠溶液倒入小玻璃杯,提起玻璃塞使其缓慢流入反应室,立即将玻璃盖塞紧,并加水于小玻璃杯以防漏气。夹紧螺旋夹,开始蒸馏,蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内,蒸馏5min。移动接收瓶,使冷凝管下端离开液皿,再蒸馏1min,然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。取下接收瓶,以0.01N硫酸或0.01N盐酸标准溶液定至灰色或蓝紫色为终点。
同时吸取10.0ml试剂空白消化液按3操作。
计算:
X =((V1-V2)*N*0.014)/( m*(10/100)) +F*100
X:样品中蛋白质的含量,g;
V1:样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积,ml;
V2:试剂空白消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积,ml;
N:硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度;
0.014:1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数;
m:样品的质量(体积),g(ml);
F:氮换算为蛋白质的系数。蛋白质中的氮含量一般为15~17.6%,按16%计算乘以6.25即为蛋白质,乳制品为6.38,面粉为5.70,玉米、高粱为6.24,花生为5.46,米为5.95,大豆及其制品为5.71,肉与肉制品为6.25,大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83,芝麻、向日葵为 5.30。
② 饲料化验 粗蛋白消化后加蒸馏水为什么变红
不应该是红色,如果变红色,一定是水中或消化液中有金属杂物。不能继续化验了,重新做。
③ 饲料中蛋白质的检测方法的详细步骤
准确称取饲料的重量按重量体积比加入一定量的缓冲液(或者直接定容),充分抽提(可以超声破碎仪多超声几次以便充分提取),至于测定的方法有很多:考马斯亮兰法 BCA法等等
④ 化验饲料中真蛋白含量使用的氢氧化钠溶液的配制与标定
一、原理 蛋白质在一定碱性条件下能与重金属盐类发生盐析作用而析出沉淀.此沉淀物不溶于热水。而非蛋白氮类物质易溶于水。用热水洗涤沉淀.将水溶性含氮物质洗去,剩下的沉淀物质再用凯氏定氮法测定即可得出饲料真蛋白质的含量。 二、测定所需的材料 1.仪器和设备 实验室用台式粉碎机、分样筛(20目)、分析天平(感量0.1mg)、烧杯(250m1)、玻璃棒、玻璃漏斗、中速定量滤纸(直径15cm)、表面皿(直径10cm)、干燥箱(可控温度65~70℃)、凯氏烧瓶(100m1)、烧煮炉或电炉、半微量定氮蒸馏器、容量瓶(100m1)、锥形瓶(250m1)、酸式滴定管(50m1)。 2.试剂与试液 硫酸AR、10% 硫酸铜水溶液、硫酸钾或无水硫酸钠AR、氢氧化钠AR、40% 氢氧化钠水溶液、2.5%氢氧化钠水溶液、2% 硼酸水溶液、0.05%mo]/]盐酸标准溶液、氯化钡试液、5%氯化钡水溶液、0.1% 甲基红乙醇溶液、0.5% 溴甲酚绿乙醇溶液。 三、样品的选取与制备 取有代表性的样品约lkg。用四分法分为两份。一份装瓶加封作为留用样品。另一份粉碎过20目。装于广口瓶中贴标签待测。 四、测定步骤 1.试样的前处理 准确称取试样1~2g(精确到0.1mg)于250ml烧杯中,加蒸馏水50ml煮沸.依次加入10%硫酸铜水溶液20ml和25%氢氧化钠溶液20rnl,边加边搅拌,加完后继续搅拌几分钟。放置2小时或静置过夜,沉淀物以中速定量滤纸过滤。用70℃以上热水18ml反复洗涤沉淀.直至滤液无沉淀为止(取氯化钡试液滴于表面皿中。加2mol/l盐酸溶液1滴.滴人滤液.在黑色背景下观察应无白色沉淀)。然后,将滤纸和沉淀物包好,放人烘箱中在65~70℃下干燥2小时。 2.试样的消化 将烘干的试样连同滤纸一起放人凯氏烧瓶中.依次加入硫酸钾或无水硫酸钠9 硫酸铜1 浓硫酸25ml,摇匀,尔后置于电炉上先低温(100~200~C)加热,注意防止泡沫浮起,待泡沫消失后再提高加热温度(约410~C)至沸腾,消化至溶液澄清无黑点并呈蓝绿色,再继续加热30分钟,然后将凯氏烧瓶移出电炉放冷。 3.定容 将冷却后的消化液加蒸馏水约10~20ml,’摇匀后转入100ml容量瓶中,再加10~20ml蒸馏水洗涤凯氏烧瓶。溶液并入容量瓶中,如此反复洗涤,直至消化液全部转入容量瓶中。待冷却至室温后,加蒸馏水稀释至刻度,摇匀。即为试样分解液。 4.蒸馏 采用半微量凯氏定氮蒸馏法。先将水蒸汽发生器与半微量凯氏定氮蒸馏器连接好。在水蒸汽发生器的水中加入甲基红指示剂3滴与硫酸数滴,使水溶液保持橙红色,否则应补加少许硫酸。取20ml2%硼酸水溶液于250ml锥形瓶中,加0.1%甲基红乙醇溶液5~6滴,0.5%溴甲酚绿乙醇溶液2~3滴,摇匀。然后将锥形瓶置于半微量凯氏定氮蒸馏器的末端.使冷凝管末端浸入此吸收液面下2/3处。准确移取试样分解液10~15ml注入半微量定氮蒸馏器中,用少量蒸馏水冲洗进样口,尔后缓慢加入40%氢氧化钠水溶液20ml。用少量蒸馏水冲洗进样口,用玻璃塞塞好进样口。再加适量蒸馏水封住进样口以防止漏气。蒸馏3~5分钟以后待冷凝管末端管口之馏出液呈中性(红色石蕊试纸不变色)时将冷凝管末端离开吸收液面并冲洗冷凝管末端管口,洗液并入吸收液。再蒸馏1~2分钟后用蒸馏水冲洗冷凝管末端管口,洗液并入吸收液。然后将锥形瓶移出,准备滴定。此时应夹断气源。排出废液,准备下一个样品的测定。 5.滴定 吸收氨后的吸收液立即用0.05tool/1的盐酸标准溶液滴定使溶液颜色由蓝绿色变为灰红色即为滴定终点。同时记录盐酸标准溶液的耗用量。 6.空白 在进行样品测定的同时进行空白测定。空白测定除不加试样外其他操作步骤与试样相同。空白试验消耗的盐酸标准溶液的体积不得超过0.5ml。 7.结果计算 五、注意事项 1.在试样的前处理过程中,“煮沸”要求是加热至沸并保持30分钟,目的是使试样中的非蛋白氮类物质充分溶解于水中。加10%硫酸铜溶液和25%氢氧化钠溶液时最好采用移液管移取,然后沿着烧杯内壁缓慢滴加,一方面防止局部氢氧化钠太浓将溶解部分蛋白质,这样会导致最终结果偏低;另一方面是为了使试样中的真蛋白质充分盐析:放置2小时或静置过夜也是这个道理。沉淀物宜以双层中速定量滤纸过滤,双层滤纸可以加快过滤速度,同时又不致于将沉淀物过滤掉。滤液无SO+2表明了已充分洗涤沉淀物,因为如果滤液中仍有SO+2 。则表明沉淀物中间仍可能夹杂有部分可溶性非蛋白氮类物质(如NH ),若不继续洗涤则将导致最终结果偏高。将滤纸和残渣(沉淀物)包好放入烘箱中于65~70cc下干燥2小时是为了使沉淀物充分干燥。一方面是为了避免沉淀物中仍夹杂有一些氨类物质(尽管这种情况一般不会发生。因为滤液已经过了氯化钡试液的检验,但仍不能排除因人眼观察的局限性使其中间仍夹杂有部分热烘干的过程中挥发掉);另一方面也是为了下一步试样消化的顺利进行。因为如果试样潮湿,炭化升温过快,气体骤然膨胀不易从凯氏烧瓶中散发出去,很容易使试样与气体一同冲出凯氏烧瓶从而导致消化失败。 2.消化时应经常转动凯氏烧瓶以便使消化进行得迅速而完全。在炭化时如有黑色碳粒溅在瓶壁上应将凯氏烧瓶移出。待冷却后加少量蒸馏水冲洗之。尔后再继续消化 3.对胶体物质或脂肪含量较高的样品。消化时应防止泡沫溢出瓶口.如发现有泡沫溢至瓶颈时应立即移开火源,并加1~2滴蒸馏水再继续消化。 4.蒸馏过程中要注意气体通路。即管夹要有一个打开,以免烫伤。在加试样分解液或碱液于反应室时要快。应先检查气源是否夹断。废液流出口是否畅通。开始蒸馏时应先通蒸汽后夹断废液排出口。否则所加液回流排出。 核心提示:饲料特别是植物性饲料中含量较多的非蛋白氮化合物如氨化物不能或不能完全被单胃动物(如猪、禽等)利用,只有真蛋白质才能被单胃动物消化、吸收与利用。因此饲料真蛋白质含量比饲料粗蛋白含量更能反映出饲料的营养价值。
⑤ 怎么测出饲料中的蛋白和能量
饲料中的粗蛋白含量一般用凯氏定氮法测定。
即在有催化剂的条件下,用回浓硫酸消答化样品将有机氮都转变成无机铵盐,然后在碱性条件下将铵盐转化为氨,随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收,再以标准盐酸滴定,就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定,可由其氮量计算蛋白质含量,故此法是经典的蛋白质定量方法。
测定饲料当中的能量有能量测定仪,一般是称重之后,将饲料样品放入仪器中操作,即可得到数值。
⑥ 饲料中真蛋白的检测方法
凯氏定氮法 网上没找到,就自己打了一份
饲料中纯蛋白质(真蛋白)的测定
一、测定原理
饲料蛋白质经沸水提取并在碱性溶液中被硫酸铜沉淀。过滤和洗涤后,可将纯蛋白质和非蛋白质含氮物分离,再用凯氏定氮法测定沉淀物中的蛋白质含量。
二、仪器设备
(1)烧杯:200ml
(2)定型滤纸
(3)其他设备与粗蛋白质测定法相同
三、试剂与配制
(1)100g.L-1硫酸铜溶液;分析纯硫酸铜(5水硫酸铜)10g溶于100ml水中
(2)25g.L-1氢氧化钠溶液:将2.5g分析纯氢氧化钠溶于100ml水中
(3)10g.L-1氯化钡溶液:1g氯化钡溶于100ml水中
(4)2mol.L盐酸溶液
(5)其他试剂与粗蛋白质测定法相同
四、测定步骤
准确称取试样1g左右(精确至0.0001g)置于200ml烧杯中,加50ml水中,加热至沸。
加入20ml硫酸铜溶液,20ml氢氧化钠溶液,用玻璃棒充分搅拌,放置1h以上。用定性滤纸过滤,然后用60~80摄氏度热水洗涤沉淀5或6次,用氯化钡溶液5滴和盐酸溶液1滴检查滤纸,直至不生成白色硫酸钡沉淀为止。将沉淀和滤纸放在65摄氏度烘箱干燥2h,然后全部转移到凯氏烧瓶中,按半微量凯氏定氮法进行氮的测定。
⑦ 饲料中蛋白质的测定中样品分解液蒸馏用体积指的是什么
分解液定容后,用移液管移取用于蒸馏的体积。
⑧ 饲料蒸馏粗蛋白以后,蒸馏体积多少馏时间以吸收液体体积达到锥形瓶ml为宜
用半微量蒸馏法做饲料粗蛋白时蒸馏发生器硫酸应加多少
蛋白质是含氮的有机化合物。食品与内硫酸和催化剂容一同加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,即为蛋白质含量。
有机物中的胺根在强热和CuSO4,浓H2SO4 作用下,硝化生成(NH4)2SO4
反应式为:
2NH2+H2S04+2H=(NH4)2S04 (其中CuSO4做催化剂)
2.在凯氏定氮器中与碱作用,通过蒸馏释放出NH3 ,收集于H3BO3 溶液中
反应式为:
(NH4)2SO4+2NaOH=2NH3+2H2O+Na2SO4
2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O
3. 用已知浓度的H2SO4(或HCI)标准溶液滴定,根据HCI消耗的量计算出氮的含量,然后乘以相应的换算因子,既得蛋白质的含量
反应式为:
(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O=(NH4)2SO4+4H3BO3
(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3
⑨ 饲料中真蛋白的检测方法,尽可能详细说明步骤
饲料中纯蛋白质的测定 一、测定原理 硫酸铜在碱性溶液中,可将蛋白质沉淀,且不溶于热水,过滤和洗涤后,可将纯蛋白质和非蛋白质含氮物分离,再用凯氏定氮法测定沉淀中的蛋白质含量。 二、仪器设备 (1)烧杯:200mL。 (2)定性滤纸。 (3)其它设备与粗蛋白质测定性相同。 三、试剂及配制 (1) 100g/L硫酸铜溶液:分析纯硫酸铜(CuSO4 5H2O)10g溶于100mL水中。 (2) 25g/L氢氧化钠溶液:将2.5g分析纯氢氧化钠溶于100mL水中。 (3) 10g/L氯化钡溶液:1g氯化钡(BaCl2 H2O)溶于100mL水中。 (4) 2mol/L盐酸溶液。 (5) 其它试剂与一般粗蛋白质测定法相同。 四、测定步骤 准确称取试样1g左右(精确至0.0001g),置于200mL烧杯中,加50mL水,加热至沸,加入20mL硫酸铜溶液,20mL氢氧化钠溶液,用玻璃棒充分搅拌,放置1小时以上,用倾斜过滤(用定性滤纸),然后用60-80℃热水洗涤沉淀5-6次,用氯化钡溶液5滴和盐酸溶液1滴检查滤液,直到不生成白色硫酸钡沉淀为止。将沉淀和滤纸放在65℃烘箱干燥2小时,然后全部转移到凯氏烧瓶中,消化后进行氮测定。 五、结果计算 同粗蛋白质测定。
⑩ 用半微量蒸馏法做饲料粗蛋白时蒸馏发生器硫酸应加多少
用半微量蒸馏法做饲料粗蛋白时蒸馏发生器硫酸应加多少
蛋白质是含氮的版有机化合物权。食品与硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,即为蛋白质含量。
1.有机物中的胺根在强热和CuSO4,浓H2SO4 作用下,硝化生成(NH4)2SO4
反应式为:
2NH2+H2S04+2H=(NH4)2S04 (其中CuSO4做催化剂)
2.在凯氏定氮器中与碱作用,通过蒸馏释放出NH3 ,收集于H3BO3 溶液中
反应式为:
(NH4)2SO4+2NaOH=2NH3+2H2O+Na2SO4
2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O
3. 用已知浓度的H2SO4(或HCI)标准溶液滴定,根据HCI消耗的量计算出氮的含量,然后乘以相应的换算因子,既得蛋白质的含量
反应式为:
(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O=(NH4)2SO4+4H3BO3
(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3