血清過濾柱再生

A. 液相色譜柱的保養方法

此法適用於成都摩爾科學儀器有限公司GP-C18、HP-C18、BR-C18、Bio-C18和GP-C8或者其他公司品牌的類似色譜柱。

一、新柱活化

由於色譜柱由生產廠家實驗室測試完畢密封好後到達您的手中可能經過了一段時間，因此必須對您剛拿到手的柱子進行活化處理：首先，配好65%乙腈/水或者純甲醇溶劑備用，所有進入HPLC儀器的溶劑必須經過0.2um或者0.45um過濾膜過濾並脫氣；再按柱子的正確方向連接柱子進口端(連接時注意一定要把管路的埠抵緊柱子的進口以免產生死空間發生漩渦效應降低柱效),出口端先不接檢測器。先以0.1~-0.2ml/min的流速沖洗，等看到有液體從柱子中流出後，持續10mins之後再接上檢測器，以循序漸進方式將流速調至1.0ml/min(LC/MS柱子應以0.2ml/min的流速進行),繼續活化2小時。

二、柱子使用

1、 首先要確認您所要分析的樣品流動相的pH范圍是否在您的柱子的pH范圍之內，以免損壞柱子硅膠！

2、 接下來就是用你做樣品的流動相去平衡柱子，如果您的流動相中含有緩沖鹽溶液，在平衡柱子之前務必要先用5％的甲醇(乙腈)/水去過渡10倍柱體積(150x4.6mm柱子約為30ml，250x4.6mm柱子約為45ml；下同)以上，再用帶鹽的流動相去平衡柱子足夠的時間(直到基線非常平穩為止)，之後方可進樣分析。

3、 無論您分析何種樣品，都會由於各種原因樣品中總有部分雜質，因此建議您在進樣前在柱子前端加接保護柱以保護您那昂貴的分析柱，或者用0.2um或 0.45um針頭過濾器過濾樣品後方進樣分析！

三、柱子清洗

分兩種情況進行：

1、如果您的樣品分析只用到一般的甲醇，乙腈和水的流動相(包括流動相裡面加了點酸)，在做完樣品後可直接用65％的乙腈/水或者純甲醇進行清洗10倍柱體積即可保存(如果時間有限，可視情況在儀器能承受的范圍內加快流速******為2ml/min)；

2、如果您的樣品分析用到了含緩沖鹽或者酸或者離子對試劑的流動相，在做完樣品後的清洗必須按照下列2個步驟進行清洗柱子(不論您的柱子是否可以耐純水的極性柱子還是一般的通用性柱子)：

a、***重要的步驟——用5％的乙腈(甲醇)/水，清洗20倍柱體積溶劑以上，1~2ml/min(根據時間自由調節流速：如果因為時間來不及而清洗不了那麼長時間，可以適當加大流速，比如1.5 or 2ml/min；LC/MS柱子應以0.2~0.5ml/min的流速進行)，

b、65~90%的乙腈（甲醇）/水或者純甲醇/乙腈，清洗5~10倍柱體積，1~2ml/min。

四、柱子的再生

色譜柱屬於色譜分析的常用消耗品，它是有壽命的；但它壽命的長短與我們的樣品處理程度、有無加保護柱以及清洗是否恰當和徹底緊密相關！！！當柱子在使用一段時間以後，它的柱壓可能升高，柱效可能降低，這時如果我們對柱子進行再生，它的壽命也許會得到一定的延長。首先把柱子的方向顛倒過來（只限於成都摩爾科學儀器有限公司的色譜柱，其他公司的柱子不保證），

一、然後具體按如下方法進行：

1、5％的乙腈/水清洗20倍柱體積，1ml/min(剛開始以0.1ml/min運行，慢慢上升；下同)；

2，四氫呋喃(THF，色譜級)過柱30mins，1ml/min；

3，65~90％的乙腈（甲醇）/水 或者純甲醇(乙腈)，清洗10倍柱體積，1ml/min。

二、蛋白污染再生：0. 1%的三氟乙酸水溶液:異丙醇（4 : 1,v/v）→乙腈： 異丙醇（1 : 2,v/v, 內含0. 1% 三氟乙酸）→水：異丙醇( 1 : 4, V/V) ，分別沖洗10～20倍柱體積。（注意每項過渡時，壓力的控制，壓力******控制在1500 psi以下，根據柱子的具體情況請自己優化流速）。

B. 免疫血清如何進行保存

免疫血清的鑒定、純化和保存 凝膠過濾法（Gel filtration）：
利用具有分子篩效應的多孔網狀凝膠做為介質，可分離提純分子量不同的大分子物質。在凝膠過濾過程中，分子量大的物質因不能進入凝膠網孔而沿凝膠顆粒間的空隙先流出凝膠柱外，分子量小的物質因能進入凝膠網孔而受阻滯，流速緩慢而最後流出柱外，這樣就能將分子量不同的物質分離。 生物幫上面有這方面的介紹的。 http://proct.bio1000.com/100245/ 抗體產品

C. 提高液相色譜中柱效的有效途徑有哪些

1、可以進行一下操作
（1）、將色譜柱頭尾調換，反沖色譜柱。
（2）、將柱子清洗：甲醇--乙腈--異丙醇--氯仿--環己烷--氯仿--異丙醇--乙腈--甲醇，每種溶劑沖洗30min~40min。
（3）、酸鹼沖洗柱子：（假設之前是中性流動相）含0.5%甲酸的甲醇水9010沖洗40min--甲醇水9010沖洗40min--含0.5%氨水的甲醇水9010沖洗40min，（或先鹼後酸）。
2、平時使用過程中多注意其使用事項也是有助於儀器性能的使用的

色譜柱的保存
（1）反相色譜柱每天實驗後的保養： 使用緩沖液或含鹽的流動相，實驗完成後應用10%的甲醇/水沖洗30分鍾，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鍾。注意：不能用純水沖洗柱子，應該在水中加入10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。
（2）長期保存色譜柱： 如色譜柱要長時間保存，必須存於合適的溶劑下。對於反相柱可以儲存於純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲存於嚴格脫水後的純正己烷中，離子交換柱可以儲存於水（含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞）中，並將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上。儲存的溫度最好是室溫。
色譜柱的再生
因為色譜柱是消耗品，隨著使用時間或進樣次數的增加，會出現拖尾峰(tailing peak)。前者少見。>色譜峰高降低，基線的兩個交點間的距離。W＝4σ>峰寬加大或出現肩峰的現象，一般來說可能是柱效下降。
（1）反相柱的再生：依次採用20-30倍的色譜柱體積的甲醇：水=10：90 （V/V），乙腈，異丙醇作為流動相沖洗色譜柱，完成後再以相反順序沖洗色譜柱。
（2）正相柱的再生：依次以20-30倍色譜柱的體積的正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作為流動相沖洗色譜柱，然後再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必須嚴格脫水。
3、色譜柱在使用過程中易出現的問題和解決辦法 色譜柱在使用中最常見的問題就是柱壓升高，如果柱壓是在長時間使用過程中緩慢增加，屬於正常現象。但柱壓在使用過程中突然升高（系統管路堵塞及壓力感測器故障除外），以下列舉了部分常見原因及解決辦法：
（1）色譜柱頭的過濾篩板堵塞或污染； 解決方法：如確定是色譜柱頭的過濾篩板被污染，可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力，或者卸下色譜柱頭，將其放在10％的稀硝酸內超聲清洗10分鍾，後再用純水超聲。

D. 獻血後,工作人員將血清過濾後，將血漿再重新注入體內,有危險嗎

獻血的時候那個血袋是一個四聯袋，一次能制備三種血液製品。比如採集到400毫升全血，分離出一袋紅細胞懸液，一袋病毒滅活冰凍血漿，一袋冷沉澱凝血因子。所需要的步驟很簡單，不需要也不可能暴露於空氣中。

E. 細胞培養基加了血清後還可以過濾么

1、血清要做滅活處理；
2、滅活後的血清要經過.45和.22慮膜過濾；
3、培養基是不可以紫回外照射的。
還要答注意一點的是血清一般不推薦直接過濾除菌的，如果懷疑血清染菌，過濾時要把血清按比例加入到培養液中，然後才可以過濾除菌！！

F. 過濾柱模擬了什麼

模擬尿液形成過程中的腎小球過濾過程。沒有模擬重吸收功能。為了不讓有用物質過濾出去，透析液中的有利物質的濃度和血液要基因相同。

G. 細胞培養時，為什麼勿直接過濾血清

買來的就已經過濾過除菌了，如果污染了直接扔掉吧，血清過濾起來很費勁的

H. 請問細胞培養中胎牛血清過濾的詳細步驟,

胎牛血清買回來先化開，然後56度半小時滅活，在正常過濾就行。如果你用一次性濾器，內那就先准備容20或50ml的注射器，用注射器抽取，拔掉針頭，再把一次性濾器插入注射器出口，把濾出的血清放滅過菌的容器就行，我一般放50ml離心管中，用時也方便，否則血清反復凍融不好，也容易染菌。

I. 液相色譜柱再生

色譜柱使用久了，會出現分離度降低，理論塔板數降低等柱效降低的現象，適當處理能使柱效恢復。但不是所有柱子 都能倒沖的，最好問問生產商。不了解的話，還是按下面的方法處理一下試試。
常規處理:硅膠、氧化鋁、極性鍵合相色譜柱每一次用完後用低流速長時間的二氯甲烷或正己烷等溶劑沖洗;鍵合相硅膠色譜柱、離子交換色譜柱和凝膠色譜柱先用蒸餾水沖洗,再用甲醇沖洗,然後用甲醇與蒸餾水以一定比例混合的溶液沖洗後過夜。
對於已使用一段時間後柱效下降的色譜柱可按以下方法進行再生。再生處理包括活化(右→左)和凈化(左→右)兩種。硅膠、氧化鋁、極性鍵合相色譜柱按下列順序沖洗:三甲基戊烷或己烷←→三氯乙烷←→乙酸乙脂←→丙酮←→乙醇←→水。鍵合相硅膠柱:蒸餾水←→甲醇(沖洗過程中可加入少量二甲基甲醯胺)。離子交換樹脂柱:高濃度的NaCl溶液(1-2molL的NaCl溶液)可使大部分樹脂再生,油脂等少數與樹脂緊密結合的物質可用低濃度鹼溶液(如0.1molL的NaOH溶液)沖洗,酸性有機物吸附在固定相的用低pH緩沖液沖洗,鹼性有機物用高pH緩沖液沖洗,然後再用蒸餾水←→甲醇←→二氯甲烷←→甲醇←→蒸餾水沖洗。凝膠色譜柱:由於凝膠色譜柱是根據被分離物質的分子量大小而分離物質,通常用稀的氫氧化鈉或非離子型去垢劑(0.2%-1%NP-40或Lubrol)沖洗可除去大部分的結合物質,如果一些污染物仍然不能清除時,用24%或30%乙腈沖洗過夜可除去疏水蛋白,用30%-50%乙酸可除去親水蛋白,用蛋白水解酶處理可分解凝膠中剩餘的痕量胃蛋白酶,然後再用蒸餾水←→甲醇←→蒸餾水沖洗。
已污染的色譜柱的處理:因保留強的物質污染,流動相或樣品中不溶物沉積於柱頭,可用下列方法洗滌:去除脂類可用四氫呋喃、乙腈或甲醇洗滌;去除蛋白質可用乙腈、丙醇和1%三氯乙酸進行梯度洗脫;一些高疏水性化合物可用乙腈或甲醇洗脫,同時反復注入100-200ml的四氫呋喃。
柱頭處理:對於柱頭堵塞污染嚴重的情況而且用溶劑沖洗無效的色譜柱,只有打開柱子去除柱頂的填料重裝:先拆下不銹鋼燒結過濾器,檢查柱床,常見凹陷或受污染的帶色填料,剔去不規則床層和帶色填料,使柱床顯白色並完全水平,再用甲醇作糊狀填料勻漿液,將糊狀填料勻漿液滴在柱上靠重力從勻漿液中排出甲醇液,重復直到填料水平。

柱子的貯存:首先柱子必須清洗干凈後才能貯存,柱子不能貯存在水或水性溶劑中,否則會引起微生物的滋生。極性色譜柱可用適當溶劑如二氯甲烷沖洗;鍵合相色譜柱用甲醇沖洗;陰離子交換色譜柱用0.002%洗必泰(雙氯苯雙胍己烷)的緩沖液沖洗,陽離子交換色譜柱用0.005%硫柳汞緩沖液沖洗;凝膠色譜柱用緩沖液中加0.02%疊氮化鈉或用20%乙醇沖洗。再將柱子兩頭密封,以防止溶劑蒸發使柱子乾燥而引起柱子結構的幾何學改變。