流動相濾頭溶劑過濾器

『壹』 液相色譜儀是如何進行保養和維護的

轉載：《分析測試網路網》
液相色譜儀的維護與保養

液相色譜儀的維護與保養

液相色譜儀是屬於易學難用的儀器，特別講究「正確使用」和經驗。

液相工作者接觸最多的是流動相，也就是流動相，是造成液相色譜各種問題的最主要源頭。

液相色譜儀最常見的故障一是堵，二是漏。下面就這兩點分別展開討論。(註：流動相以甲醇為例，色譜柱以C18為例)

「堵」的表現現象就是柱壓異常升高，直接原因就是流路不暢。堵塞的主要位置就是在色譜柱的前端，最主要原因就是流動相里有雜質，雜質的主要來源就是細菌。

「堵」的原因之一：配製流動相時細菌污染。

首先我們要認識到，一般的國產甲醇其實不需要額外過濾處理，直接使用沒有問題。即使是有些固態微粒雜質，也能在液相流路系統最前端的過濾頭上排除，真正容易引起問題的，是水中的細菌。

新制備的純水在室內放置幾天就會長菌，而這些細菌雖然肉眼不可見，卻足以堵塞柱填料顆粒的空隙，造成柱子很快報廢。這就是在配製流動相時造成的細菌污染的原因，解決它的方法很簡單，就是確保水的可靠性。這里有兩種方式推薦：

(1)最理想的方式當然是購買實驗室專用純水機，既方便又可靠，質量也放心。唯一的缺點就是價格不菲。

(2) 成箱購買市售品牌純凈水，如500ml 一支的怡寶或娃哈哈，這些水的質量足以應付液相色譜的要求。先隨機抽取一支做一下細菌平板實驗，待菌落數合格方可使用。這樣每次只要單獨開一支即可，也很方便。每次成本2 元左右。

這里特別指出一個細節：在絕大多數書本上，凡談到配製流動相都會談到最後有一個過濾的步驟。但是從我們長期使用的實際效果來說，只要能保證水的質量，這一步完全可以也應當去除。原因有以下三點：

(1)流動相過濾在理論上有好處，但是實際操作時由於不可能做到專瓶專用，反而容易造成的交叉污染，對於配比復雜的流動相影響更大。

(2)流動相過濾在經濟成本上不劃算。買一套過濾裝置要6000多元，且過濾器公認是比較容易損壞的設備。最主要是過濾片的成本太高，一片就要幾十元。按一般液相柱的正常使用壽命計算，過濾片的成本會遠遠高於色譜柱的成本。

(3)流動相過濾對於工作效率成本不劃算。使用溶劑過濾器有一個預清洗、裝備、使用、用後清洗，晾乾的過程，至少也有一個小時的時間。這個成本也不能忽視。

(4)在實際工作未發現流動相不過濾會對柱壽命有任何影響。我們起碼有6 年時間沒有做過流動相過濾的工作，但是和國內同行相比較，在同等使用強度下我們的柱壽命是比較長的。

「堵」的原因之二：使用流動相時的細菌污染。

指的是：流動相剛開始沒有長菌，在使用時卻產生了細菌污染。這主要是在使用多元液相色譜儀時的一種不良使用習慣造成的。

舉最簡單的例子：50%的甲醇水流動相，有兩種使用方式。一種方式是在上機前就配好混合在一起，另一種方式是在流路A放純甲醇，流路B放純水。

從單純實驗效果來說，後一種有明顯的優點：首先是簡單，不需要實驗者另個計算配比混合，其次就是比例准確，能得到保留時間重復性極好的實驗效果。

但是，它有一個致命的缺陷，就是純水在流動相瓶中幾天時間就會長細菌(很多情況下不僅僅用純水作流動相，而是用緩沖鹽溶液，本身就是優質肥料，細菌長得更迅速)，一旦有細菌柱子就壞得很快。所以這種方式要求操作人員每次實驗都要用新制備的純水，更要求在每次實驗後把水相換掉，換成甲醇沖洗干凈，這一點在實際工作中很多人意識不強，就是意識到了但多次使用中總有一兩次會遺漏，但是往往這一兩次就足以產生致命的影響。因為液相色譜柱的堵塞是不可逆的。

所以，寧可犧牲小小的保留時間的重復性，也不要用純水溶液作為流動相的一組。從實際實驗效果來說，我建議用10%的甲醇水代替純水溶液(以前我做過不同比例甲醇水的細菌總數實驗，在5%就基本可以抑菌，在10%及以上就可以完全殺菌了)，這樣可以有效排除長細菌的隱患，既可作流動相，也可沖柱。就算是在配製流動相時會計算得麻煩一些，但是一次麻煩，終身受益。

"堵」的原因之三：不適當操作。

常見問題的有以下幾種：

(1)在更換零件時選擇的型號有誤，介面不是很匹配，在擰緊的時候產生變形而使得管路堵塞。

(2)樣品處理液凈化得不幹凈，長期會在六通閥和柱之間形成阻塞不暢。

(3)在使用手動六通閥時，有些人可能由於手勁小的原因，轉動的不到位，於是造成流路形成了死堵，壓力快速升高超過警戒值。

(4)在使用金屬管路作出廢液管時，應當注意最好廢液瓶中先放一些水，並把廢液管的出口端放在液面下。如果位於在液相上且實驗使用較高濃度的緩沖鹽溶液，在停機時可能在出口端結晶成塊並造成堵塞。這種情況不常見，但卻的確發生過。

「堵」的原因講了不少，現介紹查堵的方法。

在發生「堵」的現象後，就需要找出原因，主要是什麼位置發生了「堵」。注意，絕大多數情況下，整個系統只會有一個地方發生堵塞。

查堵的方法是從尾向前逆向分段拆開，仔細觀察壓力數值，如果某一個部件(柱子除外)裝上和拆下時的壓力差別很大，可發展變化判斷。至於柱的堵塞，可以通過換同樣規格的柱的壓力是否一致來判斷。

下面再談一下「漏」的問題。「漏」則分兩種：漏液和漏氣。

一. 漏液

液相色譜儀從流動相瓶到廢液瓶之間的流路是一個全封閉體系，內部壓力很高，但外部卻能保證一滴不漏。如果某個部件發生了漏液，那就是故障所在。

漏液的原因分兩種：

(1) 接觸硬體不當。

在更換零件如流路管或換柱時，換的接頭介面不匹配，造成漏液。要注意不同公司的柱子接頭很多是不同的，甚至同一家公司在不同時期生產的液相柱接頭也有很大區別。當然選用PEEK接頭是一個較好的解決方法，不僅通用性好，而且靠手擰就能保證不漏液。

即使是介面本身是匹配的，但是如果操作不當也會漏液，一種不當就是力度把握不好，擰得太緊或太松;另一種不當就是致命的錯誤：滑絲，這是往往是動手能力不太強，螺絲釘很少擰的工作者犯的錯誤，滑絲的後果不僅是漏液那麼簡單，常造成重要部件的報廢。解決這個問題只能靠惡補基本功來實驗，那就是擰螺絲。

(2) 使用儀器不當

如果是輸送泵漏液，最常見的原因就是在活塞位置緩沖鹽析出造成。

析出的原因有兩個，一是使用緩沖鹽溶液時突然加入了純甲醇而析出，這種錯誤很容易避免，這是盡量不要用純的甲醇和純水。只要互相有10%的比例就不會出現這個問題。另一原因是在用緩沖鹽溶液(不論甲醇含量有多少)作流動相時，實驗結束後沒有換甲醇水沖洗，使得微滲的流動相乾燥形成晶體造成。

不過，輸送泵漏液並不是非得馬上修不可，沖洗干凈並在以後的使用中多加小心一般都可以正常使用。

檢測器漏液是個很麻煩的事，一般都是吸收池的問題，更換的費用相當高。但是並不是說一定要馬上更換，還可以從實際實驗效果看能否湊合使用。

二. 漏氣

漏液是從內部向外漏，而漏氣則是外部的氣體進入液相色譜儀的流路內部形成了氣泡。下面按流路的方向逐個部件分析產生氣泡的原因和相應解決方法。

(1) 過濾頭

抽液時，在流路管中有不規則但持續的小氣泡產生，這時考慮的是流動相有沒有脫氣(需要特別提醒即使是有了真空脫氣機也是要先超聲脫氣的，起碼可以減少脫氣機的工作壓力並提高工作效率)，如果已經脫了氣，則要注意過濾頭的污染也會造成這種現象。處理方法比較簡單，擰下過濾頭在稀硝酸中浸泡，超聲半小時，洗凈後裝回去即可。

(2) 透明流路管

指的是在過濾頭和輸送泵之間的那一段管路。這一個部分往往不是有點氣泡，而經常是整個管中全是空氣而操作人員卻渾然不知，以致輸送泵工作了半天才發現流動相瓶里的液體一點也沒少。這也是我們常說的液相色譜儀至少一周要開機一次的原因(我們做液相一定要有「微滲」的概念)。如果長時間不用，這一段管路的液體會徹底幹掉，而充滿空氣的管路和充滿液體的管路不仔細看是分辨不出的。

這種情況對於輸送泵很危險，因為泵從設計來說是輸送液體而不是氣體，內部的液體對於活塞來說起到了機油的作用，如果活塞桿上還殘存了一些緩沖鹽，則極易拉傷，造成不可逆轉的影響。

對於這種情況，要突出「預防為主」如：，液相色譜使用人員要相對固定和穩定，工作中合理搭配資源，每台機一周擊至少作一次實驗，如長期不用起碼每周要沖流動相2 小時。養成良好的工作習慣很重要。

如果不慎出現了這種問題怎麼辦?我的建議是用外力使管路中充滿液體。具體如下：

1、 找到流路管進入輸送泵的接頭。

2、 擰下來。

3、 用一干凈的洗耳球的尖端對准管路的平整切口。

4、 吸液體，看液面從流動相瓶里上升，至離洗耳球5 厘米左右時停止該動作。

5、快速把接頭擰回輸送泵上(這個過程可能會有少許流動相外泄，這是正常現象)。

6、 開機，打開排液閥門，啟動輸送泵。

7、等排液管中流出的溶液沒有氣泡時，再關閉排液閥，儀器正常工作。

(3) 輸送泵和柱子

這些部分進了氣泡一般不怕，沖掉就行。

(4) 檢測器

應該說，整個流路中只要有一個氣泡都會在檢測器上得到強烈的信號反映，檢測器內部的氣泡一般都能被沖走，但也有很難沖掉的殘留氣泡的情況。

如果檢測器里有殘留氣泡，會有特徵明顯的表現形式，就是在走基線時會時不時間隔出現直上直下信號很大的信號峰。這時先看普通流量能否沖走，如果沖不走，那唯一的辦法就是拆柱，把檢測器直接連到輸送泵的出口，加大幾倍流量沖洗，則肯定能沖走氣泡。

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『貳』 高效液相色譜的流動相要經過過濾，那標准品和待測樣品需不需要過濾呢我是用大鼠腦里的紋狀體測的。

當然要過濾，尤其是一些溶解性不好的樣品~

樣品用針式過濾器就可以。我一般就使用0.22um針頭過濾器

生物製品配置時盡量用薄膜濾過的溶劑，最後注入進樣瓶前用針頭過濾器過濾.我做中葯檢測時一般提取後濾紙過濾，進樣前用0.45nm的過濾下就好了。

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『叄』 溶劑過濾器打不開

可以試試滴些硅油,再用電吹風加熱
也可以用丙酮浸泡,
還可以用小木榔頭輕輕敲動,

『肆』 液相色譜所用流動相使用時應注意哪些問題

1、流動相恢復到室溫後使用。流動相溫度與室溫相差時，流動相在恢復到室溫前，基線水平很難穩定，特別是發生漂移，也容易產生氣泡等現象。水與有機溶劑混合時，混合液變化大，往往會與室溫相差很大，務必注意。

2、做HPLC流動相的試劑應用HPLC級的、水應用二次蒸餾水，水相流動相需經常更換，防止長菌變質。使用去離子水、針劑水、純凈水（炊用）並不合適、尤其是做梯度洗脫時，水中的不純物會成為鬼峰，從而干擾分析結果。

3、流動相的pH值過高或過低，流動相使用純水，使用高濃度磷酸鹽緩沖溶液，使用離子對試劑等，均可能造成色譜柱填料被化學破壞，這種對色譜柱固定相及鍵合相的破壞通常是不可修復的。

4、用緩沖鹽做流動相時，在使用前和使用後都要用水清洗流路，絕對禁止將緩沖溶液留在流路中靜置或更長時間。

5、在更換兩種互不相容的流動相時，中間要用異丙醇溶液清洗過渡。例如：先用甲醇水做流動相，然後再用正己烷做流動相時，一定要先用異丙醇溶液沖洗甲醇水，然後用正己烷沖洗異丙醇，反之也是一樣。在更換流動相時還要考慮色譜柱是否更換。

『伍』 waters2695液相報錯，流動相吸空了，怎麼處理

1.換上足量新的流動相或超純水；2.擰開排氣閥，開大流速進行排氣，如果泵不能吸液，可以擰開出口單向閥的出口螺絲，直至有液體流出再擰緊（建議用器把溶劑過濾頭到比例閥入口那段管路的氣泡抽光，免得柱塞桿長時間干跑而損壞柱塞桿）；3.把柱子換成雙通，不接流通池，擰緊排氣閥，開大流速把系統管路里的氣泡沖走；4.調到2的流速，接上流通池，沖洗下流通池；5.接上柱子，用純甲醇以1的流速沖洗色譜柱，直至基線穩定，確認柱子沒氣泡為止。

『陸』 高效液相(HPLC)流動相走幹了怎麼辦

1、Dry Prime，呵呵，既然流動相都幹了，那流路大概也幹了

進行dryprime的操作步驟如下
1.輕輕振搖溶劑瓶中的過濾頭以除去可能留存的氣泡.
2.在灌注排液閥出口插上一支注射器,然後打開排液閥(反時針旋轉半
圈).不要將注射器固定在排液閥上,而要用手將其貼緊閥的出口.
3.選擇DryPrime,然後按OK.
4.按屏幕上你想灌注的相應的流路(A,B,C,或D)鍵.
5.用一隻手握住注射器,同時用另一隻手抽注射器的桿,使針筒中產生
一段讓流路中空氣逸出所必需的真空.
6.重復此操作直至排液口有溶劑流出.這可能需要幾分鍾時間,特別是
當在線脫氣機也同時在灌注時,時間會更長.
7.重復上述操作將4個溶劑通道全都充滿溶劑,然後關閉排液閥.
2、WetPrime，看來柱塞桿那個寶貝沒有問題，接著給我幹活，呵呵！
進行dryprime的操作步驟如下
1輕輕振搖溶劑瓶中的過濾頭以除去可能留存的氣泡.
2.輸入用於prime的流速和持續時間(所用的溶劑組成
是在Status屏幕中輸入的),然後按OK.溶劑管理
系統開始運行.Prime的持續時間取決於安裝在
2690上的選件.
選件流速(mL/min)持續時間(min)
真空脫氣機7.56
氦氣脫氣7.52
3.到達指定時間後流速停止,2690回到Idle狀態.
3、走流動相看看，一開始，壓力低的不正常，我想，大概是有氣體所致，柱子裡面應該沒有干，因為沒有流動相了，空氣不可能將色譜柱裡面的液體壓出去，先用小流速看看，然後逐漸加大流速，呵呵，壓力上來了，看來一切正常啊！
4、回頭檢查了一下泵的密封，沒問題！
5、晚上終於聯繫上工程師，說了一下自己的處理過程，哈哈。VERYGOOD，沒有問題！！

『柒』 為什麼高效液相色譜儀的流動相在使用前必須過濾，脫氣

用於高效液相色譜的流動相必須事先除氣，否則容易在系統中逸出氣泡，影響泵的工作。氣泡還會影響色譜柱的分離效率、檢測器的靈敏度、基線的穩定性，甚至使其無法檢測。

噪音增加，基線不穩定，突然跳躍。此外，溶解在流動相中的氧可以與樣品、流動相甚至固定相（如烷基胺）發生反應。溶解氣體也會引起溶劑ph值的變化，從而導致分離或分析結果的誤差。

常用的除氣方法有加熱沸騰、抽真空、超聲波、吹氦等。

高效液相色譜（hplc）是色譜的一個重要分支。以液體為流動相，高壓輸液系統，將不同極性的單溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入固定相色譜柱。分離柱中的組分後，用檢測器檢測。實現了樣品的分析。

(7)流動相濾頭溶劑過濾器擴展閱讀：

液相色譜-質譜聯用（LC-MS）可增加額外的分析能力，准確識別和量化細胞和組織裂解物、血液、血漿、尿液和口服液等復雜樣品基質中的微量化合物。

流動相和固定相都是液體。流動相與固定相應不相容（極性不同，避免固定液流失），界面清晰。當樣品進入色譜柱時，溶質分布在兩相之間。達到平衡後，遵循高效液相色譜的計算公式。

公式中cs溶質在固定相的濃度、cm溶質在流動相的濃度、vs固定相的體積和vm流動相的體積。llpc與gpc有相似之處，即分離順序取決於k值較大的組分的保留值，但也存在差異。在gpc中，流量對k的影響較小，而llpc流量對k的影響較大。

『捌』 使用液相色譜進行物質的定性定量分析時，使用流動相時有哪些注意事項

流動相溶劑使用的注意事項 1.
流動相溶劑應選擇HPLC的溶劑或依此為標準的溶劑。流動相使用前用0.45μm濾膜過濾、脫氣，清除微粒和灰塵。 在送液泵內，為了防止雜物（固體）進入流路，裝有吸濾器，但網孔徑為10μm，比此更小的顆粒仍然可通過，這會導致流路和柱子堵塞和污染。為此，建議常用0.45μm濾膜過濾。流動相溶劑須經脫氣，如不脫氣，在溶劑混合時，或壓力溫度變化時容易產生大量氣泡，會導致泵誤動作和輸液不暢，檢測器產生雜訊信號等。 2.
流動相恢復到室溫後使用。流動相溫度與室溫相差時，流動相在恢復到室溫前，基線水平很難穩定，特別是發生漂移，也容易產生氣泡等現象。水與有機溶劑混合時，混合液變化大，往往會與室溫相差很大，務必注意。 3.
做HPLC流動相的試劑應用HPLC級的、水應用二次蒸餾水，水相流動相需經常更換，防止長菌變質。使用去離子水、針劑水、純凈水（炊用）並不合適、尤其是做梯度洗脫時，水中的不純物會成為鬼峰，從而干擾分析結果。 4.
流動相的pH值過高或過低，流動相使用純水，使用高濃度磷酸鹽緩沖溶液，使用離子對試劑等，均可能造成色譜柱填料被化學破壞，這種對色譜柱固定相及鍵合相的破壞通常是不可修復的 5.
用緩沖鹽做流動相時，在使用前和使用後都要用水清洗流路，絕對禁止將緩沖溶液留在流路中靜置過夜或更長時間。 6.
若需要使用含鹽的流動相，使用前請務必過濾。並且使用該含鹽流動相前，色譜柱需先用低比例有機相（有機相含量應不低於10%）的溶液沖洗，以免緩沖鹽析出。流動相若為蒸餾水或含鹽的緩沖液，建議現用現配，以免流動相因滋生微生物而造成柱填料的污染。

『玖』 高效液相色譜儀器的結構及其各部分作用

1、溶劑輸送系統；儲液器，用來貯存數量足夠、符合要求的流動相。配有溶劑過濾器，以防止流動相中的顆粒進入泵內。脫氣器，脫氣的目的是為了防止流動相從色譜柱內流出時釋放出氣泡進入檢測器，從而引起雜訊，不能正常檢測。

輸液泵，將儲液器中的流動相連續不斷地以高壓形式進入液路系統，使樣品在色譜柱中完成分離過程。梯度洗脫裝置，是在分離過程中通過逐漸改變流動相的組成增加洗脫能力的一種裝置。

2、進樣系統；進樣器：是將樣品送入色譜柱的裝置，進樣方式可以分為兩種：閥進樣或自動進樣。比較常用的是採用自動進樣器裝樣。

3、分離系統；色譜柱：對樣品進行分離，是整個色譜系統的心臟，它的質量優劣直接影響到分離的效果。

4、檢測系統；檢測器：將色譜柱連續流出的樣品組分轉變成易於測量的電信號，被數據系統接收，得到樣品分離的色譜圖。

5、數據處理和記錄系統；對色譜數據進行處理，並參與HPLC儀器的自動控制。

(9)流動相濾頭溶劑過濾器擴展閱讀

與試樣預處理技術相配合，HPLC 所達到的高解析度和高靈敏度，使分離和同時測定性質上十分相近的物質成為可能，能夠分離復雜相體中的微量成分。隨著固定相的發展，有可能在充分保持生化物質活性的條件下完成其分離。

HPLC成為解決生化分析問題最有前途的方法。由於HPLC具有高解析度、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用，流出組分易收集等優點，因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、醫葯研究、環境分析、無機分析等各種領域。高效液相色譜儀與結構儀器的聯用是一個重要的發展方向。

『拾』 求急：高效液相色譜溶劑過濾器因過濾甲醇時放了水相濾膜被堵塞了，怎麼解決

高效液相色譜儀如圖1所示，是由溶液貯器、高壓泵、進樣系統、色譜分離柱、真空抽濾既過濾顆粒也脫了氣泡，非常②應逐漸改變溶劑的組成，特別是