A. 蛋白質、核酸等生物大分子為何能用離子交換色譜分離
因為他們來都帶電荷啊,因為源你柱子上有相反的離子啊,他們可以通過離子鍵相互作用啊!
同時的柱子有孔徑啊,可以將小的直接溜走,沒有機會結合啊
可以讓大的下來的更慢啊!
你滿意不!
B. 陰離子交換分離-氨性底液極譜法
方法提要
試樣經灼燒、酸溶分解,在2mol/LHCl介質中,鋅以配陰離子形式吸附於陰離子交換樹脂上,與鎳、鈷、錳、釩、砷等分離。鉛、鐵部分被吸附,鎘同時被吸附。經1mol/LHCl淋洗交換柱,可分離絕大部分銅、鐵,再用熱水淋洗交換柱,鋅先被淋洗,而鎘仍吸附在樹脂上而不影響鋅的測定。在此條件下,用717型陰離子交換樹脂分離富集鋅,當溶液中存在100mgCu2+、Fe2+,5mgW6+、Mo6+、Sb5+、Bi3+,10mgSn2+,400μgIn3+,200μgCd2+、Tl3+,50μgSe4+、Au時,均可與鋅分離。然後在氫氧化銨-氯化銨-亞硫酸鈉底液中,用示波極譜儀導數部分進行鋅的測定,峰電位約-1.20V(對銀片電極)。如試樣中鉛量大於10mg,可在溶解試樣時,加入2mL(1+1)H2SO4使鉛呈硫酸鉛沉澱而與鋅分離。本法適用於0.001%以上鋅的測定。
儀器
示波極譜儀。
銀片作參比電極。
試劑
鹽酸。
硝酸。
氫氟酸。
高氯酸。
氫氧化銨-氯化銨-亞硫酸鈉混合底液稱取12.5gNa2SO3和67gNH4Cl,用少量水溶解,加入250mLNH4OH,用水稀釋至500mL,混勻。
717型陰離子交換樹脂將80~100目717型陰離子交換樹脂用20g/LNaOH溶液和(1+9)HNO3浸泡,處理雜質,然後用水洗至中性,按分析步驟裝柱,進行空白試驗檢查後方可使用。
陰離子交換柱將717型陰離子交換樹脂裝入筒形漏斗,下接Φ8mm×100mm的交換柱,樹脂床高約9cm,先用200mL水淋洗交換柱,漏鬥上疊放濾紙後,再用2mol/LHCl平衡,備用(控制流速約1.5mL/min)。
鋅標准儲備溶液ρ(Zn)=1.00mg/mL配製方法見本章42.2.1鋅的EDTA容量法測定。
鋅標准溶液ρ(Zn)=100.0μg/mL由鋅標准儲備溶液稀釋配製。
鋅標准溶液ρ(Zn)=10.0μg/mL由鋅標准儲備溶液稀釋配製。
校準曲線
分取0.00mL、0.25mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL、8.00mL、10.00mL鋅標准溶液(100.0μg/mL),或0.00mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL鋅標准溶液(10.0μg/mL),分別置於25mL燒杯中,低溫蒸至近干。加入5滴(1+1)HCl,蓋上表面皿,微熱,加入10.0mL氫氧化銨-氯化銨-亞硫酸鈉混合底液和15.0mL水,搖勻,放置30min。傾出部分溶液於電解池中,選擇適當電流倍率,用示波極譜儀導數部分測定,於起始電位-1.00V處記錄峰電流值,繪制校準曲線。
分析步驟
稱取0.1~0.5g(精確至0.0001g)試樣置於瓷坩堝中,在550℃高溫爐中灼燒1h。將試樣轉入100mL聚四氟乙烯燒杯中,用水潤濕,加入10mLHCl,蓋上表面皿,置於低溫電熱板上溶解20min。用少量水洗去表面皿,加入5mLHNO3和3mLHF,再加入1mLHClO4[如試樣中鉛含量大於10mg,改為加入2mL(1+1)H2SO4,繼續加熱溶解],加熱蒸發至白煙冒盡,取下,冷卻。
加入15mL2mol/LHCl,蓋上表面皿微熱溶解鹽類,溶液冷卻後傾入交換柱上進行過濾、交換。用1mol/LHCl洗滌燒杯和濾紙至無黃色,棄去濾紙後,繼續用1mol/LHCl洗交換柱(洗盡銅、鐵等干擾元素,洗液約需30~50mL)。然後用50mL熱水淋洗鋅(水加熱至沸,稍待片刻,分次倒入漏斗),流出液用50mL燒杯承接,溶液在電熱板上蒸發至小體積,用水吹洗燒杯壁,繼續蒸發至近干。然後按校準曲線分析步驟操作,測得鋅量。
鋅含量的計算公式同式(42.2),校準曲線上查得鋅量(單位為μg),公式中10-3改為10-6。
C. 用於蛋白質提取分離的離子交換劑有哪些特殊的要求,主要有哪幾類
離子交換層析根抄據帶電強弱分為:強陽離子交換層析、強陰離子交換層析、弱陽離子交換層析、弱陰離子交換層析。填料的孔徑也有分別,詳細可以咨詢各品牌代理商。
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D. 怎樣判斷蛋白用陰離子柱還是陽離子柱
離子色譜柱由於孔徑和填料的關系,不能用來分離蛋白質
您的問題可能在液相色譜論壇中詢問更好一點,用的應該是帶氨基基團的陰離子交換柱(不是陰離子色譜柱哦)
E. 色譜柱的填料
常見的分配柱填料:碳十八柱 (ODS/C18)、碳八柱(MOS/C8)、碳六柱(Hexyl/C6)、
碳四柱(Butyl/C4)、碳一柱(Methyl/C1)、陰離子交換柱(SAX)、
陽離子交換柱(SCX)、苯基柱(Phenyl)、氨基柱(Amino/NH2)、
氰基柱(Cyano/CN/Nitrile)
常見的吸附柱填料:硅膠柱
F. 陰離子交換柱用什麼沖洗和保養方法
氫氧化鈉浸泡,水洗至微鹼性,鹽酸浸泡,水洗至中性,即可。
G. 設計一個利用陰離子交換柱純化一個等電點為7.5的蛋白質的實驗
既然是抄陰離子交換,就要讓目標蛋白帶負電,那麼緩沖液PH就要大於等電點。緩沖體系的選擇也很重要,一般用TRIS-HCl,特別是弱陰離子柱不可選用帶負電強的磷酸鹽緩沖液,否則上樣液中被交換的將是磷酸根而不是目標蛋白。一般用NaCl平衡後上樣進行離子交換,然後再用較強的陰離子洗脫。
H. 陰離子交換柱是什麼
陰離子交換器 又叫復陰床制,作用是用陰樹脂中的氫氧根交換掉水中的其他陰離子。離子交換器分為:鈉離子交換器、陰陽床、混合床等種類,。離子交換柱(器)外殼一般採用硬聚氯乙烯(PVC)、硬聚氯乙烯復合玻璃鋼(PVC-FRP)、有機玻璃(PMMA)、有機玻璃復合透明玻璃鋼(PMMA-FRP)、鋼襯膠(JR)、不銹鋼襯膠等材質。主要用於鍋爐、熱電站、化工、輕工、紡織、醫葯、生物、電子、原子能及純水處理的前道處理,工業生產所需進行硬水軟化、去離子水制備的場合,還可用於食品葯物的脫色提純,貴重金屬、化工原料的回收,電鍍廢水的處理等。
有機玻璃離子交換裝置耐腐蝕、無色透明、適用於食品、醫葯、製糖及電子工業小規模純水制備。碳鋼襯膠離子交換裝置具有制水量大、強度高、成本低等特點,適用於大型鍋爐軟化水及大規模純水制備。
I. 陰離子交換柱 流動相是酸性還是鹼性
理論上說:陽離子交換設備出水開始時呈酸性,陰離子交換設備開始時呈鹼性,剛兩者組起來接近如中性…。
J. 陰離子交換柱能去除水中的什麼
作用是用陰樹脂中的氫氧根交換掉水中的其他陰離子。混合物通過陰離子交換柱,陰離子可以被吸附從而與其他物質分開,一般來說,陰離子交換柱的吸附劑應該呈陽性。