⑴ 在配製培養基的操作過程中應該注意些什麼問題為什麼
1、培養基配方的選定
同一種培養基的配方在不同著作中常會有某些差別。因此，除所用的是標准方法，應嚴格按其規定進行配製外，一般均應盡量收集有關資料，加以比較核對，再依據自己的使用目的，加以選用，記錄其來源。
2、培養基的制備記錄
每次制備培養基均應有記錄，包括培養基名稱，配方及其來源，和各種成份的牌號，最終pH值、消毒的溫度和時間制備的日期和制備者等，記錄應復制一份，原記錄保存備查，復制記錄隨制好的培養基一同存放、以防發生混亂。
3、培養基成分的稱取
培養基的各種成分必須精確稱取並要注意防止錯亂，最好一次完成，不要中斷。可將配方置於傍側，每稱完一種成分即在配方面軍做出記號，並將所需稱取的葯品一次取齊，置於左側，每種稱取完畢後，即移放於右側。完全稱取完畢後，還應進行一次檢查。
4、培養基各成份的混合和溶化
培養基所用化學葯品均應是化學純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋，以防有微量銅或鐵混入培養基中，使細菌不易生長。最好使用不銹鋼萵加熱溶化，可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時、可先用溫水加熱並隨時擾動、以防焦化、如發現有焦化現象、該培養基即不能使用，應重新制備。待大部分固體成分溶化後，再用較小火力使所有成分完全溶化，迄至煮沸。如為瓊脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然後將兩溶液充分混合。在加熱溶化過程中，因蒸發而丟失的水分，最後必須加以補足。
5、培養基pH的初步調正
因培養基在加熱消毒過程中、pH會有所變化，培養基各成分完全溶解後，應進行PH的初步調正。例如，牛肉浸液約可降低pH0.2，而腸浸液pH卻會有顯著的升高。因此，對這個步驟，操作者應隨時注意探索經驗、以期能掌握培養基的最終PH，保證培養基的質量。PH調整後，還應將培養基煮沸數分鍾，以利培養基沉澱物的析出。
6、培養基的過濾澄清
液體培養基必須絕對澄清，瓊脂培養基也應透明無顯著沉澱，因此 ，須要採用過濾或其它澄清方法以達到此項要求。一般液體培養基可用濾紙過濾法，濾紙應折疊成摺扇或漏斗形，以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂。
瓊脂培養基可用清潔的白色薄絨布趁熱過濾。亦可用中間夾有薄層吸水棉的雙層紗布過濾。新制肉、肝、血和土豆等浸液時、則須先用絨布將碎渣濾去，再用濾紙反復過濾。如過濾法不能達到澄清要求、則須用蛋清澄清法。即將冷卻至55~60°C的培養基放入大的三角燒瓶內，裝入量不得超過燒瓶容量的1/2，每1000ml培養基加入1~2個雞蛋的蛋白，強力振搖3~5分鍾，置高壓蒸汽滅菌器中、121°C加熱20分鍾、取出趁熱以絨布過濾即可。
7、培養基的分裝
培養基的分裝，應按使用的目的和要求，分裝於試管、燒瓶等適當容器內。分裝量不得超過容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵，其外還須用防水紙包紮（現試管一般多有用螺旋蓋者）。分裝時最好能使用半自動或電動的定量分裝器。分裝瓊脂斜面培養基時，分裝量應以能形成2/3底層和1/3斜面的量為洽當。分裝容器應預先清洗干凈並經干烤消毒，以利於培養基的徹底滅菌。每批培養基應另外分裝20ml培養基於一小玻璃瓶中，隨該批培養基同時滅菌，以為測定該批培養基最終pH之用。
8、培養基的滅菌
一般培養基可採用121°C高壓蒸汽滅菌15分鍾的方法。在各種培養基制備方法中，如無特殊規定，即可用此法滅菌。
某些畏熱成分，如糖類，應另行配成20%或更高的濃液，以過濾或間歇滅菌法消毒，以後再用無菌操作技術、定量加於培養基。明膠培養基亦應用較低溫度滅菌。血液、體液和抗生素等則應以無菌操作技術抽取和加入於經冷卻約50°C左右的培養基中。
瓊脂斜面培養基應在滅菌後立即取出，冷至55℃-60℃時，擺置成適當斜面，待其自然凝固。
9、培養基的質量測試
每批培養基制備好以後，應仔細檢查一遍，如發現破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養基沾染等、均應挑出棄去。並測定其最終pH。
將全部培養基放入36±1°C恆溫箱培養過夜，如發現有菌生長，即棄去。
用有關的標准菌株接種1~2管或瓶培養基，培養24~48小時，如無菌生長或生長不好。應追查原因並重復接種一次，如結果仍同前，則該批培養基即應棄去，不能使用。
10、培養基的保存
培養基應存放於冷暗處，最好能放於普通冰箱內。放置時間不宜超過一周，傾注的平板培養基不宜超過3天。每批培養基均必須附有該批培養基制備記錄副頁或明顯標簽。
⑵ 培養基能否重復滅菌多次使用
絕對不行，必須換。可能會產生抑制其它菌生長的物質
⑶ 配好的細胞培養基用過濾么
孔徑為0.22微米的濾膜
這種濾膜可以過濾掉細菌和病毒。
孔徑0.45微米的濾膜已經可以過濾掉細菌，但是不能過濾病毒。
為了防止噬菌體污染，一般還是用0.22微米的濾膜比較好。
⑷ .為什麼配製培養基之前要反復處理配製用水並要事先高壓處理
目的是要消毒滅菌去除雜離子
⑸ 在配置培養基的操作過程中應注意些什麼問題為什麼
一、關於培養基配製抄
1、當然是注意濃度配比不要搞錯
2、很多培養基的加料順序有講究,否則會有沉澱產生
3、有些培養基會有不溶物質,分裝前應搖勻
4、不要忘了調節pH值（一般細菌都需要,酵母可能自然pH就行,不過不一定）
5、加熱溶解時盡量不要煮沸,會損失營養物質
二、關於微量元素：要看是什麼微量元素
1、如果是抗生素、維生素等不耐熱物質,應該先過濾除菌,再加入滅好菌的培養基中.
2、如果是金屬離子等耐熱眼淚,可以配製成母液,配製培養基時加入適量即可同時滅菌.
三、關於濃度配比：既然需要配製培養基,就說明已經到了實驗室階段
1、為了可重復性.總不能今天是這樣,明天又那樣吧.
2、有適合不適合.
3、為了得到最好的培養效果.
⑹ 培養基過濾
WC型微孔濾膜使用說明書
本廠用二醋酸——三醋酸纖維素為基材，以流涎法製成微孔濾膜（簡稱MC濾膜），是現在國內新型的一個品種，它克服了目前常用的硝酸—酸酸混合纖維素微孔濾膜（簡稱混合濾膜）的質脆、易斷裂、有靜電吸引、易燃，遇75%以上酒精易膨脹與溶解及在偏鹼性溶液中易產生有毒的硝酸根和亞硝酸根等的不足之處。本廠MC濾膜在國內上百家葯廠、醫院、科研所等廣泛用於大輸液、針劑及各種溶液精濾，使用效果極佳，澄明度合格率普遍提高。目前該產品暢銷全國，深受用戶歡迎。同時微孔濾膜不但用於制葯業，而且在生物製品、醫學微生物學、化工、電子工業、冶金工業、臨床化驗、釀造、鍾表、航空等工業方面超純水的制備、空氣凈化、醫葯用油、潤滑、燃料用油及科研實驗化驗室濾除細菌和微粒方面等將有越來越廣泛的推廣和應用。
一、 要用途
（1） 醫葯工業：用於水針劑，大輸液及結晶前溶液的微粒和細菌過濾，抗菌素、球蛋白，疫苗血清及組織培養等過濾。
（2） 電子工業：用於半導體器件和集成電路車間的空氣凈化，制備洗滌用的高純水質，對溶劑、顯影劑、光刻膠等進行凈化處理。
（3） 日化工業：用於日用化妝品中含乙醇和油脂類溶液的微粒過濾。
（4） 公共衛生：用於飲水過濾,河塘水質細菌過濾檢查、工作地區粉塵微粒過濾檢驗。
（5） 食品工業：飲料果汁、酒類、油類等的滅菌和懸浮雜質的過濾。
（6） 亦可用於無菌檢查——濾膜過濾法及其它科學研究中的分析測定等。
二、 MC型濾膜性能介紹
（1） 孔徑均勻：用汞壓法測定額定孔徑分布均勻，並用放大電鏡掃描圖象分析，額定孔徑基本一致。
（2） 孔隙率高：每平厘米濾膜中可包含一千萬至一億個額定微孔，以孔隙率測定法測得孔隙率在80%以上。
（3） 濾膜透水率高、濾速快：用透水率測定法測得0.8UM微孔濾膜透水率可達215亳升/平方厘米。分，1.2UM透水率可達311亳升/平方厘米。分。
（4） 強度高有韌性，因MC型濾膜生產過程中的三醋酸纖維素分子乙醯化完全、張力強度高，爆破強度法測定厚度0.10~0.15毫米膜，爆破強度≥3公斤/平方厘米，膜有韌性，即使對折數次也不易斷裂，所以使用壽命長。
（5） 濾膜的各向同性：MC型濾膜為各向同性，不分正反面，對額定孔徑以上的固體微粒能起到絕對截留作用。
（6） 熱穩定性：在120度熱壓滅茵30分鍾，熱穩定性良好。
（7） 化學穩定性：可過濾PH2~11各種葯液，還可過濾儀表油、5%醋酸、6N硫酸、6N氫氧化鉀、無水乙醇、丙三醇、甲醇、正丙醇、導丙醇、偏笨三酸三辛酯、聚乙二醇、各種酒類、飲料、醋等。
（8） MC型濾膜還具有無毒、無媒質遷移等優點。
三、 可供規格
孔徑（微米）：0.22 0.3 0.45 0.65 0.8 1.0 1.2 3~5
直徑（毫米）：Ф25 Ф35 Ф50 Ф100 Ф150 Ф200 Ф300 Ф400 （如需特殊規格可定製）
各種孔徑適用范圍
（1）濾除微粒：應選用0.65um 0.8um 1.2um的濾膜.
（2）濾除細菌：應選用0.45um 0.3um 0.22um的濾膜.
四、 使用方法
（1） 將濾膜於70度左右的蒸餾水中浸泡4小時以上，使用前再用適量新鮮蒸餾水沖洗一二次，然後裝入已洗過的濾器中備用。
（2） 過濾方法：可採用加壓法、真空法或位差液壓法、加壓法的濾速隨著壓力提高而加快，一般不超過3~4公斤/平方厘米，採用抽氣過濾時應防止外界空氣的細菌、微粒污染。利用位差過濾，一般位差應考慮在3~5米以上（約相當於0.5個大氣壓），否則影響濾速。
五、 注意事項
（1） MC型濾膜適宜於PH2~11，對強酸強咸或某些有機溶劑不宜使用。
（2） 本品一般耐溫120度，熱壓30分鍾，耐2~4公斤/平方厘米。
（3） 微孔濾膜只能作為最後過濾階段，濾液必須經過沙濾棒、濾紙、濾球等粗過濾材料，可避免濾膜堵塞。
（4） 操作MC型濾膜時不可觸及尖硬物品，以免引起穿孔現象。在裝濾膜前要嚴格檢查微孔濾膜是否有漏孔，不合格不得使用。
混合纖維素酯微孔濾膜使用說明書
混合纖維素製成的薄膜濾材，經有關單位多次廣泛使用，質量符合標准，其產品表面平滑、質地輕薄、孔隙率高、且微孔結構均勻，因此且有流速快，不易吸附的特點。
一． 用途
本品用於制葯業、生物製品、礦泉飲料、釀造、電子等工業方面的水質、醫葯用油、潤滑用油、燃料用油及科研實驗化驗室等濾除細菌和微粒，一般0。65微米以上可除微粒，0。45以下可濾除細菌。
二． 規格
混合纖維素酯微孔濾膜各種規格如下：
公稱孔徑（直徑微米）0.2 0.3 0.45 0.65 0.8 1.0 1.2
膜片直徑（毫米）25 35 50 60 100 150 200 300 400
（如需特殊規格另行定製）
三． 使用方法
1． 將濾膜平放於清潔盛器內，用70度左右的蒸餾水浸泡，使全部潤濕，數小時後（約4小時以上）傾去水，再用上法浸泡過夜，使用前再用適量溫蒸餾水清洗一次。
2． 將洗清的濾膜（濕）裝入適宜的濾器中，防止周圍漏液，自進液口放進濾液，並在:排氣口排出空氣，即可進行過濾。
四． 注意事項
1． 水膜片適宜於PH2-9的葯液，對強酸鹼或有機溶劑包括酒精等不宜使用。
2． 本品一般能耐溫120度，耐壓3~4公斤/平方厘米。
3． 微孔濾膜只能作為最後階段過濾，濾液必須先經過沙棒或其它濾材預過濾，以免濾膜堵塞。
上述使用方法，僅適用於水劑葯液或其它水溶劑的過濾。
⑺ 請問制備培養基時如何過濾除菌
1、滅菌方法
培養基的滅菌方法主要有兩種，高壓除菌及.22um微孔濾膜過濾除菌。與過濾相比，高壓滅菌的工作強度小，成本較低，但易造成營養成分的流失，而且在多次加樣（無菌谷氨醯胺溶液，無菌碳酸氫鈉溶液等）過程中容易造成二次污染。大多數培養基採用0.1～0.2μm孔徑的微孔濾膜進行過濾滅菌，並且已成為培養基除菌的發展方向，它可低限度地減少培養基的營養損失。
1.1 高壓滅菌
某些培養基（如MEM）可進行高壓滅菌，例如清大天一的MEM培養基中的MD605、MD609等。這類培養基一般不含有L-谷氨醯胺和碳酸氫鈉，一般是在培養基高壓滅菌後加入L-谷氨醯胺和碳酸氫鈉的無菌的液體。另外可高壓的谷氨酸鹽（如L-丙氨醯-L-谷氨醯胺）可代替L-谷氨醯胺。
可高壓滅菌的培養基在121℃、15psi，15分鍾的條件下完全可達到滅菌效果及營養成分的最小損失，不需將滅菌時間延長。為保證高壓滅菌的效果，滅菌設備的驗證很關鍵。
1.2 過濾滅菌
可供過濾滅菌使用的濾膜很多，其材料多為polyethersulphone（PES）、尼龍、多聚碳酸鹽、醋酸纖維素、硝酸纖維素、PTFE、陶瓷等。一般情況下採取正壓過濾，正壓過濾較之負壓過濾具有流速高、過濾快、不易污染，可避免蛋白質產生大量氣泡等優點。一般使用過濾器可參照各供應商的產品說明書。
目前大多數實驗室和制葯企業採用微孔濾膜濾器（如Zeiss濾器）或立式微孔濾器（Millipore、Pall）除菌。微孔濾膜濾器為不銹鋼，中間可夾放0.22um濾膜。使用這種濾器最重要步驟是安裝濾膜及無菌過濾過程。如在使用Zeiss濾器時，先要用培養用水將濾膜充分潤濕，在安裝濾膜時可在其上放置一層定性濾紙再固定。消毒時旋鈕不要扭太緊，凡與空氣接觸部位都要包好（可用牛皮紙、紗布、無紡布等）；高壓滅菌後，在無菌環境中立即將旋鈕扭緊。過濾除菌結束後，要打開濾器，檢查濾膜是否完整，如果濾膜破裂，需重新進行過濾除菌過程。立式微孔濾器可以選用不同的微孔濾柱體積，因為濾膜的折疊，膜面積顯著增大，液體處理量大，而且不容易發生堵塞現象。
⑻ 培養基要煮沸，是成分一融化就可以調，還是煮沸以後
培養基要煮沸，是成分一融化就可以調，還是煮沸以後
1、培養基配方的選定
同一種培養基的配方在不同著作中常會有某些差別。因此，除所用的是標准方法，應嚴格按其規定進行配製外，一般均應盡量收集有關資料，加以比較核對，再依據自己的使用目的，加以選用，記錄其來源。
2、培養基的制備記錄
每次制備培養基均應有記錄，包括培養基名稱，配方及其來源，和各種成份的牌號，最終pH值、消毒的溫度和時間制備的日期和制備者等，記錄應復制一份，原記錄保存備查，復制記錄隨制好的培養基一同存放、以防發生混亂。
3、培養基成分的稱取
培養基的各種成分必須精確稱取並要注意防止錯亂，最好一次完成，不要中斷。可將配方置於傍側，每稱完一種成分即在配方面軍做出記號，並將所需稱取的葯品一次取齊，置於左側，每種稱取完畢後，即移放於右側。完全稱取完畢後，還應進行一次檢查。
4、培養基各成份的混合和溶化
培養基所用化學葯品均應是化學純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋，以防有微量銅或鐵混入培養基中，使細菌不易生長。最好使用不銹鋼萵加熱溶化，可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時、可先用溫水加熱並隨時擾動、以防焦化、如發現有焦化現象、該培養基即不能使用，應重新制備。待大部分固體成分溶化後，再用較小火力使所有成分完全溶化，迄至煮沸。如為瓊脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然後將兩溶液充分混合。在加熱溶化過程中，因蒸發而丟失的水分，最後必須加以補足。
5、培養基pH的初步調正
因培養基在加熱消毒過程中、pH會有所變化，培養基各成分完全溶解後，應進行PH的初步調正。例如，牛肉浸液約可降低pH0.2，而腸浸液pH卻會有顯著的升高。因此，對這個步驟，操作者應隨時注意探索經驗、以期能掌握培養基的最終PH，保證培養基的質量。PH調整後，還應將培養基煮沸數分鍾，以利培養基沉澱物的析出。
6、培養基的過濾澄清
液體培養基必須絕對澄清，瓊脂培養基也應透明無顯著沉澱，因此 ，須要採用過濾或其它澄清方法以達到此項要求。一般液體培養基可用濾紙過濾法，濾紙應折疊成摺扇或漏斗形，以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂。
瓊脂培養基可用清潔的白色薄絨布趁熱過濾。亦可用中間夾有薄層吸水棉的雙層紗布過濾。新制肉、肝、血和土豆等浸液時、則須先用絨布將碎渣濾去，再用濾紙反復過濾。如過濾法不能達到澄清要求、則須用蛋清澄清法。即將冷卻至55~60°C的培養基放入大的三角燒瓶內，裝入量不得超過燒瓶容量的1/2，每1000ml培養基加入1~2個雞蛋的蛋白，強力振搖3~5分鍾，置高壓蒸汽滅菌器中、121°C加熱20分鍾、取出趁熱以絨布過濾即可。
7、培養基的分裝
培養基的分裝，應按使用的目的和要求，分裝於試管、燒瓶等適當容器內。分裝量不得超過容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵，其外還須用防水紙包紮（現試管一般多有用螺旋蓋者）。分裝時最好能使用半自動或電動的定量分裝器。分裝瓊脂斜面培養基時，分裝量應以能形成2/3底層和1/3斜面的量為洽當。分裝容器應預先清洗干凈並經干烤消毒，以利於培養基的徹底滅菌。每批培養基應另外分裝20ml培養基於一小玻璃瓶中，隨該批培養基同時滅菌，以為測定該批培養基最終pH之用。
8、培養基的滅菌
一般培養基可採用121°C高壓蒸汽滅菌15分鍾的方法。在各種培養基制備方法中，如無特殊規定，即可用此法滅菌。
某些畏熱成分，如糖類，應另行配成20%或更高的濃液，以過濾或間歇滅菌法消毒，以後再用無菌操作技術、定量加於培養基。明膠培養基亦應用較低溫度滅菌。血液、體液和抗生素等則應以無菌操作技術抽取和加入於經冷卻約50°C左右的培養基中。
瓊脂斜面培養基應在滅菌後立即取出，冷至55℃-60℃時，擺置成適當斜面，待其自然凝固。
9、培養基的質量測試
每批培養基制備好以後，應仔細檢查一遍，如發現破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養基沾染等、均應挑出棄去。並測定其最終pH。
將全部培養基放入36±1°C恆溫箱培養過夜，如發現有菌生長，即棄去。
用有關的標准菌株接種1~2管或瓶培養基，培養24~48小時，如無菌生長或生長不好。應追查原因並重復接種一次，如結果仍同前，則該批培養基即應棄去，不能使用。
10、培養基的保存
培養基應存放於冷暗處，最好能放於普通冰箱內。放置時間不宜超過一周，傾注的平板培養基不宜超過3天。每批培養基均必須附有該批培養基制備記錄副頁或明顯標簽。