葡聚糖凝膠過濾實際應用

㈠ 利用葡聚糖凝膠分離蛋白

一般是磷酸鹽，如：K2HPO4-KH2PO4，要注意的有兩點：
一是pH值，不要選在等電點；二是鹽濃度，不能超過柱子的允許范圍（手冊上有）。
另外，這種柱子很嬌氣，也很貴，使用時一定要小心。

㈡ β-葡聚糖的用途

用途：

1、各種食品，如：肉製品、乳製品、餅干、飲料、果汁中原料；

2、保健食品及葯品原料，用以增強免疫力、清除毒素、抗輻射、修復細胞、調節血脂；

3、各種化妝品原料，如：洗發水、沐浴露、面膜、護手霜、洗手液、洗面奶等；

4、作為飼料添加劑，能幫助畜牧，反芻，水產，家禽等動物提高免疫力，降低重金屬作用。

β-葡聚糖存在於某些微生物在生長過程中分泌的粘液中，現代研究發現，姬松茸中含有的B葡聚多糖最為豐富且具有較高的生物活性。

酵母葡聚糖是存在於酵母細胞壁中的一種具有增強免疫力活性的多糖——β-葡聚糖。β-葡聚糖廣泛存在於各種真菌和植物。

(2)葡聚糖凝膠過濾實際應用擴展閱讀：

對醋酸、蟻酸以及磷酸是否適合於酸水解法提取酵母葡聚糖進行研究，結果表明酸解後提取酵母葡聚糖的主要結構和支鏈結構基本上並沒有改變。採用醋酸對釀酒酵母中β—葡聚糖進行提取，研究發現酸法提取葡聚糖的最佳工藝條件是：提取劑HAc濃度為6%，提取溫度為90℃，提取時間6h ， 固液比為1：6。

在最佳提取工藝下，酵母葡聚糖得率為21.58%，蛋白質含量為7.21%，多糖含量為71.46%，紙層析實驗表明，水解產物中同時含有甘露糖和葡萄糖。

將酵母分散到NaOH溶液中攪拌，然後加入水，離心收集沉澱。沉澱再分散到NaOH溶液中，離心收集沉澱。沉澱用水洗3遍，用HCl浸提後，離心收集沉澱，乾燥後得到酵母β-(1，3)-D葡聚糖產品。

明酸鹼結合法提取的產品純度較高，蛋白質含量少，收率也較高，但是這種方法過程復雜，操作繁瑣，耗時較長，且使用多種有機溶劑進行脫水，廢液較多，污染環境。

㈢ 交聯葡聚糖凝膠的使用方法

1. 乙醇浸泡：
在室溫下，將乾粉浸泡於50-60%乙醇中至少24小時，並不斷攪拌以保證凝膠溶脹，用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干;
2.無鹽水浸泡：
室溫下，在無鹽水中充分溶脹24小時，間隙攪拌，以保證凝膠的完全溶脹，然後；
3. 鹽酸浸泡：
在常溫下再用0.2N HCl浸泡12小時，間隙攪拌，濾干，水洗至中性；
4. 將溶脹好的凝膠脫氣後（真空抽濾或超聲波）根據裝柱要求一次性置入柱內，注意保持濕態裝柱，並避免柱內產生氣泡或斷層；
5. 上樣前平衡層析柱至少3-5 個柱體積直到記錄儀基線變得平穩為止（流出液的PH值等於上柱的Buffer 的PH值）；
6. 凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積，我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積，視分離情況可以調整；脫鹽時上樣量可以達到20% 的柱床體積，柱高的選擇也與分離要求相關，柱高控制在40-50cm 以下，過高的凝膠層會引起較大的反壓，應當盡可能避免。難分離物質要有一定柱高和流速控制，脫鹽時高徑比為5：1 即可；
7. 洗脫方法：
可以用無鹽水，也可以採用上柱時的緩沖液洗脫；在上柱Buffer 中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以完全分離純化；
8. 在位清洗（CIP）
凝膠使用十次後作一次CIP，目的是去除柱床內沉澱的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h 用1M 氫氧化鈉反向洗四個柱體積，再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。

㈣ 凝膠過濾層析的原理是什麼

基本原理：凝膠過濾層析也稱分子篩層析、排阻層析。是利用具有網狀結構的凝膠的分子篩作用，根據被分離物質的分子大小不同來進行分離。

層析柱中的填料是某些惰性的多孔網狀結構物質，多是交聯的聚糖（如葡聚糖或瓊脂糖）類物質，小分子物質能進入其內部，流下時路程較長，而大分子物質卻被排除在外部，下來的路程短，當一混合溶液通過凝膠過濾層析柱時，溶液中的物質就按不同分子量篩分開了。

凝膠層析的特點：

1）凝膠層析操作簡便，所需設備簡單。有時只要有一根層析柱便可進行工作。分離介質——凝膠完全不需要像離子交換劑那樣復雜的再生過程便可重復使用。

2）分離效果較好，重復性高。最突出的是樣品回收率高，接近100%。

3）分離條件緩和。凝膠骨架親水，分離過程又不涉及化學鍵的變化，所以對分離物的活性沒有不良影響。

4）應用廣泛。適用於各種生化物質，如肽類、激素、蛋白質、多糖、核酸的分離純化、脫鹽、濃縮以及分析測定等。分離的分子量范圍也很寬，如Sephadex G類為102-105 D；Sepharose類為105-108 D。

以上內容參考：網路-凝膠過濾層析

㈤ 如何寫關於葡聚糖凝膠層析的分子篩特性的實驗報告拜託各位大神

【實驗目的】 1.掌握葡聚糖凝膠的特性及凝膠層析的原理。 2．學習葡聚糖凝膠層析的基本操作技術。 【實驗原理】 凝膠層析又稱分子排阻層析或凝膠過濾，是以被分離物質的分子量差異為基礎的一種層析分離技術，這一技術為純化蛋白質等生物大分子提供了一種非常溫和的分離方法。層析的固定相載體是凝膠顆粒，目前應用較廣的是：具有各種孔徑范圍的葡聚糖凝膠（Sephadex）和瓊脂糖凝膠（Sepharose）。 葡聚糖凝膠是由直鏈的葡聚糖分子和交聯劑3—氯1，2—環氧丙烷交聯而成的具有多孔網狀結構的高分子化合物。凝膠顆粒中網孔的大小可通過調節葡聚糖和交聯劑的比例來控制，交聯度越大，網孔結構越緊密；交聯度越小，網孔結構就越疏鬆，網孔的大小決定了被分離物質能夠自由出入凝膠內部的分子量范圍。可分離的分子量范圍從幾百到幾十萬不等。 葡聚糖凝膠層析，是使待分離物質通過葡聚糖凝膠層析柱，各個組分由於分子量不相同，在凝膠柱上受到的阻滯作用不同，而在層析柱中以不同的速度移動。分子量大於允許進入凝膠網孔范圍的物質完全被凝膠排阻，不能進入凝膠顆粒內部，阻滯作用小，隨著溶劑在凝膠顆粒之間流動，因此流程短，而先流出層析柱；分子量小的物質可完全進入凝膠顆粒的網孔內，阻滯作用大，流程延長，而最後從層析柱中流出。若被分離物的分子量介於完全排阻和完全進入網孔物質的分子量之間，則在兩者之間從柱中流出，由此就可以達到分離目的。 本實驗以葡聚糖凝膠G—25作為固定相載體，來分離藍色葡聚糖—2000和溴酚藍。藍色葡聚糖—2000分子量接近2×106， 而溴酚藍分子量為670，二者分子量相差較大，前者完全排阻，而後者則可完全進入凝膠顆粒網孔內，二者通過層析柱的時間不同而分開。 【實驗材料】 1.實驗器材 層析柱(1×20cm)附有一小段乳膠管及螺旋夾；洗脫液瓶(帶下口的三角瓶，250m1)；試管及試管架；量筒10m1；721型分光光度計 2.實驗試劑 (1) Tris—醋酸緩沖液(pH7.0):取0.0lmol/L Tris溶液(含0.1mol/L KCl)900ml，用濃醋酸調pH至7.0，加蒸餾水至1000m1。 (2) 溴酚藍溶液：稱取溴酚藍10毫克，溶於5毫升乙醇中，充分攪拌使其溶解，然後逐滴加入Tris—醋酸緩沖液(pH7.0)至溶液呈深藍色。 (3) 藍色葡聚糖—2000溶液：稱取藍色葡聚糖—2000 10毫克，溶於2毫升Tris—醋酸緩沖液(pH7.0)中即成。 (4) 樣品溶液：取溴酚藍溶液0.1毫升，藍色葡聚糖—2000溶液0.5毫升混勻後為上柱樣品溶液。 (5)葡聚糖凝膠G-25 (Sephadex-G-25) 【實驗操作】 1.實驗凝膠的制備：商品凝膠是乾燥的顆粒，使用時需經溶脹處理，稱取4克葡聚糖凝膠G—25，加50毫升蒸餾水，攪拌均勻，在室溫溶脹6小時，或沸水浴溶脹 2小時，一般採用後一種方法。再用傾瀉法除去凝膠上層水及細小顆粒，用蒸餾水反復洗滌幾次，再以緩沖溶液(pH7.0的Tris—醋酸溶液)洗滌2—3次，使pH和離子強度達到平衡，最後抽去溶液及凝膠顆粒內部氣泡，凝膠可保存在緩沖液內。 2.裝柱：將層析柱洗凈，垂直固定在鐵支架上，選擇有薄膜端作為層析柱下口，將下口接上乳膠管並用螺旋夾夾緊。層析柱中加入洗脫液，打開下口螺旋夾，讓溶液流出，排除殘留氣泡，最後保留約2厘米高度的洗脫液，擰緊螺旋夾。將凝膠輕輕攪動均勻，用玻璃棒沿層析柱內壁緩緩注入柱中，待凝膠沉積到柱床下已超過l厘米時，打開下口螺旋夾，繼續裝柱至柱床高度達到8厘米,關閉出口。裝柱過程中嚴禁產生氣泡，盡可能一次裝完，避免出現分層。再用洗脫液平衡l至2個柱床體積，凝膠面上始終保持有一定的洗脫液。平衡後，擰緊下端螺旋夾。

㈥ 甲叉雙丙烯醯和葡聚糖凝膠以及丙烯葡聚糖凝膠各有什麼作用和用途

甲叉雙丙烯醯胺：是一種交聯劑，可以將丙烯醯胺單體連接起來，形成聚丙烯醯胺凝膠。聚丙烯醯胺凝膠，主要用於分離蛋白質。
葡聚糖凝膠：用於不同大小蛋白質或多肽的分離。
丙烯葡聚糖凝膠：用於分離球蛋白。

㈦ 怎樣用葡聚糖凝膠測定多糖分子量,有原理和過程.

多糖的分子量測定常用的是凝膠濾過法.將充分膨脹好的SephadexG-200、G-150或G-75濕法裝柱,用一定離子強度的氯化鈉水溶液進行平衡,然後將各種不同的已知分子量的多糖分別相繼上柱,同一離子強度的氯化鈉水溶液洗脫,分步收集,苯酚-硫酸法監測,分別求得洗脫體積Ve,然後再將蘭葡聚糖（MV>200萬）上同一條柱,求出柱的空體積Vo,根據Ve/Vo與logM之間存在著線性關系,可繪制標准曲線.最後,將待測樣品按上述不變的條件上柱,求得待測多糖的Ve.通過標准曲線上的Ve/Vo,查得待測多糖的分子量對數,便可求出M.
對於黏度大的多糖,可採用黏度法求得.亦有用蒸汽壓滲透法（VPO,基本原理是根據理想溶液的拉烏爾定律,參考文獻：崔錫紅,等.蒸汽壓滲透法分析異丁烯的數均分子量.河南化工.2001,1:32.駱傳環.蒸氣壓滲透計測定多糖分子量.現代科學儀器,1994,4:11.）、超速離心法（駱傳環,等.香姑多糖的分子量測定.科學技術與工程.2006,6(8):1058~1060）、光散射法（LS,光散射法測定高分子量基於高分子溶液的瑞利散射,垂直偏振光通過溶液產生的不同角度散射光的強度與溶質分子的大小即分子量成正比.參考文獻：魏立平,姜雄平.光散射法在醫學分子生物學中的應用.國外醫學分子生物學分冊.2000,22(2):123.）、玻璃纖維紙電泳、聚丙烯醯胺凝膠電泳（原理：SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳,是在聚丙烯醯胺凝膠系統中引進SDS（十二烷基硫酸鈉）,SDS能斷裂分子內和分子間氫鍵,破壞蛋白質的二級和三級結構,強還原劑能使半胱氨酸之間的二硫鍵斷裂,蛋白質在一定濃度的含有強還原劑的SDS溶液中,與SDS分子按比例結合,形成帶負電荷的SDS-蛋白質復合物,這種復合物由於結合大量的SDS,使蛋白質喪失了原有的電荷狀態形成僅保持原有分子大小為特徵的負離子團塊,從而降低或消除了各種蛋白質分子之間天然的電荷差異,由於SDS與蛋白質的結合是按重量成比例的,因此在進行電泳時,蛋白質分子的遷移速度取決於分子大小.當分子量在15KD到200KD之間時,蛋白質的遷移率和分子量的對數呈線性關系,符合下式：logMW=K-bX,式中：MW為分子量,X為遷移率,k、b均為常數,若將已知分子量的標准蛋白質的遷移率對分子量對數作圖,可獲得一條標准曲線,未知蛋白質在相同條件下進行電泳,根據它的電泳遷移率即可在標准曲線上求得分子量.應用如,將標准相對分子量蛋白質與樣品進行SDS-PAGE凝膠電泳,以標准蛋白質的遷移率為縱坐標,lgM為橫坐標,繪制相對分子質量曲線.根據樣品遷移率得出相對分子質量.）測分子量,黏度法及超濾法估計分子量.利用不同方法測定多糖分子量可以從不同角度對多糖分子量進行確證,同時也是對多糖純度的考察.在測定過程中要注意標准品的選擇,盡量使用與被測多糖結構相似的標准品,因為不同結構的標准品雖然其絕對分子量相同而在一定條件下所表現的分子量會有所不同.
多糖分子量的測定沒有一種絕對的方法,其分子量只代表相似鏈長的平均配比而不是確切的分子大小.往往用不同的方法會得到不同的分子量.摘自：季宇彬 《中葯多糖的化學與葯理》人民衛生出版社

㈧ 瓊脂糖凝膠和葡聚糖凝膠的用途各是什麼，有哪些相同點和不同點，有哪些型號

一般測定多糖分子量是總分子量用葡聚糖凝膠柱層析

瓊脂糖凝膠大多用來進行電泳 檢測或回收DNA

㈨ 葡聚糖的應用

1､在食品工業中的應用
β- 1，3-葡聚糖具有很高的粘性、持水性、乳化穩定性等性能，在食品工業中常作為增稠劑、持水劑、粘結劑及乳化穩定劑應用於調味料、甜點等食品。由於β-1，3-葡聚糖在人的消化器官中難以被消化，可以作為非卡路里食品添加劑，提供脂肪樣口感，研究表明，用β- 1，3-葡聚糖在肉製品中替代脂肪，它既可提供低脂肉製品滑潤、豐厚的口感，又能改善低脂肉製品的脆度、硬度、膠粘性、咀嚼性等質構以及總的可接受性；將β- 1，3-葡聚糖作為脂肪取代劑及乳
化穩定劑應用於蛋黃醬中，不但有效地保持蛋黃醬的乳化穩定性，而且還延長產品的貯存期。另外，β- 1，3-葡聚糖是無熱能的，且能強化纖維素阻止脂類吸收的效力，促進膽固醇排除，增加腸道蠕動，在食品中既可以作為膳食纖維來發揮作用，又是一種優質保健食品添加劑。
2.在化妝品中的應用
由於β- 1，3-葡聚糖特有的生物學功能和理化特性如抗凝血、抗氧化、促進細胞增生、抑菌和吸水性能，可產生保濕、延緩衰老、促進上皮纖維成細胞增殖和美化膚色等多種功能。研究表明，羧甲基化β- 1，3-葡聚糖可降低皮膚暴露於UVA 區域時對輻射的敏感性，起防止皮脂中角鯊烯氧化的作用，且因其具有成膜性，還可發揮它的第二皮膚作用，有助於提供給皮膚細胞許多生化活性。羧甲基化β- 1，3-葡聚糖能增加皮膚的保濕性並能減弱表面活性劑對皮膚的損傷，並能提高角質層的更新速度和改善皮膚的緊密度。

㈩ 分子篩層析的葡聚糖凝膠的種類與性能

葡聚糖又名右旋糖酐，在它們的長鏈間以三氯環氧丙烷交聯劑交聯而成。葡聚糖凝膠具有很強的吸水性，交聯度大，吸水性小，相反交聯度小，吸水性大。商品名以SephadexG表示，G值越小，交聯度越大，吸水性越小，G值越大，交聯度越小，吸水性就越大，二者呈反比關系，G值大約為吸水量的10倍。由此可以根據床體積而估算出葡聚糖凝膠乾粉的用量。
表1－8 Sephadex1的種類與特性
G25、G50有四種顆粒型號：粗（100µ~300µ）、中（50µ~150µ）、細（20µ~80µ）和超細（10µ~40µ）。G75～G200又有兩種顆粒型號：中（40µ～120µ），超細（10µ～40µ）。顆粒越細，流速越慢，分離效果越好。
表1－9 DEAE－纖維素與Sephadex1比較