膠回收純水洗脫

㈠ 膠回收DNA-漂洗液忘記加乙醇就直接上柱子了-可以補救嗎

乙醇應該是展開劑吧
過柱子忘記加展開劑是影響分離效果的
如果剛加進去，應該影響不大，可以把上面一點點摳出來，單獨裝柱，用乙醇洗脫，再濃縮以後重新過柱子
如果已經加了有一段時間了，就直接在柱子里加乙醇吧
把柱子里的東西全洗脫出來沒然再濃縮、重新過

㈡ pcr產物的膠回收和純化的步驟是分開的嗎

膠回收是膠回收，純化是純化。膠回收的過程也能達到純化的目的，只是因為要跑膠要稍麻煩些，一般用於產物特異性不大好時。純化相對就要省事多了，但不適用有非特異擴增的產物

㈢ 瓊脂糖凝膠回收漂洗液成分是什麼

你是想要了解漂洗液的成分的話，可以吧東西寄到像英格爾檢測這樣的大型第三方機構，做一份產品的成分分析就能夠得到你想要知道的產品成分。

㈣ PEGE膠怎麼回收到DNA我用沸水煮10分鍾，搗碎後再煮10分鍾，剛開始PCR後有帶，現在怎麼都沒有帶

從PAGE膠中回收DNA應該比較容易，
首先最簡便的方法是跑PAGE膠後，根據目的條帶切割，用直接購買的從PAGE膠回收DNA的試劑盒回收，得率可為80-90%左右。好幾個公司都有售。
如廣州齊科特生物工程公司的E.Z.N.A. Poly Gel DNA Extraction Kit（聚丙烯醯胺DNA膠回收） 從PAGE膠上回收DNA片段
上海皓嘉科技的【D2561-01】PAGE膠DNA回收試劑盒.
等等應該都可用，
其次，更簡便，更簡陋的方法是不需要試劑盒，直接PAGE膠跑完後，紫外燈下切割，在洗脫液中浸泡 37攝氏度，過夜。大部分都可溶入洗脫液中。但此法得率較低，我做過PAGE膠回收RNA，得率約50%，但DNA可能會高一些，不妨一試，祝你好運！

㈤ 質粒或者膠回收試劑盒最後一步洗脫時用的是試劑盒自帶的TE buffer還是去離子水

用Buffer吧，質粒在一定離子強度和pH值的條件下溶解度要大於去離子水。

㈥ 膠回收的吸附柱沒用平衡液bl進行處理，會對後續的實驗有什麼影響

不是避免與空氣接觸，關鍵是排除其中氣泡，氣泡影響分離效果。

㈦ 膠回收試劑盒裡各溶劑的作用

1試劑盒

簡介：
試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知濃度的標准品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將生物素標記的抗體同時溫育。洗滌後，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然後加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關系。
2膠回收試劑盒的操作步驟(omega)

1. 配製瓊脂糖EB凝膠,電泳以分離DNA片段。任何類型或等級的瓊脂糖都可以使用。
我們強烈的推薦使用新鮮的TAE/TBE電泳緩沖液。不要重復使用電泳緩沖液，舊的電泳緩沖液PH會增加而降低DNA的回收產量；[1]
2. 電泳足夠時間後，在紫外燈下小心地把所需的DNA的片段切下來。並盡量去除多餘的凝膠。
注意：DNA在紫外燈下的曝光的時間不要超過30秒，同時在紫外燈下操作的時候一定要戴保護眼鏡。
3. 稱取空離心管的重量，切下帶目的片段的凝膠裝在1.5ml離心管中並稱其重量，求出凝膠塊的重量，近似地確定其體積。一般情況下，凝膠的密度為1g/ml，於是凝膠的體積與重量的關系可按下面換算：凝膠薄片的重量為0.2g 則其體積為0.2ml；加入等倍凝膠體積的Binding Buffer，把混合物置於55℃~65℃水浴中溫浴7min至凝膠完全融化，其間每隔2-3分鍾混勻一次；
重要提醒：在凝膠完全溶解之後，注意凝膠-Binding Buffer混合物的pH值。如果其pH值大於8的話，DNA的產量將大大減少。觀察混合物的顏色，如果是橙色或紅色，則要加入5μl 濃度為5 M，pH為5.2的醋酸鈉，以調低其pH值。經過這一調節，該混合物的顏色將恢復為正常的淺黃色。一般情況下，使用新鮮的電泳緩沖液，凝膠－Binding buffer混合物的PH值的不會升高；
4. 轉移700μl的DNA-瓊脂糖溶液到一個HiBindTM DNA柱子，並把柱子裝在一個干凈的2ml收集管內，室溫下，10,000×g離心1min，棄去液體。
一個HiBind DNA柱子最多可容納700μl的溶液，如果DNA-瓊脂糖混合物的體積大於700μl，可先轉移700μl溶液至柱子，離心完後，將餘下的溶液繼續加上柱子上。但是每一個HiBindTM柱子最多可以結合25~30μg DNA。如果預期產量較大，則把樣品分別加到合適數目的柱中。
5. 將柱子重新套回收集管中，加300μl Binding Buffer至HiBind DNA 柱子中；室溫下，10,000×g離心 1分鍾，去棄濾出液；這一步相當關鍵，不要忽略此步。
6. 將柱子重新套回收集管中，加入700μl SPW Wash buffer至HiBind DNA柱子中，室溫下，10,000×g離心1分鍾，去棄濾出液；註：SPW Wash buffer在使用前必須按瓶子標鑒要求用無水乙醇進行稀釋。
7. 將柱子重新套回收集管中，重復加入700μl SPW Wash buffer至HiBind DNA柱子中，室溫下，10,000×g離心1分鍾，去棄濾出液；
8. 棄去液體，將空柱子重新套回收集管中，10,000×g離心1min以甩干柱基質殘余的液體。
這步可以去除柱子基質上殘余的乙醇，不要省略此步―――對得到好的DNA產量是十分重要的。
9. 把柱子裝在一個干凈的1.5ml離心管上，加入30~50μl洗脫液或滅菌水上柱子膜上，10,000×g離心1分鍾，離心管中的溶液就是純化的DNA產物，保存於-20度。
如果再洗脫一次的話可以把殘余的DNA洗脫出來，不過那樣的濃度就會較低。
DNA的產量及質量：
把純化產物的樣品稀釋一定的倍數後，分別在260nm和280nm下測其光吸收值，回收得到的DNA的濃度可按以下公式來計算： DNA濃度=光吸收260×50×稀釋倍數μg/ml
長度大於500bp的片段通常能純化得到80%的產量。 而50bp~500bp的帶則可達到55%~80%的回收率。(光吸收260/光吸收280)的比率是核酸純度的一個標記。如果此值1.8，則意味著核酸的純度>90%。另一方面，如果純化產物的產量較低時，可以用瓊脂糖EB電泳估算產物的濃度。

㈧ Dna膠回收實驗中 binding buffer ，wash solution ，elution buffer的作用分別是什麼

用binding buffer是為了增加洗脫柱對核酸的結合活性；wash solution是洗掉柱子里除核酸物質以外的雜質；而shuelution buffer就是最後把DNA從柱子上洗脫下來使用的溶液，一般是pH=8.0的TE，dd水也可以。

如果不是馬上使用DNA，可以將切下的膠放入離心管中-20度保存，這樣可以保存更長時間，而且對DNA影響較小；使用時再從膠里回收DNA。

(8)膠回收純水洗脫擴展閱讀：

把純化產物的樣品稀釋一定的倍數後，分別在260nm和280nm下測其光吸收值，回收得到的DNA的濃度可按以下公式來計算： DNA濃度=光吸收260×50×稀釋倍數μg/ml

長度大於500bp的片段通常能純化得到80%的產量。 而50bp~500bp的帶則可達到55%~80%的回收率。(光吸收260/光吸收280)的比率是核酸純度的一個標記。如果此值1.8，則意味著核酸的純度>90%。另一方面，如果純化產物的產量較低時，可以用瓊脂糖EB電泳估算產物的濃度。

㈨ 電泳做凝膠回收時應注意哪些細節

DNA膠回收，應該就是瓊脂糖電泳的吧？首先要確定方法，是試劑盒還是自己配的試劑，試劑盒的話有protocal，照著做就是了，自己配的呢操作流程也跟試劑盒差不多，基本上都是切膠--加熱溶解--上柱結合--洗滌雜質--去離子水洗脫 其次需要注意的就是相對應的幾個環節呢，首先電泳緩沖液一定要是新的，保證所用的器具的潔凈，包括刀片，避免污染，倒的膠盡量比平時厚，保證樣品全部上完，其次避免紫外的長時間照射，切膠的時候盡量少切膠，上柱結合的時候洗滌液一定要記得加酒精，洗滌後多敞洗脫液一般用去離子水30-50ul，可以洗兩次。

㈩ Takara膠回收試劑盒 說明書，具體操作步驟

1. 瓊脂糖凝膠電泳分離DNA片段,任何類型或等級的瓊脂糖都可以使用.我們強烈的建議您使用新鮮的TAE Buffer作為電泳緩沖液.不要重復使用電泳緩沖液,因為會因其PH的升高而減少產量.新鮮的TBE也可以用,但只能得到較低的產量.
2. 當所需DNA片段完全分離時,轉移凝膠至紫外燈上,盡可能快地把所需的DNA片段切下來.
注:切膠時盡量把多餘的凝膠切去,DNA曝露在紫外燈下不能超過30秒.
3. 將帶有目的片段的凝膠塊轉移至1.5ml離心管(離心管已經稱重了)中,稱重得出凝膠塊的重量.近似地確定其體積.假設其密度為1g/ml(幾乎所有DNA凝膠的密度都可以近似為1g/ml),於是凝膠塊的體積便可通過如下方法得到:凝膠薄片的重量為0.2g, 則其體積為
0.2 ml.加入等體積的Binding Buffer(XP2),於55-65℃水浴中溫浴7min或至凝膠完全融化,每2-3 min振盪或渦旋混合物.
重要提醒:在凝膠完全溶解之後,注意凝膠-Binding buffer混和物的pH值.如果其pH值大於8的話,DNA的產量將大大減少.觀察混和物的顏色,如果是橙色或紅色,則要加入5 ul 濃度為5 M,pH為5.2的醋酸鈉,以調低其pH值.經過這一調節,該混合物的顏色將恢復為正常的淺黃色.
4. 取一個干凈的HiBind DNA Mini柱子裝在一個干凈的2ml收集管內(已備好).
5. 將第三步獲得的DNA/熔膠液全部轉移至柱子中.室溫下10,000 x g離心1分鍾.棄收集管中的濾液,將柱子套回2ml收集管內.
6. 如果DNA/凝膠熔液的體積超過700ul,一次只能轉移700ul至柱子中,餘下的可繼續重復第5步至所有的溶液都經過柱子.每一個Hibind DNA回收純化柱都有一個極限為25gDNA的吸附能力.如果預期產量較大,則把樣品分別加到合適數目的柱子中.
7. 棄收集管中的濾液,將柱子套回2ml收集管內.移300ul Binding Buffer(XP2)至柱子中,室溫下, 10,000 x g下離心1min.
8. 棄收集管中的濾液,將柱子套回2ml收集管內.移700ul SPW Wash buffer(已用無水乙醇稀釋的)至柱子中.室溫下10,000xg離心1min.
注意:濃縮的SPW Wash Buffer 在使用之前必須按標簽的提示用乙醇稀釋.如果DNA 洗滌緩沖液在使用之前是置於冰箱中的,須將其拿出置於室溫下.
9. 重復用700ul SPW Wash buffer洗滌柱子.室溫下10,000xg離心1min.
10. 棄收集管中的濾液,將柱子套回2ml收集管內.室溫下,13,000 x g離心2 min以甩干柱子基質殘余的液體.
11. 把柱子裝在一個干凈的1.5ml離心管上,加入15~30ul(具體取決於預期的終產物濃度)的Elution Buffer(或TE緩沖液)到柱基質上,室溫放置1min, 13,000xg離心1min以洗脫DNA.
第一次洗脫可以洗出70-80%的結合DNA. 如果再洗脫一次的話,可以把殘余的DNA洗脫出來,不過那樣的濃度就會較低.