① 蛋白掛在陽離子交換柱上洗脫不下來,怎麼辦
疏水層析目的蛋白結合太緊,一般需要降低疏水作用,可以考慮降低結合時中性鹽的濃度。使用疏水力較弱的層析填料,比如丁基疏水、辛基疏水的填料。 洗脫時可以用蒸餾水直接洗脫,如果還是那以洗脫的話可以嘗試添加低濃度乙醇
② 離子交換柱再生進完酸鹼之後怎麼辦直接正洗行不行
下面是離子交換樹脂的再生的一些方法可以參考:<br>
離子交換樹脂的再生 <br>
(1)常規的再生處理 <br>
離子交換樹脂使用一段時間後,吸附的雜質接近飽和狀態,就要進行再生處理,用化學葯劑將樹脂所吸附的離子和其他雜質洗脫除去,使之恢復原來的組成和性能。在實際運用中,為降低再生費用,要適當控制再生劑用量,使樹脂的性能恢復到最經濟合理的再生水平,通常控制性能恢復程度為70~80%。如果要達到更高的再生水平,則再生劑量要大量增加,再生劑的利用率則下降。 <br>
樹脂的再生應當根據樹脂的種類、特性,以及運行的經濟性,選擇適當的再生葯劑和工作條件。 <br>
樹脂的再生特性與它的類型和結構有密切關系。強酸性和強鹼性樹脂的再生比較困難,需用再生劑量比理論值高相當多;而弱酸性或弱鹼性樹脂則較易再生,所用再生劑量只需稍多於理論值。此外,大孔型和交聯度低的樹脂較易再生,而凝膠型和交聯度高的樹脂則要較長的再生反應時間。 <br>
再生劑的種類應根據樹脂的離子類型來選用,並適當地選擇價格較低的酸、鹼或鹽。例如:鈉型強酸性陽樹脂可用10%NaCl溶液再生,用葯量為其交換容量的2倍(用NaCl 量為117g/L樹脂);氫型強酸性樹脂用強酸再生,用硫酸時要防止被樹脂吸附的鈣與硫酸反應生成硫酸鈣沉澱物。為此,宜先通入1~2%的稀硫酸再生。 <br>
氯型強鹼性樹脂,主要以NaCl溶液來再生,但加入少量鹼有助於將樹脂吸附的色素和有機物溶解洗出,故通常使用含10%NaCl + 0.2%NaOH的鹼鹽液再生,常規用量為每升樹脂用150~200gNaCl,及3~4gNaOH。OH型強鹼陰樹脂則用4%NaOH溶液再生。 <br>
樹脂再生時的化學反應是樹脂原先的交換吸附的逆反應。按化學反應平衡原理,提高化學反應某一方物質的濃度,可促進反應向另一方進行,故提高再生液濃度可加速再生反應,並達到較高的再生水平。 <br>
為加速再生化學反應,通常先將再生液加熱至70~80℃。它通過樹脂的流速一般為1~2BV/h。也可採用先快後慢的方法,以充分發揮再生劑的效能。再生時間約為一小時。隨後用軟水順流沖洗樹脂約一小時(水量約4BV),待洗水排清之後,再用水反洗,至洗出液無色、無混濁為止。 <br>
一些樹脂在再生和反洗之後,要調校pH值。因為再生液常含有鹼,樹脂再生後即使經水洗,也常帶鹼性。而一些脫色樹脂(特別是弱鹼性樹脂)宜在微酸性下工作。此時可通入稀鹽酸,使樹脂pH值下降至6左右,再用水正洗,反洗各一次。 <br>
樹脂在使用較長時間後,由於它所吸附的一部分雜質(特別是大分子有機膠體物質)不易被常規的再生處理所洗脫,逐漸積累而將樹脂污染,使樹脂效能降低。此時要用特殊的方法處理。例如:陽離子樹脂受含氮的兩性化合物污染,可用4%NaOH溶液處理,將它溶解而排掉;陰離子樹脂受有機物污染,可提高鹼鹽溶液中的NaOH濃度至0.5~1.0%,以溶解有機物。 <br>
近年國內研究用糖化鈣溶液對使用過的樹脂進行再生,再生液返回生產流程再用,不需要排放。免除了再生廢液處理的問題。 <br>
(2)特殊的再生處理 <br>
污染較嚴重的樹脂,可用酸或鹼性食鹽溶液反復處理,如先用10%NaCl +1%NaOH鹼鹽溶液溶解有機物,再用4%HCl 或分別用10%NaOH 及1%HCl溶解無機物,隨後再用10%NaCl+1%NaOH處理,在約70℃下進行。 <br>
如果上述處理的效果未達要求,可用氧化法處理。即用水洗滌樹脂後,通入濃度為0.5%的次氯酸鈉溶液,控制流速2~4BV/h,通過量10~20BV,隨即用水洗滌,再用鹽水處理。應當注意,氧化處理可能將樹脂結構中的大分子的連接鍵氧化,造成樹脂的降解,膨脹度增大,容易碎裂,故不宜常用。通常使用50周期後才進行一次氧化處理。由於氯型樹脂有較強的耐氧化性,故樹脂在氧化處理前應用鹽水處理,變為氯型,這還可避免處理過程中的pH值變化,並使氧化作用比較穩定。 <br>
③ 陽離子交換樹脂 清洗 為什麼要加氯化鈉
陽離子交換樹脂的預處理步驟: 首先用清水對樹脂進行沖洗(最好為反洗)洗至出版水清澈權無混濁、無雜質為止。而後用4~5%的HCl和NaOH在交換柱中依次交替浸泡2~4小時、、、 (2)應用於醫葯、食品行業的樹脂,預處理最好、、、、 (3)各種樹脂因品種、用途不一,預處理的方法也有區別,預處理時的酸鹼濃度及接觸時間、、、。
④ 強陽離子交換和弱陽離子交換的區別
這是包含關系。質子交換膜是陽離子交換膜中的一種。陽離子交換膜可能透過除了質子的其他陽離子
⑤ 蛋白質水解產物陽離子交換柱層析時的洗脫順序
pI 10.76的那個應該帶正電荷。陽離子交換柱本身帶負電荷。
⑥ 離子交換色譜柱分離極弱酸陰離子時為什麼要使用鹼性淋洗液
就得抄知道其原理:襲
離子色譜是利用相反電荷之間的相互作用來分離的,當檢測物質帶負電荷時,要選擇陰離子色譜柱,陰離子色譜柱帶正電荷的配基,進行陰離子-陽離子交換,結合帶負電荷的分子
我們的瑞伊締洗液也是弱鹼性
⑦ 急!急!如何裝陰離子交換柱,使用時候出現氣泡怎麼除去謝謝
可以用適量的有機溶劑潤洗一下層析柱,柱子體積較小的話就用玻璃棒攪勻排除一下氣泡。
不管是干柱和濕柱,都要加層析液,不能要求一開始就沒有氣泡的。要用洗脫劑不停的洗脫,就是用配置好的試劑一邊一邊對柱子進行洗脫,這樣不但可以消除氣泡,還可以使硅膠充分沉降,讓層析效果更好。等柱子沒有氣泡後在上樣用洗脫液進行層析。
若柱中留有氣泡或各部分松緊不勻(更不能有斷層)時,會影響滲透速度和顯色的均勻。去除就是用玻璃棒攪拌,趕走氣泡。
(7)弱陽離子交換柱的清洗擴展閱讀:
水溶液中一些陽離子進入了反離子層,而原來的反離子層中的陽離子進入了水溶液。這種在正常濃度下,反離子層與水溶液之間的各向同性離子交換稱為離子交換作用。
離子交換主要發生在擴散層與正常水溶液之間。由於粘土顆粒表面通常帶有負電荷,離子交換主要是陽離子交換,所以又稱陽離子交換。離子交換嚴格遵循等價定律,即進入反離子層的陽離子等價於從反離子層排開的陽離子等價。
⑧ 磺酸基陽離子交換鍵合硅膠色譜柱,怎樣維護保養及活化
首先在開始使用系統以前檢查柱子有否微生物生長,否則柱子會堵塞,柱壓會升高到無法接受的水平。然後,不接檢測器,正向安裝色譜柱,使用純甲醇以0.6ml/min流速沖洗約10倍柱體積。
再連接檢測器,用純甲醇以0.6ml/min流速沖洗約20倍柱體積。
然後使用去離子水以0.6ml/min流速沖洗約20倍柱體積。
最好再確保連接好保護柱(多使用相應柱製造商針對性提供的保護柱),再用選用的洗脫液以0.6ml/min流速平衡1h以上,進樣檢測。同樣,若洗脫液中含有緩沖鹽類,在用分析洗脫液平衡之前,先用不含緩沖鹽的同比例洗脫液過渡,沖洗約10倍柱體積,避免緩沖鹽在分析柱內析出。
特別注意:
①洗脫液要求是新制的緩沖液。對於陽離子交換柱,多用檸檬酸或酒石酸緩沖液(或其混合溶液)、鄰苯二甲酸緩沖液,pH范圍從2.5到6.5;對於陰離子交換柱,多用磷酸緩沖液、硝酸銨溶液(1mMol/L),鄰苯二甲酸緩沖液,pH范圍從2.5到6.5。絕對禁止使用水楊酸緩沖液,因水楊酸分解產物會改變固定相的性質。洗脫液在使用以前必須用0.45um濾膜過濾並徹底脫氣,以防止發生檢測和泵送問題。
②提倡在室溫環境使用,為了提高分析的穩定性,可以設置高於室溫5~10℃的柱溫,最好不要在40℃以上使用。
③使用過程中不要超過其耐受最高壓力。
④增加流速或者降低流速要採取小的間隔變化以防止柱床的擾動。更換柱子,必須先降低流量至0,等待洗脫液完全流出柱子,壓力變化到0(約2min)後再更換。
⑤必須防止將來自流動相或者樣品中的疏水性或與流動相極性差別很大的化合物進入色譜柱,特別地,要絕對禁止導入顆粒雜質,以防止操作壓力增高,污染物難以或者不能去除。
(6)分析完畢,凈化程序基本同C18柱,先用去離子水以0.6ml/min流速沖洗約20倍柱體積。然後用甲醇以0.6ml/min流速沖洗約10倍柱體積,純甲醇飽和後密封保存即可。(注意:一定要確保在柱子內沒有緩沖液或者其他含鹽類的洗脫液的情況下保存色譜柱。)
(7)長時間保存後重新使用,重復上述(1)~(6)即可。
⑨ 陰離子交換柱能去除水中的什麼
作用是用陰樹脂中的氫氧根交換掉水中的其他陰離子。混合物通過陰離子交換柱,陰離子可以被吸附從而與其他物質分開,一般來說,陰離子交換柱的吸附劑應該呈陽性。