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超濾離心管結束怎麼收集液體

發布時間:2022-11-27 16:26:55

『壹』 離心操作時,為防液體溢出,離心管中樣品裝量不能超過離心管體積的多少

不能超過離心管體積的三分之二。這樣做的目的一是為防止液體溢出,二是為了降低離心力從而保護離心機。

離心機轉子高速旋轉時,當懸浮顆粒密度大於周圍介質密度時,顆粒離開軸心方向移動,發生沉降;如果顆粒密度低於周圍介質的密度時,則顆粒朝向軸心方向移動而發生漂浮。

常用的離心機有多種類型,一般低速離心機的最高轉速不超過6000rpm,高速離心機在25000rpm以下,超速離心機的最高速度達30000rpm以上。

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實現方法

1、穿刺法

這是方便而又理想的部分收集方法。用一根金屬空心針從離心管底刺人管內,不同區帶內的組分自下而上地先後從針管內分別流出,然後用部分收集器分別收集。

2、取代法

在離心管口加一個帶有收集導管的塞子,塞子上同時裝有一根輸液導管插入離心管的管底,從輸液管中注入高密度的離心介質.其密度高於離心管中所形成的最大密度。當取代液不斷注入時離心管中的溶液逐漸上升,並不斷從收集導管中流出,然後用部分收集器分別收集。

『貳』 用超濾膜(3kDa)抽濾後,如何收集濾膜上的高分子物質

這個只能清洗了,就看你截留的是什麼物質,用溶劑去洗,或者也可以藉助離心機。

『叄』 超濾管離心後為什麼還剩餘液體

題主是否想詢問「超濾管的使用方法」?
1、選擇合適的超濾管,主要考慮蛋白分子量和濃縮體積。
2、新超濾管使用前加入純水,水量完全過膜,冰浴或者冰箱里。
3、使用過的超濾管先倒出內涵乙醇,然後用純凈水沖洗干凈,
4、質量和重心都達到平衡。

『肆』 超濾濃縮離心管使用前要怎麼處理

可能不同廠家的產品保存運輸條件不一樣。
如果有甘油等保護劑,那就一定要洗干凈再加樣品。
乾的超濾管也要先潤濕再用,否則可能不能完全利用膜面積。
最好,用樣品buffer潤洗下再加樣,最大程度保證蛋白活性。尤其是用過後保存在NaOH或乙醇中後。
一般還是離心機甩一下好,使膜充分浸潤。
降低吸附的辦法有:
1,蛋白濃度不要過低
2,盡量選用纖維素的低吸附超濾管
3,用前可以用Tween
80等去垢劑潤洗(不影響蛋白活性的前提下)
4,加入保護蛋白,如BSA(不影響蛋白後續使用的前提下)
用完保存在20%
EtOH中,4C保存,防止長菌,依不同樣品可以重復使用不同的次數。

『伍』 想問一下超濾離心管怎麼使用啊還有它能不能重復使用

可以的,先用超聲波洗干凈,再用高壓滅菌鍋滅菌後,備用即可

『陸』 30kd超濾管最大轉速多少

30kd超濾管最大轉速4000rpm。最大不能超過4000g,離心5-8分鍾,即可將4ml樣品濃縮至1ml以下至幾十微升。一般是用來分離血漿。血漿蛋白的分離將血清加入到30kd分子量的超濾管中,將超濾管嵌套進入嵌套管中,進行高速離心,轉速12000轉每分鍾,離心10分鍾。離心結束後,將嵌套管中的液體收集,得到初步的組織液。

『柒』 【求助】超濾能否脫鹽和濃縮一步完成啊

昨天有個millipore的技術人員就是這樣說的~HarveyWang(站內聯系TA)本人主要是從發酵液中提取酶,文獻上一般的步驟是先用硫酸銨沉澱,然後透析,再用超濾濃縮,最後冷凍乾燥, 這要看你需要做多大的體積了。:) (1)硫酸銨沉澱法:我的觀點是,如果你1000 mL的發酵液的話,硫酸銨沉澱可以用,但是這浪費多少硫酸銨啊?!做學術研究可以,如果你的課題是計劃做提取酶的工藝和中試的話,這種硫酸銨沉澱並不有太大的實用性。 (2)超濾步驟的選用要看你的酶溶液有多大的體積。 如果發酵液的酶的量並不是很濃的話,例如50 mL 10 mg/L的酶量,用這種超濾膜會損失掉大部分你的目地酶,都粘到膜上去了,很難洗下來(稀的NaOH可以)。不能輕信某品牌銷售說的話,用用就知道了。如果你的濃縮液體積比較大,例如100-500 mL,酶的濃度也很高,這是可以用超濾膜的。 (3)對於小體積的脫鹽透析,透析袋很好用的。這里是指10 mL-100 mL。從操作方便性上看,這個在小型試驗中我最喜歡用。好簡單啊。。。。 自己頂一個,解答的詳細的有重獎!(金幣可以再加) (1)發酵液的酶蛋白濃度大約是多少,純度是多少?發個SDS-PAGE看看,註明上樣量。 (2)硫酸銨沉澱後和透析後可上離子交換,這可以濃縮10-1000倍,還可以有純化效果,然後再冷凍濃縮啊。HarveyWang(站內聯系TA)哈哈哈哈,回帖就有金幣拿:Ddaidai0124(站內聯系TA)本人現在只是小規模的提取酶,馬上要上發酵罐,需要大規模的提取酶液,不是做酶學性質,所以酶的純度要求不高,和工業用酶的純度差不多就可以了!希望大家推薦個適合工業化提取酶液的工藝,主要考慮成本問題.請版主幫忙在增加懸賞金幣20個lvgl158(站內聯系TA)起碼知道 它的分子量 才能知道是否可以用同一個膜 如果小於一萬可能就有點難度 可以先用少量的硫酸銨澄清 離心後 進行超濾 在超濾前 必須的保證液體 清澈hezhao999(站內聯系TA)體積的在200ml以上用超濾儀,200ml以下可以用超濾離心管,如果不知分子量選用1000的膜完全可以了,如果知道分子量,則選擇酶分子量1/5的超濾膜。zhaocy8903(站內聯系TA)多大規模的發酵 多大規模的發酵

『捌』 超濾離心管怎麼使用

蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管(MWCO10kD)。也有其它型號的、不同體積大小和MWCO超濾管可選,視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標體積而定。可重復使用。
1、選擇合適的超濾管,主要考慮MWCO和濃縮體積,通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。
2、新買來的超濾是乾燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全過膜,冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂的白線為准。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預冷。
3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾(離心機預冷至4度)。膜與轉軸的方向根據說明書調整(角轉離心機的情況是膜與軸垂直)。在實際使用中,一般轉速開的比說明書里的要低,這樣可以延長離心管的使用壽命。
4、當濃縮到剩下1ml時,【取50ul國產Bradford溶液,加入10ul流穿,看有沒變藍色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管,用5mg/ml的BSA離心10min,再取流穿,跑蛋白膠或Bradford粗測】,繼續加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作,防止蛋白受熱),直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發生蛋白沉澱,導致堵管。若發生沉澱,要確定沉澱的具體原因,是蛋白濃度過高還是Buffer不合適;前者可用多根超濾管同時超濾,降低濃度的辦法解決,後者的方法是換不同的Buffer,直到蛋白不發生沉澱為止。
5、前面幾步用以濃縮蛋白,如果要換Buffer,在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候,輕輕加入新的Buffer(經0.22um超濾膜超濾),再濃縮至1ml左右,連續三次,最後一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定,一般不多於500ul,也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算,三次達到1000倍以上,基本上可以達到換buffer的目的。
6、取出最終蛋白濃縮液的操作在冰上操作,用黃槍頭(200ul)取,輕輕順著邊緣插入槍頭,輕輕吹打、混勻蛋白液,注意不要碰到超濾膜,然後吸取濃縮液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的最後一點濃縮液不必吸取,否則難度太大,有可能損壞超濾膜。最後加入MilliQ水到超濾管中,沒過超濾膜,防止膜失水變干。
7、以下是處理超濾管,重復利用超濾管的步驟。
8、倒出超濾管里的水,用milliQ水輕輕潤洗幾次,【若管底有可見的蛋白沉澱,可以先加入水,然後用槍頭吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉澱懸起,然後倒掉,不可用自來水猛沖】然後加入0.2M的NaOH溶液,室溫放置20min,期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液,將管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個小時,再換新的水,放置幾個小時,不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來水洗,內壁再用MilliQ水洗干凈。
9、取出浸沒的管芯,加至接近滿的MilliQ水,50ml管也加滿MilliQ水,將管芯慢慢放入50ml
離心管,排出部分水,然後蓋上蓋子,放4度保存,直到下次使用。一般來說,按照上述步驟和注意事項,每根管用三四年不會壞。

『玖』 離心機內離心管的放置 離心管內液體的加註

離心機內離心管的放置:對稱放置;對稱放置的好處是能是離心力平衡防止震動,尤其是離心杯切忌要對稱放置否則一開機就不知道裡面會發生什麼情況了,別犯傻,如果離心機強制停車離心機的轉子和杯子的轉動慣性會產生相當大的沖擊力,輕者離心管全部報銷,重者轉子和杯子乃至離心機都報銷

『拾』 用超濾離心法測包封率脂質體需不需要稀釋

超濾離心前應該可以根據需要進行稀釋,也可以不稀釋。
超濾離心後,內如果是取收集的離容心液進行檢測的話,建議取離心液進行定量稀釋,比如到固定體積的量瓶中,以便根據稀釋倍數確定離心液中的葯物濃度從而計算包封率。

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