① 請問台盼藍染色（區分死細胞與活細胞）和結晶紫染色的染液的配製方法以及染色的步驟是怎麼樣的謝謝！
一. 台盼藍配製：4％台盼藍母液：稱取4克台盼藍，加入少量蒸餾水研磨，加0.9%NaCl至100毫升，用濾紙過濾，4℃保存。或者直接用0.9%的生理鹽水或者PBS配成母液 用的時候用生理鹽水或者PBS稀釋 。
台盼藍染色步驟：
1.、4%台盼藍母液：稱取4g台盼藍，加少量蒸餾水研磨，加雙蒸水至100ml，用濾紙過濾，4度保存。使用時。用PBS稀釋至0.4%。（也可買Gibco的成品）; T
2、胰酶消化貼壁細胞，制備單細胞懸液，並作適當稀釋。
3、染色：細胞懸液與0.4%台盼藍溶液以9:1混合混勻。（終濃度0.04%）
4、計數：在三分鍾內，分別計數活細胞和死細胞。
5、鏡下觀察，死細胞被染成明顯的藍色，而活細胞拒染呈無色透明狀。
6、統計細胞活力：活細胞率（%）= 活細胞總數/（活細胞總數+死細胞總數）×100%
二. 結晶紫配製：
結晶紫 2.0g
草酸銨 0.8g
95％酒精 20ml
餾水 80ml
先將結晶紫溶於酒精，草酸銨溶於蒸餾水中，然後將兩液混合，靜置48小時使用。此染液穩定，置密閉的棕色瓶中可儲存數月。
結晶紫染色步驟：
1．在96孔細胞培養板各孔中加0.1ml含5×104～10×4 WEHI-164細胞的培養液（含10％小牛血清的RPMI-1640培養液），37℃ 5％ CO2的二氧化碳培養箱中培養2～3小時，讓細胞帖壁。
2．用RPMI-1640培養液10倍遞次稀釋TNF標准品，根據需要3～5倍遞次稀釋待檢樣品，每孔加0.1ml稀釋的標准品或待檢樣品，每個稀釋度3個重復孔。對照孔6個，3個陽性對照孔各加0.1ml含4μg TNF的RPMI-1640培養液，3個陰性對照孔各加100μl RPMI-1640培養液。繼續培養18～24小時。
3．甩去培養液，用PBS小心洗滌一次，每孔加0.1ml 10％甲醇溶液固定細胞30秒鍾。
4．吸去甲醇溶液，每孔加0.1ml結晶紫染液，室溫中放置20分鍾。
5．輕輕甩去染色液，用蒸餾水洗滌各孔，將培養板倒置於吸水紙上吸干水分。自然乾燥或37℃烘乾。此板可以在室溫中長期保存。
6．測定前，每孔加0.1ml 33％醋酸脫色，充分振盪後在570nm處測定光吸收度。用光吸收度（OD）值對樣品稀釋度作圖，比較標准品曲線和待檢樣品曲線即可得到待測樣品中的細胞因子活性