① 在制備酪蛋白過程中,在第一步中用緩沖液洗滌沉澱與用蒸餾水洗滌沉澱提取酪蛋白理論上是不是應該緩沖液那個
從牛奶中分離酪蛋白和乳糖
一、引言
牛奶中主要的蛋白質是酪蛋白，含量約為35g/l。酪蛋白在乳中是以酪蛋白酸鈣-磷酸鈣復合體膠粒存在，
膠粒直徑約為20～800納米，平均為100納米。在酸或凝乳酶的作用下酪蛋白會沉澱，加工後可製得乾酪或乾酪素。本實驗利用加酸，當達到酪蛋白等電點PH=4.7時，酪蛋白沉澱。脫脂乳中除去酪蛋白後剩下的液體為乳清，在乳清中含有乳白蛋白和乳球蛋白，還有溶解狀態的乳糖，乳中糖類的99.8%以上是乳糖，可通過濃縮、結晶製取乳糖。
二、實驗材料和試劑
脫脂乳或脫脂奶粉。
醋酸-醋酸鈉緩沖溶液（PH=4.7），95%乙醇，乙醚，碳酸鈣粉末，苯肼試劑。
三、實驗步驟
1. 從牛奶中分離酪蛋白
在燒杯中加入2g脫脂奶粉，再加入40ml40℃，PH=4.7的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液40ml，
用PH精密試紙檢驗液體的PH值。靜置冷卻至室溫，傾去上層清液（留作分離乳糖用），剩下的懸浮液分別裝入兩支離心試管中，用轉速為2000轉/分離心分離3～5分鍾，傾出上層清液，（合並於上一清液中），得酪蛋白粗品。於離心管中加入5ml蒸餾水，用玻棒充分攪拌，洗滌除去其中的水溶性雜質（如乳清蛋白，乳糖以及殘留的緩沖溶液），離心後棄去上層液，再用蒸餾水洗一次。於試管中加入5ml95%乙醇，充分攪拌，離心後棄去乙醇溶液，用乙醇洗滌主要是除去磷脂類物質。最後再用5ml乙醚以同樣方法洗滌，以除去脂肪類物質。將酪蛋白沉澱物涼干，稱重、並計算得率。
2. 從牛奶中分離乳糖
在除去酪蛋白的乳清中，加入1.5g CaCO3粉末，攪拌均勻後加熱至沸。加CaCO3的目的一方面是中和溶液的酸性，防止加熱時乳糖水解，另方面又能使乳白蛋白沉澱。過濾除去沉澱，在濾液中加入1～2粒沸石，加熱濃縮至3～5ml，加入10ml 95%乙醇（注意離開火焰）和少量活性炭，攪拌均勻後在水浴上加熱至沸騰，趁熱過濾，濾液必須澄清。加塞放置過夜，乳糖結晶析出，抽濾，用95%乙醇洗滌產品。
3. 乳糖成脎試驗
取自製乳糖溶於少量水中，濃度約為5%，在試管中加入1ml乳糖溶液，1ml苯肼試劑①，搖勻，試管口用棉花塞住，在沸水浴中加熱，並不時振搖，加熱10～15分鍾後，取出放置冷卻，乳糖脎成結晶析出。取少量乳糖脎在顯微鏡下觀察其結晶形態，可證實為乳糖。
①苯阱試劑有毒，小心使用，勿觸及皮膚，如觸及皮膚先用稀醋酸洗，再用水洗。
另外附上：
蛋白質分離純化的一般程序可分為以下幾個步驟：
（一）材料的預處理及細胞破碎
分離提純某一種蛋白質時，首先要把蛋白質從組織或細胞中釋放出來並保持原來的天然狀態，不喪失活性。所以要採用適當的方法將組織和細胞破碎。常用的破碎組織細胞的方法有：
1. 機械破碎法
這種方法是利用機械力的剪切作用，使細胞破碎。常用設備有，高速組織搗碎機、勻漿器、研缽等。
2. 滲透破碎法
這種方法是在低滲條件使細胞溶脹而破碎。
3. 反復凍融法
生物組織經凍結後，細胞內液結冰膨脹而使細胞脹破。這種方法簡單方便，但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質不宜採用此法。
4. 超聲波法
使用超聲波震盪器使細胞膜上所受張力不均而使細胞破碎。
5. 酶法
如用溶菌酶破壞微生物細胞等。
(二) 蛋白質的抽提
通常選擇適當的緩沖液溶劑把蛋白質提取出來。抽提所用緩沖液的pH、離子強度、組成成分等條件的選擇應根據欲制備的蛋白質的性質而定。如膜蛋白的抽提，抽提緩沖液中一般要加入表面活性劑（十二烷基磺酸鈉、tritonX-100等），使膜結構破壞，利於蛋白質與膜分離。在抽提過程中，應注意溫度，避免劇烈攪拌等，以防止蛋白質的變性。
（三）蛋白質粗製品的獲得
選用適當的方法將所要的蛋白質與其它雜蛋白分離開來。比較方便的有效方法是根據蛋白質溶解度的差異進行的分離。常用的有下列幾種方法：
1. 等電點沉澱法
不同蛋白質的等電點不同，可用等電點沉澱法使它們相互分離。
2. 鹽析法
不同蛋白質鹽析所需要的鹽飽和度不同，所以可通過調節鹽濃度將目的蛋白沉澱析出。被鹽析沉澱下來的蛋白質仍保持其天然性質，並能再度溶解而不變性。
3. 有機溶劑沉澱法
中性有機溶劑如乙醇、丙酮，它們的介電常數比水低。能使大多數球狀蛋白質在水溶液中的溶解度降低，進而從溶液中沉澱出來，因此可用來沉澱蛋白質。此外，有機溶劑會破壞蛋白質表面的水化層，促使蛋白質分子變得不穩定而析出。由於有機溶劑會使蛋白質變性，使用該法時，要注意在低溫下操作，選擇合適的有機溶劑濃度。
（四）樣品的進一步分離純化
用等電點沉澱法、鹽析法所得到的蛋白質一般含有其他蛋白質雜質，須進一步分離提純才能得到有一定純度的樣品。常用的純化方法有：凝膠過濾層析、離子交換纖維素層析、親和層析等等。有時還需要這幾種方法聯合使用才能得到較高純度的蛋白質樣品。
② 蛋白質純化儀
蛋白質純化與結晶的原理 獲得蛋白質的晶體結構的第一個瓶頸，就是制備大量純化的蛋白質（>10mg），其濃度通常在10mg/ml以上，並以此為基礎進行結晶條件的篩選。運用重組基因的技術，將特定基因以選殖（clone）的方式嵌入表現載體（expression vector）內，此一載體通常具有易於調控的特性。之後再將帶有特定基因的載體送入可快速生長的菌體中，如大腸桿菌（Escherichia coli），在菌體快速生長的同時，也大量生產表現載體上的基因所解譯出之蛋白質。一般而言純度越高的蛋白質比較有機會形成晶體，因此純化蛋白質的步驟就成為一個重要的決定因素。 在取得高純度的蛋白質溶液後，接下來就是晶體的培養。蛋白質晶體與其他化合物晶體的形成類似，是在飽和溶液中慢慢產生的，每一種蛋白質養晶的條件皆有所差異，影響晶體形成的變數很多，包含化學上的變數，如酸鹼度、沉澱劑種類、離子濃度、蛋白質濃度等；物理上的變數，如溶液達成過飽和狀態的速率、溫度等；及生化上的變數，如蛋白質所需的金屬離子或抑制劑、蛋白質的聚合狀態、等電點等，皆是養晶時的測試條件。截至目前為止，並無一套理論可以預測結晶的條件，所以必須不斷測試各種養晶溶液的組合後，才可能得到一顆完美的單一晶體。 蛋白質晶體的培養，通常是利用氣相擴散法（Vapor Diffusion Method）的原理來達成；也就是將含有高濃度的蛋白質（10～50mg/ml）溶液加入適當的溶劑，慢慢降低蛋白質的溶解度，使其接近自發性的沈澱狀態時，蛋白質分子將在整齊的堆棧下形成晶體。舉例來說，我們將蛋白質溶於低濃度（~1.0M）的硫酸銨溶液中，將它放置於一密閉含有高濃度（~2.0M）硫酸銨溶液的容器中，由氣相平衡，可以緩慢提高蛋白質溶液中硫酸銨的濃度，進而達成結晶的目的。 蛋白質晶體在外觀上與其他晶體並無明顯不同之處，但在晶體的內部，卻有很大的差異。一般而言，蛋白質晶體除了蛋白質分子外，其他的空間則充滿約40%至60%之間的水溶液，其液態的成分不僅使晶體易碎，也容易使蛋白質分子在晶格排列上有不規則的情形出現，造成晶體處理時的困難及繞射數據上的搜集不易等缺點。但也由於高含水量的特性，讓蛋白質分子在晶體內與水溶液中的狀態，極為相似。所以由晶體所解出的蛋白質結構，基本上可視為自然狀態下的結構。
③ 生物高手請進：請問「利用透析法純化蛋白酶時，應以蒸餾水作為透析液」這句話為什麼錯了難道蒸餾水會...
1，用緩沖液更能保證蛋白質的活性，用蒸餾水雖說沒有嚴重錯誤但對蛋白質活性的保持還版是有風險的，若實驗權中不小心濺進去酸或鹼，顯然緩沖液更保險。
2，合適的緩沖液可以抑制蛋白質水解，保持將ph控制在等電點附近，防止蛋白質聚沉。3，蛋白質多親水，緩沖液中離子可以防止過多水分子水合蛋白質。
至於別的緩沖液，最好還是用磷酸，原因：1，磷酸三元且弱酸，緩沖餘地更大，而且磷元素比較親生物。2，碳酸鈉，碳酸氫鈉易分解，亞硫酸根又時不時會產生有毒物質，硫代硫酸根又活潑，氫氟酸，次氯酸更不用說，常見的只有磷酸緩沖液最佳。
④ 純凈水和蒸餾水有什麼區別哪種水比較好
1、純凈水指的是不含雜質的H2O，簡稱凈水或純水，是純潔、干凈，不含有雜質或細菌的水，如有機污染物、無機鹽、任何添加劑和各類雜質，是以符合生活飲用水衛生標準的水為原水。
2、蒸餾水就是將水蒸餾、冷凝的水，蒸二次的叫重蒸水，三次的叫三蒸水。低耗氧量的水，加入高錳酸鉀與酸工業蒸餾水是採用蒸餾水方法取得。（簡單地說就是水沸騰後液化成的小水滴）
蒸餾水
採用蒸餾法或其他多層過濾加工製成，將有害物質及微生物去除，但同時也去除了鉀、鈣、鎂等人體所需的礦物質。
在這個看似十分嚴密的生產過程中卻隱藏著一定的風險。自來水中含有氰化物和揮發酚，這兩種物質容易揮發，用蒸餾法生產則會濃縮這兩種物質的含量。在蒸餾的過程中，如果方法不注意，將會存在風險。
腎結石患者建議選擇無礦物質的蒸餾水為好，對於健康體質的人群，則不建議過多飲用蒸餾水。
沒有礦物元素，容易有氰化物和揮發酚。
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純凈水
純凈水是用符合生活飲用水衛生標準的水為原料，通過離子交換、反滲透等生產工藝製成。一方面濾掉了水中的有害物質，另一方面也濾掉了對人體有益的礦物質和微量元素。
離子含量低，水的硬度低，幾乎不含礦物質，用它來燒水不會形成水垢，但長期飲用可能會造成微量元素缺乏，降低人體免疫力，增加心腦血管患病的風險。
運動量大、出汗多的如運動員、煉鋼工人等人群不宜大量補充純凈水，因為無法從中攝取鈉等微量元素。
是很乾凈，但缺乏營養元素，不建議長期喝。
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蒸餾水能喝嗎
水沸騰後產生的水蒸氣經過冷卻凝縮，再次成為水，這樣的加工的水被稱為蒸餾水。蒸餾水能喝嗎，有網友認為蒸餾水最純凈，可以飲用，而且飲用後也沒有什麼症狀發生。但是，蒸餾水是去除了有機物和無機物的，長期飲用只怕不能滿足人體對必需的物質的吸收。所以蒸餾水最好不要長期飲用。
1、蒸餾水是經加熱至蒸發氣化，水蒸汽經冷凝得到的水，它是比較純凈的衛生用水，常被用來配製葯劑和化學試劑等，但不宜當飲用水喝。
2、蒸餾水經過長時間的加熱沸騰，水中的一部分硝酸鹽就會變成亞硝酸鹽，亞硝酸鹽會使血液中的血紅蛋白變性，從而使血壓下降，嚴重時會引起血脫。
3、蒸餾水在蒸餾過程中失去很多人體需要的礦物質，如果大量長期飲用蒸餾水，會引起胸悶、惡心、腹瀉和體力衰退、性情焦躁等症狀，危害人體健康。
4、蒸餾水沒有人體所需的礦物質元素鎂、鈉、鈣，對人體沒什麼好處，長期飲用會導致人體無機鹽流失。
5、蒸餾水是活躍的吸收媒介，當它與空氣接觸，會吸收二氧化碳令水變酸。蒸餾水喝得越多，身體的酸化越利害。
⑤ 在進行蛋白質鹽析時,用自來水代替蒸餾水進行試驗,試驗結果會不同么為什麼
肯定不同,因為自來水雜質較多.不同的鹽,結果都不相同,何況水質不一.
⑥ 蒸餾水是什麼呢
蒸餾來水就是將水源蒸餾、冷凝的水，蒸二次的叫重蒸水，三次的叫三蒸水。低耗氧量的水，加入高錳酸鉀與酸工業蒸餾水是採用蒸餾水方法取得。（簡單地說就是水沸騰後液化成的小水滴）
蒸飯，蒸包子時鍋蓋上的水珠都是蒸餾水。
⑦ 透析法純化蛋白酶為什麼不能用蒸餾水
溶解度問題
⑧ 利用透析法純化蛋白酶應以蒸餾水作為透析液這句話對嗎
不對
用緩沖溶液
⑨ 為什麼利用透析法純化蛋白時，為什麼不能用蒸餾水做透析液
因為蛋白在范餾水中不穩定。也許是進化的關系，蛋白要保證有一定濃度的鹽離子才能比較穩定，相互之間不會產生聚集而沉澱。
一般如果沒有特別的溶液，用PBS就可以了。最好是放四度冰箱，經常換水，盡快透析完。
⑩ 蛋白質純化方法及原理
原理：不同蛋白質具有不同的等電點，當蛋白質混合物調到其中一種蛋白質的等電點時，這種蛋白質大部分和全部被沉澱下來。
將待提純蛋白質放在透析袋中放在蒸餾水中，利用磁力攪拌器。常用的半透膜：玻璃紙、火棉和其他材料合成。
當不同分子大小的蛋白質混合物流進凝膠層析柱時，比凝膠網孔大的分子不能進入珠內網狀結構，排阻在凝膠珠以外，在凝膠珠縫隙間隙中向下移動。而比孔小的分子不同程度地進入凝膠珠內，這樣由於不同大小分子所經歷的路徑不同而到分離。