A. 【求助】超濾離心是怎麼回事
超濾離心機是使用帶超濾膜的離心管，這個膜有分子量的區別，可以截留大於回膜孔徑的答分子，一般的離心機就可以了，還要選好你的離心管體積，這樣才能和你離心機配套使用 情非所屬(站內聯系TA)一般一百左右一根，特殊的可能更貴，有50ml，10ml，一般的離心機都可以，只要管子能套上，同一種物質在膜完好不堵塞的情況下可以重復下，但是不能太多次數，兩三次就好了！
B. 蛋白在超濾管濃縮過程中出現沉澱怎麼辦
1、選擇合抄適的超濾管，主要考慮襲MWCO和濃縮體積，最常見的是Ultra-15（10kD）。
通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。
若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說明書，注意超濾膜對各種化學物質的耐受程度有所不同，表格中有。
2、新買來的超濾是乾燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全過膜，冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過管頂的白線為准。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預冷。
3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快，否則直接損壞超濾膜。
注意，一定要等離心機達到目的轉速之後，方可離開
離心機，否則離心機出問題時，無法第一時間處理，後果不可預測！膜與轉軸的方向根據說明書調整（角轉離心機的情況是膜與軸垂直）。在實際使用中，一般轉速開的比說明書里的要低，這樣可以延長離心管的使用壽命。
C. 超濾濃縮離心管使用前要怎麼處理
可能不同廠家的產品保存運輸條件不一樣。
如果有甘油等保護劑，那就一定要洗干凈再加樣品。
乾的超濾管也要先潤濕再用，否則可能不能完全利用膜面積。
最好，用樣品buffer潤洗下再加樣，最大程度保證蛋白活性。尤其是用過後保存在NaOH或乙醇中後。
一般還是離心機甩一下好，使膜充分浸潤。
降低吸附的辦法有：
1，蛋白濃度不要過低
2，盡量選用纖維素的低吸附超濾管
3，用前可以用Tween
80等去垢劑潤洗（不影響蛋白活性的前提下）
4，加入保護蛋白，如BSA(不影響蛋白後續使用的前提下)
用完保存在20%
EtOH中，4C保存，防止長菌，依不同樣品可以重復使用不同的次數。
D. 蛋白質的可用離心法分離嗎
可以，但需要加蛋白分離劑進行沉降後經
離心機
離心脫水後烘幹得到
蛋白質粉
。
E. 為什麼我的超濾離心管不濃縮
茶葉--抽提--過濾--澄清--濃縮(茶濃縮汁)-調配--加入抗氧化劑等--滅菌灌裝成純茶飲料。但是市場上現在絕大多數都不是純茶飲料，純茶飲料是很難喝的，大多數是調味型茶飲料，所以在無菌灌裝之前要加甜味劑或者檸檬酸食用香精，果汁，乳製品等。\r\n 茶葉注意不能用變質的綠茶，用粉碎機粉碎，准備浸提。\r\n 浸提:以水作為溶劑浸提，水對茶葉中的多酚類，生物鹼，苷，水溶性有機酸等都有很好的溶解性能。影響浸提效果的因素是 1水質的純度:水中的鈣鎂鐵氯，水質的硬度，影響浸提。2水溫越高，時間越長，原料顆粒越小(當然也不能無限制的小)，茶水比列越大，萃取率越高，茶湯的苦澀味也越重，成本也高，香味新鮮度都受影響，建議萃取水溫在80-90度，這樣不至於將苦澀味較重的咖啡鹼萃取過多，同時也將茶多酚萃取出來。茶湯在萃取後，立即降溫冷卻。\r\n 茶葉在萃取冷卻後會產生白色乳狀沉澱，是由茶葉中的茶多酚及其氧化產物和咖啡鹼絡和而成，形成茶乳，蛋白質果膠，澱粉等大分子物質也容易出現沉澱，而水中離子又是促進渾濁和沉澱的首要原因。\r\n 目前採用的去除沉澱的方法是:離心法，超濾微濾和RO膜濃縮。或者加入助濾劑，添加鈣離子然後將茶湯過濾，或者加入離子螯合劑，加入食品添加劑，如環狀糊精，天然膠來抑制茶乳的產生，也可以用單寧酶來破壞茶乳。\r\n 加入添加劑;\r\n 茶飲料的滅菌:用UHT超高溫瞬時滅菌，滅菌時間短，有利於保持茶飲料的色香味。
F. 超濾離心管怎麼使用
蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管（MWCO10kD）。也有其它型號的、不同體積大小和MWCO超濾管可選，視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標體積而定。可重復使用。
1、選擇合適的超濾管，主要考慮MWCO和濃縮體積，通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。
2、新買來的超濾是乾燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全過膜，冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過管頂的白線為准。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預冷。
3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快，否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾（離心機預冷至4度）。膜與轉軸的方向根據說明書調整（角轉離心機的情況是膜與軸垂直）。在實際使用中，一般轉速開的比說明書里的要低，這樣可以延長離心管的使用壽命。
4、當濃縮到剩下1ml時，【取50ul國產Bradford溶液，加入10ul流穿，看有沒變藍色，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了，將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管，用5mg/ml的BSA離心10min，再取流穿，跑蛋白膠或Bradford粗測】，繼續加入剩下的蛋白液濃縮（在冰上操作，防止蛋白受熱），直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發生蛋白沉澱，導致堵管。若發生沉澱，要確定沉澱的具體原因，是蛋白濃度過高還是Buffer不合適；前者可用多根超濾管同時超濾，降低濃度的辦法解決，後者的方法是換不同的Buffer，直到蛋白不發生沉澱為止。
5、前面幾步用以濃縮蛋白，如果要換Buffer，在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候，輕輕加入新的Buffer（經0.22um超濾膜超濾），再濃縮至1ml左右，連續三次，最後一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定，一般不多於500ul，也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算，三次達到1000倍以上，基本上可以達到換buffer的目的。
6、取出最終蛋白濃縮液的操作在冰上操作，用黃槍頭（200ul）取，輕輕順著邊緣插入槍頭，輕輕吹打、混勻蛋白液，注意不要碰到超濾膜，然後吸取濃縮液，每次吸接近200ul，直到吸完。管底剩下的最後一點濃縮液不必吸取，否則難度太大，有可能損壞超濾膜。最後加入MilliQ水到超濾管中，沒過超濾膜，防止膜失水變干。
7、以下是處理超濾管，重復利用超濾管的步驟。
8、倒出超濾管里的水，用milliQ水輕輕潤洗幾次，【若管底有可見的蛋白沉澱，可以先加入水，然後用槍頭吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉澱懸起，然後倒掉，不可用自來水猛沖】然後加入0.2M的NaOH溶液，室溫放置20min，期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液，將管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個小時,再換新的水,放置幾個小時，不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來水洗，內壁再用MilliQ水洗干凈。
9、取出浸沒的管芯，加至接近滿的MilliQ水，50ml管也加滿MilliQ水，將管芯慢慢放入50ml
離心管，排出部分水，然後蓋上蓋子，放4度保存，直到下次使用。一般來說，按照上述步驟和注意事項，每根管用三四年不會壞。
G. 蛋白用超濾管濃縮容易沉澱怎麼辦
可能是抄這個蛋白的水溶性較差，也就是只能保持在一定濃度不能太高
另外就和這個蛋白的穩定性有關了，超濾時保持低溫，體積縮小一點後就把濾液混勻避免局部濃度過高，選擇更合適的緩沖液，添加一點甘油等小分子物質等都可以增加蛋白的穩定性。
H. 超濾離心管離心蛋白時離心幹了怎麼辦
不建議用離心管離蛋白。最好還是膜處理比較好。
蛋白會粘附在渣里，只有用緩沖液再潤洗咯。
I. 超濾離心管怎麼使用
蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管（MWCO10kD）。也有其它型號的、不同體積大小和超濾管可選，視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標體積而定。可重復使用。
1、選擇合適的超濾管，主要考慮MWCO和濃縮體積，通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。
2、新買來的超濾是乾燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全過膜，冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過管頂的白線為准。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預冷。
3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快，否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾（離心機預冷至4度）。膜與轉軸的方向根據說明書調整（角轉離心機的情況是膜與軸垂直）。在實際使用中，一般轉速開的比說明書里的要低，這樣可以延長離心管的使用壽命。
4、當濃縮到剩下1ml時，【取50ul國產Bradford溶液，加入10ul流穿，看有沒變藍色，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了，將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管，用5mg/ml的BSA離心10min，再取流穿，跑蛋白膠或Bradford粗測】，繼續加入剩下的蛋白液濃縮（在冰上操作，防止蛋白受熱），直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發生蛋白沉澱，導致堵管。若發生沉澱，要確定沉澱的具體原因，是蛋白濃度過高還是Buffer不合適；前者可用多根超濾管同時超濾，降低濃度的辦法解決，後者的方法是換不同的Buffer，直到蛋白不發生沉澱為止。
5、前面幾步用以濃縮蛋白，如果要換Buffer，在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候，輕輕加入新的Buffer（經0.22um超濾膜超濾），再濃縮至1ml左右，連續三次，最後一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定，一般不多於500ul，也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算，三次達到1000倍以上，基本上可以達到換buffer的目的。
6、取出最終蛋白濃縮液的操作在冰上操作，用黃槍頭（200ul）取，輕輕順著邊緣插入槍頭，輕輕吹打、混勻蛋白液，注意不要碰到超濾膜，然後吸取濃縮液，每次吸接近200ul，直到吸完。管底剩下的最後一點濃縮液不必吸取，否則難度太大，有可能損壞超濾膜。最後加入MilliQ水到超濾管中，沒過超濾膜，防止膜失水變干。
7、以下是處理超濾管，重復利用超濾管的步驟。
8、倒出超濾管里的水，用milliQ水輕輕潤洗幾次，【若管底有可見的蛋白沉澱，可以先加入水，然後用槍頭吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉澱懸起，然後倒掉，不可用自來水猛沖】然後加入0.2M的NaOH溶液，室溫放置20min，期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液，將管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個小時,再換新的水,放置幾個小時，不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來水洗，內壁再用MilliQ水洗干凈。
9、取出浸沒的管芯，加至接近滿的MilliQ水，50ml管也加滿MilliQ水，將管芯慢慢放入50ml
離心管，排出部分水，然後蓋上蓋子，放4度保存，直到下次使用。一般來說，按照上述步驟和注意事項，每根管用三四年不會壞。
J. 求助：第一次使用超濾離心管應該怎麼處理
可能不同廠家的產品保存運輸條件不一樣。
如果有甘油等保護劑，那就一定要洗干凈再加樣品。版權
乾的超濾管也要先潤濕再用，否則可能不能完全利用膜面積。
最好，用樣品buffer潤洗下再加樣，最大程度保證蛋白活性。尤其是用過後保存在NaOH或乙醇中後。
一般還是離心機甩一下好，使膜充分浸潤。
降低吸附的辦法有：
1，蛋白濃度不要過低
2，盡量選用纖維素的低吸附超濾管
3，用前可以用Tween 80等去垢劑潤洗（不影響蛋白活性的前提下）
4，加入保護蛋白，如BSA(不影響蛋白後續使用的前提下)
用完保存在20% EtOH中，4C保存，防止長菌，依不同樣品可以重復使用不同的次數。