1. 0.22除菌級濾膜能不能除去細菌內毒素
能去除一部分，0.22微米的濾膜孔徑是正態分布的不是絕對的過濾孔徑，因此會有一些內毒素會透過！建議採用6000道爾頓的超濾膜來去除
2. 氫氧化鈉為什麼不用檢測細菌內毒素
[摘要] 目的：建立新葯的細菌內毒素檢查方法。方法：採用鱟試驗檢查法對新葯中的細菌內毒素進行檢查。結果：介紹了如何建立新葯的細菌內毒素檢查方法，重點是細菌內毒素檢查限值的確認以及如何進行干擾試驗。結論：細菌內毒素檢查法為新葯的質量控制以及應急檢驗提供了有益的基礎。
[關鍵詞] 新葯；細菌內毒素檢查法；干擾試驗
[中圖分類號] R927.12 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-7210（2011）11（b）-159-03
How to establish the method of bacterial endotoxin test for new drugs
XIAO Guinan, SUN Qingping, SHENG Yingmei
Guangdong Institute for Drug Control in Guangdong Province, Guangzhou 510180, China
[Abstract] Objective: To establish the method of bacterial endotoxin test for new drugs. Methods: Tachepleus amebocyte lysate test was applied to detect bacterial endotoxins in new drugs. Results: How to establish the method of bacterial endotoxin test for new drugs was introced, and especially focused on how to define the limit of bacterial endotoxins and carry out the interference test. Conclusion: Bacterial endotoxin test provides useful bases in quality control and emergency test for new drugs.
[Key words] New drugs; Bacterial endotoxin test; Interference test
新葯以細菌內毒素檢查方法代替既往的家兔熱原檢查法是一個趨勢，在葯害事件的應急處理中有一定的應用價值，這也符合國際上對動物實驗的「3R」原則（優化、減少、替代）的要求。現行細菌內毒素檢查方法是1968年美國科學家Levin和Bang所建立的鱟試驗法[1]。從開展內毒素檢查的現狀來看，部分單位未能參照《中國葯典》2011年版二部的要求進行實驗和設計，本文著重介紹在建立新葯細菌內毒素檢查法中容易出現問題的細菌內毒素限值的確定及干擾試驗這兩個環節，力圖為新葯的質量控制以及應急檢驗提供有益的參考依據。
1 新葯細菌內毒素檢查限值的確認
1.1 細菌內毒素檢查限值的計算公式
新葯細菌內毒素檢查限值（L）的確定是整個方法學建立的前提和基礎，現在一般按照《中國葯典》2011版二部附錄XI E進行確定[2]。計算公式為L=K/M，K為人每千克體重每小時最大可接受的內毒素劑量，以EU/（kg?h）表示，非放射性注射劑K=5 EU/（kg?h），放射性注射劑K=2.5 EU/（kg?h），鞘內用注射劑K=0.2 EU/（kg?h）；M為人用每千克體重每小時的最大供試品劑量，成人體重按60 kg計算，體表面積為1.62 m2。部分抗腫瘤葯物及抗生素的使用劑量以體表面積描述時，可將每平方米體表面積劑量乘以0.027，即可轉換為每千克體重劑量。
1.2 細菌內毒素檢查限值的確認程序
首先根據所研究的新葯品種說明書，通過查閱最新版《臨床用葯須知》等相關權威資料，得到人用每千克體重每小時的最大供試品劑量（M值）並求出L值，將所求得的L值與相關的質量標准（《美國葯典》、《英國葯典》、《日本葯局方》、《歐洲葯典》）以及國家食品葯品監督管理局頒布的轉正標准或注冊標准散件中關於該品種的細菌內毒素限值進行參考對比。
還有一種方法是參考該品種的熱原檢查劑量（可視為M值），因為熱原劑量的設置一般為成人臨床用量的1～3倍，與常用的安全系數3～10倍較為接近，這種參考熱原檢查劑量的做法在以前頗為盛行，現在已逐漸少用。
1.3 細菌內毒素限值計算的常見誤區
1.3.1 將成人日均用量誤作最大用量 大多數情況下，說明書或資料往往只提供了某葯的單次或每日用量，實踐中不少人往往將單次用量誤作最大用量進行限值計算，所得限值明顯偏寬。眾所周知，除極少數情況（急性、重症患者用葯）下的單次用量可作為最大用量外，多數情況的日常用量換算成最大用量，還需考慮一定的安全系數（一般取3～10倍）。
1.3.2 誤將每日總用量當成每次最大用量 只根據說明書或資料提供的某葯的每日總用量，未考慮該葯品總量的靜脈滴注時間已經遠不止1 h，這樣求得的限值難於真實反映實際限值，因為M值是反映人用每千克體重每小時能接受的最大供試品劑量，而非全日的總用量。
1.3.3 對於大輸液的細菌內毒素限值確定過於按部就班 沒有考慮大輸液的特殊要求，大輸液的主葯成分只佔其中很少的一部分，實際多為葡萄糖注射液或生理鹽水注射液，如果按主葯成分計算細菌內毒素限值的話，容易偏寬，因而如無特殊情況一般將熱原檢查劑量10 ml/kg視為最大臨床用量，將大輸液細菌內毒素限值定為0.5 EU/ml。
1.3.4 忽視滴注時帶入的外源性細菌內毒素 某些新葯在臨床使用時是溶於大輸液進行滴注的。假設某抗生素葯品的規格是1 g/支，其使用方法是溶於5%葡萄糖注射液250 ml，在1 h內滴注完畢。可參照下述方法計算該抗生素細菌內毒素限值，此時K=5 EU/（kg?h），因而60 kg的成人每小時體內可以接受細菌內毒素的最大量為300 EU，而在1 h內250 ml的5%葡萄糖注射液最大可帶來125 EU的細菌內毒素，1 g的該葯最多隻能帶入175 EU（125～300 EU）的細菌內毒素，因而該抗生素其細菌內毒素限值可定為0.175 EU/mg。如果按常規計算的話，求得限值為0.300 EU/mg。
1.3.5 沒有考慮到主葯外的其他成分 在細菌內毒素限值的確定過程中，特別是原料，要注意扣除主葯外的其他成分（如金屬離子：頭孢噻肟鈉中的鈉，西司他丁鈉中的鈉），因為標准一般規定為每毫克中頭孢噻肟或西司他丁所含的細菌內毒素量不得過多少EU，而製成的原料往往是含鈉等其他成分的。
2 鱟試劑靈敏度復核試驗
2.1 前期准備工作
試驗所用的器皿需經處理，以去除可能存在的外源性內毒素。若使用塑料器械，如微孔板和與微量加樣器配套的吸頭等，應選用標明無內毒素並且對試驗無干擾的器械。耐熱器皿常用乾熱滅菌法（250℃，30 min以上）去除，部分物品也可採用其他確證不幹擾細菌內毒素檢查的適宜方法（如強酸強鹼浸泡法），但需經過確證不幹擾鱟試驗檢查。
2.2 靈敏度復核試驗
當使用新批號的鱟試劑或試驗條件發生了任何可能影響檢驗結果的改變時，應進行鱟試劑靈敏度復核試驗。需要注意的是，當實測靈敏度λc在0.5λ～2.0λ（包括0.5λ～2.0λ，λ為鱟試劑靈敏度的標示值）時，方可用於細菌內毒素檢查，並以標示靈敏度λ為該批鱟試劑的靈敏度，日常檢驗中部分檢驗者誤將實測的靈敏度作為批鱟試劑的靈敏度來進行常規檢查或干擾試驗。
3 鱟試驗檢查的干擾試驗
3.1 最大有效稀釋倍數（MVD）的確認
MVD是指在試驗中供試品溶液被允許達到稀釋的最大倍數，計算公式為MVD=C?L/λ，式中L為供試品的內毒素限值，λ為鱟試劑的標示靈敏度（EU/ml），或是在光度測定法中所使用的標准曲線上最低的內毒素濃度；C為供試品液的濃度，當L以EU/ml表示時，則C等於1.0；如供試品為注射用無菌粉末或原料葯，則MVD取1，可計算供試品的最小有效稀釋濃度C=λ/L。
此處往往根據市售主要的鱟試劑靈敏度范圍（0.03～1.00 EU/ml）來計算干擾試驗中的有效濃度稀釋范圍。
3.2 干擾預試驗
取本品1支（原料精密稱取不低於10 mg的量），按照擬定內毒素限值，原料或注射用粉針加內毒素檢查用水溶解並稀釋至不超過MVD規定的系列濃度，注射液直接稀釋至不超過最小有效稀釋濃度的系列濃度，預試驗時一般可取一個廠家靈敏度為0.125 EU/ml或0.250 EU/ml的鱟試劑，對供試品原液及其系列稀釋液（供試品陰性對照，NPC）進行干擾檢驗，另外設立陽性對照（PC）、陰性對照（NC）、供試品陽性對照（PPC），每個濃度平行做兩管，最終得出供試品（批號：20110802）在某濃度及以下濃度對鱟試驗檢查不產生干擾作用（PPC首次出現「++」的濃度）的結論。供試液的干擾預試驗結果，見表1。
由表1可以看出，供試品在不高於20 mg/ml的濃度下不幹擾鱟試驗的檢查。
3.3 正式干擾試驗
按表2制備各系列溶液，使用的供試品溶液應為未檢驗出內毒素且不超過MVD的溶液，參照鱟試劑靈敏度復核試驗項下操作，記錄供試液的干擾情況。
只有當供試品溶液和陰性對照溶液的平行管都為陰性，且鱟試劑標示靈敏度的對照系列溶液的結果在鱟試劑靈敏度范圍內時，試驗方為有效，計算系列鱟試劑標示靈敏度的對照系列溶液和干擾試劑系列溶液的反應終點濃度的幾何平均值（Es和Et）。當Es在0.5λ～2.0λ及Et在0.5Es～2.0Es時，認為供試品在該濃度下無干擾作用。若供試品溶液在小於MVD的稀釋倍數下對試驗有干擾，應將供試品溶液進行不超過MVD的進一步稀釋，再重復干擾試驗。
當進行新葯的內毒素檢查試驗前或無內毒素檢查項的品種建立內毒素檢查法時，須進行干擾試驗；當鱟試劑、供試品的處方、生產工藝改變或試驗環境中發生了任何有可能影響試驗結果的變化時，須重新進行干擾試驗。
4 排除供試液干擾的方法[3]
4.1 樣品稀釋法
選用較高靈敏度的鱟試劑，將供試品進一步稀釋（低於最大有效稀釋倍數）後進行干擾試驗，一般情況下大部分的干擾作用均能得到有效控制。
4.2 調節pH法
測定供試液的pH值，若不在鱟試劑的有效緩沖pH范圍（6.0～8.0），可選用一定濃度的HCl或NaOH將pH值調節至6.0～8.0，但要注意應進行方法學驗證（干擾試驗），確保不幹擾鱟試驗檢查，且對內毒素檢查結果無影響。
4.3 超濾法
通過專用超濾系統，將影響內毒素檢查的葯物小分子雜質濾除，內毒素則留存於濾器內，濾器內加入相應的內毒素檢查用水進行檢查，可在幾乎不影響內毒素濃度的前提下盡量避免小分子葯物的干擾作用。
4.4 其他方法
微溫保持加熱法；使用去G因子鱟試劑或廠家提供的專用抗增液對樣品進行稀釋（此時須進行干擾試驗）。
5 常規檢查
使用最大有效稀釋倍數（MVD） 並且已經排除干擾的供試品溶液來制備溶液供試品溶液和供試品陽性對照溶液，進行細菌內毒素的常規檢測。
6 討論
建立新葯品種的細菌內毒素檢查法，首先要結合臨床最大用量確定其細菌內毒素限值，應用兩個廠家的鱟試劑對3批樣品進行鱟試驗檢查（普通凝膠法或動態濁度法定量試驗），如結果能證實樣品在不低於最大有效稀釋濃度時對細菌內毒素檢查無干擾作用，且樣品的細菌內毒素常規檢查結果為陰性，此時方可建立該品種的細菌內毒素檢查法[4-7]。
根據臨床最大用量規定及實驗結果，將所研究的新葯細菌內毒素限值定為每毫克主葯（或每毫升）中含內毒素的量應小於若干EU。經干擾實驗確證，該新葯在某個濃度或低於該濃度時（但不低於最大有效稀釋濃度MVC）對細菌內毒素檢查無干擾作用。取本品3批，按擬定的標准檢驗，其內毒素檢查結果均符合規定。
3. 細菌內毒素精密過濾器有什麼要求
精密過濾是採用成型的濾材，原液通過濾材，濾渣留在濾材壁上，濾液透回過濾材流出，從答而達到過濾的目的。成型的濾材有：濾布、濾網、濾片、燒結濾管、線繞濾芯、熔噴濾芯、微孔濾芯及多功能濾芯。因濾材的不同，過濾孔徑也不相同。保安精密過濾是介於砂濾（粗濾）與超濾之間的一種過濾，過濾孔徑一般在0.1-120μm范圍。同種形式的濾材，按外形尺寸又分為不同的規格。
過濾細菌內毒素對精密過濾器的要求主要在濾芯精度上，常規精密過濾器精度在5μm，細菌內毒素精密過濾器要求精度需要小於5μm，因此需要選擇對應精度的濾芯，具體濾芯精度和濾芯材質的選擇需要參考水質參數。
4. 內毒素去除方法
注射用水內毒素超標的因素有三個：1、注射用水管道受污染：2、注射用水管道不密封：3、出水口污染未清洗干凈
5. 細菌內毒素檢測中體液有什麼干擾物質 除去體液中干擾物質的方法
人體血液的組成十分復雜。其中在樣品血漿中，將有形物質（紅細胞、白細胞等）去除後剩餘組分中的成分也是比較復雜的，而這些成分往往對內毒素的測定存在很強的干擾作用，因此在進行血漿中的細菌內毒素檢測前，必須將血漿樣品中這些干擾物質去除，方可進行檢測。目前，人體血漿的主要干擾物質有：a2纖維蛋白溶酶抑制劑，抗凝血酶Ⅲ，a1抗凝血蛋白酶，抗凝因子Xa，纖維蛋白酶胰蛋白酶。
除去干擾物質的方法主要有：
主要包括有：表面活性劑處理法、凝膠過濾法、新高氯酸法（New PCA）等。廈門市鱟試劑實驗廠有限公司的內毒素檢測鱟試劑盒（動態濁度法）配套獨特的內毒素檢品處理液。用這種處理液對體液進行稀釋加熱處理後能有效消除各種體液對內毒素的干擾，使用非常簡便。 （廈門--鱟試劑）
6. 細菌內毒素工作標准品用細菌內毒素檢測用水溶解怎麼操作
用於試驗中鱟試劑靈敏度復 核、干擾試驗及各種陽性對照。 150601-200968 150EU/支 150601-201072 120EU/支 細菌內毒素檢查用水
7. 細菌內毒素檢測方法動態濁度法和凝膠法結果不一致
您好，同一樣品採用動態濁度法檢測和凝膠法檢測內毒素結果相差很多的原因主要有：
1.動態濁度法比凝膠法靈敏很多，比如某個樣品中內毒素限值為0.40EU，使用動態濁度法檢測結果在0.35EU/ml左右，而使用凝膠法，當使用0.5EU的鱟試劑時，有可能檢測結果會呈陽性!
2.動態濁度法和凝膠法實驗過程中使用的內毒素標准品存在差別，由於判斷實驗結果的質控品的不一樣，會使實驗結果較大的誤差！
根據要點的規定，當定量法和凝膠法的實驗結果出現偏差時，以凝膠法的實驗結果為准！
廈門市鱟試劑實驗廠有限公司為您提供全方位的內毒素檢測服務！
廈門市海滄新陽工業區新嘉路131號（361022）
銷售服務：0592-2085561，[email protected]
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8. 細菌內毒素引入途經及消除方法
細菌內毒素主要來自於細菌污染。也有可能是采購的原料被污染後滅菌處理殘留。
消除的方法一般是高溫處理，玻璃器皿250度或者180度處理。如果是樣品珍貴的，也可以用去除內毒素的凝膠顆粒吸附。
9. 注射用水細菌內毒素水循環能去除嗎
你可以參考一下！
這位朋友：
鱟試劑，特別是復溶後的鱟試劑對溫度是很敏感的，平時實驗操作時環境溫度，應控制在20℃以下，因此，同樣無論是注射用水還是做其他的葯品細菌內毒素檢查時，葯液溫度都應控制在20℃以下。你可從中國葯典附錄「細菌內毒素檢查法」或《中國葯典操作規范》內找到答案。
願我的答案對你有所幫助！
10. 細菌內毒素精密過濾器有什麼技術要求
這個是叫做除菌過濾器主要是採用大比表面積，過濾精度為0.22μm以上的微濾濾芯，主要用於防止空氣中的雜質和有害細菌、微生物等進入罐體、生產線、無菌室等，引起水質、產品和無菌室環境的變化，滿足食品、生化、飲料、啤酒、醫葯、電子等行業的工藝需要。
除菌過濾器也叫呼吸器，主要用於防止空氣中的雜質和有害細菌、微生物等進入罐體、引起變化，目前廣泛應用於食品、生化、醫葯、電子等行業。一般情況下，除菌過濾器的使用時間不應過長，濾器和濾膜在使用前應進行潔凈處理，並用高壓蒸汽進行滅菌或在線滅菌。過濾器的清潔、乾燥和貯存應能有效地控制微生物污染水平及細菌內毒素的污染水平。很多醫葯企業基本都能做到每個品種有專用的濾芯，分開存放，並採用各種方法進行標示，這樣相對來說比較安全放心也易於查詢使用。為了確保除菌過濾器的過濾效果，需要對過濾器的使用前和使用後進行完整性測試，以確保其過濾有效。目前主要的完整性測試方法有前進流、氣泡點和水侵入等測試方法，而起泡點試驗是目前主要的完整性測試方法。不同的葯液會有不同的性質，同一個過濾器使用不同介質潤濕得出的起泡點數據可能會有不同程度的區別。
台灣DPC除菌過濾器廣泛應用於飲用水處理、建築循環水處理、工業循環水處理、污水處理、采礦業水處理等領域。 它將是污水處理最好的選擇！除菌過濾器將污水處理行業帶到了自動化時代，邁進了新歷史的舞台。
除菌過濾器是目前比較受到青睞的污水處理設備，它是在傳統過濾器的基礎上經過改善而得到的。除菌過濾器的濾網是經過特質的，可以終身使用，而且不易堵塞。它的出水精度非常的高，最高可達到10微米。最重要的是除菌過濾器達到了完全的自動化功能，運行時不耗費任何的能源還有人力，就能將大量的污水變成可用的再生水，是一種非常不錯的污水處理設備。除菌過濾器最受到大家的青睞，它在工作時，首先是污水進入，經過粗濾網濾掉較大顆粒的雜質，然後到達細濾網。在過濾過程中，細濾網逐漸累積水中的臟物、雜質，形成過濾雜質層，由於雜質層堆積在細濾網的內側，因此在細濾網的內、外兩側就形成了一個壓力差。由於內外壓力差不等，所以就開始進行污水的處理。而且可以達到反沖洗的目的，反復的清洗。這樣除菌過濾器可以達到完全的自動化，節省了大量的物力人力和財力，是企業很好的選擇。
除菌過濾器是目前比較受到大家追捧的一種污水處理產品，他的出現能夠幫助我國更加有效的運用水資源。除菌過濾器的問世，拉近了夢想與現實的距離，拉近了經濟發展與水資源和諧發展的福音。水資源安全整體的發展在自清洗過濾器的推動下也明顯的得到了更為有效的提升和加快，並且也更進一步的扭轉了其原本發展的諸多束縛。大量的污水經過除菌過濾器後變成了可用的再生水，為不少的領域提供了充足的水源，也節約了大量的現有水資源，保護了水環境不再受到污水的傷害。