⑴ DNA純化的方法
DNA純化
首先利用瓊膠電泳將不同分子量的DNA片段分開,將某一特定分子量區域的瓊膠切下,利用DNA extraction kit將DNA從瓊膠中溶出並濃縮.
實驗材料
( 6X gel-loading dye:15% Ficoll 400, 0.25% bromophenol blue,
0.25% xylene cyanol
( 紫外光箱
( 下列試劑來自GeneAid公司所售的Gel/PCR Fragment Extraction Kit:
* DF Buffer
* Wash Buffer
* Elution Buffer:10mM Tris-HCl(pH8.5)
* DF Column
* 2ml Collection Tube
實驗步驟
A.將欲分離之DNA混合物以0.7%瓊膠電泳分離.
B.電泳後,將瓊膠置於紫外光箱上觀察,把含有欲純化之DNA片段的瓊膠部位切下.
C.將步驟B的瓊膠以藍色微量吸管盡可能戳碎.
D.加入500ml DF buffer,55oC作用10分鍾,每2-3分鍾搖晃數次,直至瓊膠完全溶解.
E.將步驟D瓊膠溶液全部吸入DF Column,並套上Collection Tube(收集過濾液).
F.8000rpm離心1分鍾,將過濾液倒掉.
G.加入500ml Wash Buffer,8000rpm離心1分鍾,過濾液倒掉.
H.14000rpm離心2分鍾.
I.將DF Column轉移至上另一乾凈的微量離心管.加入15ml Elution Buffer,室溫靜置2分鍾.
J.14000rpm離心2分鍾,微量離心管內之液體即為純化的DNA片段.
K.取0.5ml純化的DNA加入4.5mlDDW及1ml 6x DNA loading dye,跑0.7%瓊膠電泳,與marker比較,估計DNA的濃度.
⑵ 回收dna膠時若要稀釋是用depc水稀釋嗎
DNA比較穩定，DEPC主要是處理RNase的，在有RNA樣品時使用。
不太明白，如果是膠回收，一般都直接用試劑盒，裡面帶的buffer就可以用。
你說的應該是回收以後的稀釋吧。主要看稀釋後樣品做什麼用，一般用超純水稀釋就可以了。
⑶ DEPC水的制備過程，方法
無RNA酶滅菌水DEPC水：用將高溫烘烤的玻璃瓶（180℃×2h）裝蒸餾水，然後加入0.1%的DEPC（體積/體積），處理過夜後高壓滅菌。
DEPC水：
泡實驗器具的DEPC水的配製：1000ml雙蒸水中加1mlDEPC，放在1000ml容量瓶中靜置4小時後備用。
配75％乙醇的DEPC水的配製：100ml鹽水瓶內裝40ml雙蒸水，加40ulDEPC，37℃過夜，送至高壓。
⑷ 如何用depc水稀釋dna濃度
DNA比較穩定,DEPC主要是處理RNase的,在有RNA樣品時使用.不太明白,如果是膠回收,一般都直接用試劑盒
⑸ 純化DNA時，試劑盒中說漂洗液使用前要先加無水乙醇，請問是直接把它加到購買的試劑中，還是加到每次所需的
直接加到購買的試劑中，一般15ml加60ml酒精，作用是洗去樣品中的鹽離子
⑹ depc處理水和depc水處理的區別
DEPC處理水是用DEPC(diethyl pyrocarbonate，焦碳酸二乙酯)處理過並經高溫高壓滅菌的MiliQ純水。不含雜質RNA、DNA和蛋內白質。
depc水處理是用DEPC對水進行容處理的手段方法。
⑺ depc處理水可以稀釋dna酶嗎
RNA提取沒必要用DNA酶處理主要用途關僅僅擴某基所謂定量RT-PCR則DNA酶處理或者引物需跨exon.
比用QIAGENRNase-freeDNase處理加DNase結束除DNase（蛋白）buffer等能影響期操作素所酶解DNA必須純化RNA（QIAGEN純化柱）RNA才用於定量實驗即使做real-time PCR都要加管僅加RNA作陰性照（排除DNA污染）
⑻ DEPC水和DEPC處理水的區別如何配製
使用濃度是1000mL水中加100微升的DEPC.
⑼ DEPC水和DEPC處理水怎麼處理掉
DEPC處理水是用DEPC(diethyl pyrocarbonate，焦碳酸二乙酯)處理過並經高溫高壓滅菌的MiliQ純水。不含雜質RNA、DNA和蛋白質。depc水處理是用DEPC對水進行處理的手段方法。
⑽ 提取RNA時用於沉澱DNA的NaOAC如何自製，用DEPC水配製嗎
一切與提取RNA有關的液體試劑，必須用DEPC水配製，這是最基本的要求，因為RNA降解酶的分布太廣了，無處不在，放不勝防啊