① 高效液相色譜柱柱頭篩板怎麼拆洗,感覺篩板是和柱子一體的,弄不下來
這個是不建議拆洗的,容易把柱頭的硅膠破壞,除非是快報廢的柱子,死馬當活馬醫
② 什麼情況下需要更換液相色譜柱有什麼現象液相色譜保護柱的使用壽命是多少啊
轉載:《分析測試網路網》
色譜柱預防性保護與柱壽命的延長
通常,一根色譜柱在分析數千個樣品之後性能仍然保持良好,但也有的柱僅分析不多的樣品後幾乎就報廢了。影響柱壽命和其它問題的因素很多,而有些因素是操作者很難控制的,如果被分析的樣品(如分析生物樣品),怎麼凈化樣品也是「臟」的,好於色譜柱的影響是非常大的。然而採取下列措施後,在多數情況下總能夠人為地減少柱上故障,達到延長柱壽命的目的。
1.加流路過濾器和保護柱
流路過濾器緊靠進樣閥後面,位於分析柱前。0.5μm燒結不銹鋼片夾在死體積很小的套子中,擋住來源於樣品和進樣閥墊圈的微粒入柱。因為每個樣品都過濾既費事又帶來誤差,樣品量少過濾更困難,因此流路上裝過濾器是比較省事的辦法。也可以在流路加上保護柱,放在流路過濾器和分析柱之間,或者代替流路過濾器。保護柱的使命是收集阻塞柱進口的來自樣品的化學「垃圾」。這程垃圾最終隱藏低柱效能。保護柱應該是小體積,用分析柱的同種填料填裝。保護柱使用得當,對分離無影響,好像未裝保護柱一樣。有些廠商的商品將保護柱都是用短柱、不超過3cm長,內徑2~3mm,用較大粒度的填粒(15~20μm)干法填裝,會使分析柱的效能有所降低。
2.避免高壓沖擊
一般色譜柱都能經得起高壓,但經不起突然變化的高壓沖擊。引起高壓突然沖擊,主要是因樣品閥的緩慢轉動、泵起動快,柱切換操作等。等面已討論過,轉動六通進樣閥時從泵到柱的液流會瞬時切斷。在閥的泵側壓力升高,在閥的柱側壓力降低(變化超過20%)。閥轉到底後壓力突然沖擊一下恢復正常,手動進樣閥的變化不大,自動進樣閥比較慢,可能造成壓力沖擊,可用氦氣代替空氣驅動進樣閥。因氨壓縮系數小。另外泵起動不應過快,可分步操作。如用3ml/min流速,先從1mL/min到2mL/min,然後再3ml/min,每個間隔應大於20s。
柱切換技術的應用也很廣泛,切換過程中在色譜柱的入口處壓力在零到很大數字之間變化,會很快使柱報廢。
3.分離條件
多數色譜柱有很寬的試驗條件范圍,但具體應用又受到限制,主要是pH值、柱溫和流動相的選擇。
硅膠為基質的鍵合相要求pH在2.5~7之間,極端pH的流動相能「溶解」硅膠,使鍵合相流失。結果非鹼性組分峰變寬。如果一定要用高或低pH的流動相,可加預柱(飽和柱)。預柱裝在泵和進樣閥之間,用分析柱相同的填料填裝,或者用普通硅膠。硅膠飽和了流動相。減少了分析柱填料的損失。預柱不要求柱效高,用價格低的一般硅膠疏鬆地填裝,按期檢查硅膠的溶解情況。用預柱也有不利的影響。即新流動相難以平衡,保留時間不穩定或穩定慢。使用了預柱一定要加流路過濾器,以防止硅膠微粒引起的麻煩。
以硅膠為基質的柱和陰離子交換柱超過60℃後,會增加對流動相中化學物質的吸附。在高溫下用小顆粒柱引起柱床塌陷,降低柱效,改變峰形。在4℃以上使用3μm柱,70℃以上使用5μm柱,會使N值降低50%。
有些流動相中的溶劑不能用於某些柱,如小顆粒的聚苯乙烯填料不能用於非水的排阻色譜。另一方面,有些柱與某些溶劑(如四氫呋喃)一旦達到平衡,不要隨意改用其它溶劑。有關這些特殊填料,可以參見有關資料。
水溶性流動相會引起微生物生長而造成阻塞柱。色譜柱應存放在純有機溶劑或加了50%有機溶劑的水中。凝膠柱可存放在水溶性緩沖液中,同時加0.01%疊氮鈉以防止微生物的生長。
4.凈化樣品
用溶劑溶解的樣品,多數組分在一定的時間內能完全從柱中流出來,不會造成危害。
有些樣品可能含有微粒物質,樣品中的某種組分(如蛋白質)在柱頭上沉積下來,組分在固定相上保留很強,溶劑帶走柱填料,等等,這些都會造成柱效能下降或柱壽命的影響,有必要採取措施防止柱變壞。
如在光線照射下觀察樣品是渾濁的或帶有乳白色,進樣前必須要過濾。雖然流路上裝有過濾器和保護柱,但不能代替樣品的前處理,樣品中過多的微粒會使過濾器和保護柱超載,很快阻塞,或者微粒進入分析柱,所以在進樣前必須過濾樣品。
若懷疑樣品與流動相混合有沉澱而對色譜柱有阻塞,應先試驗一下,看樣品溶液加入流動相中有無變渾或乳白色出現。如果進樣後壓力突然增加而後又慢慢減小,表明樣品中有微粒或發生沉澱。如有沉澱要設法改變分離條件,包括換樣品溶劑和流動相;或處理樣品去掉不溶物質。應盡量用小體積的樣品。
有些樣品能很強地吸附在柱填料上,這樣會降低塔板數,改變樣品的保留時間、峰形,並且使得基線變差。除了用預處理的方法除去強保留物質外,還要加保護柱,定期清洗色譜柱。有時因為疏忽,用對柱有害的溶劑溶解樣品,比如用6mol/L的氫氧化鈉溶解樣品,這樣的樣品只要進50~100μL到硅膠基質柱中,硅膠就很快溶解而使柱報廢。在這種情況下,應立即中和樣品,或除去原溶劑中的有害成分。
5.用強溶劑定期沖洗柱
每次工作結束,用強溶劑沖洗柱是良好的習慣。可用甲醇、乙腈沖反相柱,沖去留在柱上的強吸附組分。用甲醇/水為流動相時也應沖洗。沖洗的程序在以下章節中介紹。
柱頭的燒結不銹鋼濾片,要求平整,死體積小,孔徑適當(2~5μm)。過濾片選擇不好會改變色譜峰形,增加阻力或起不到阻擋污染物的作用(填料很快變色)。
此外,對柱硬體的保養也不可忽視。實際操作中應注意以下幾點:
1、 接頭要配套,用同一廠商的組接件;
2 、接頭之間、柱壓帽螺母與密封卡磁之間無微粒(填料),否則收緊時容易咬死;
3 、密封卡套與柱管一次性卡緊後再也不能松動,所以拆開柱頭再上緊時要小心,不能使卡套移動,原來柱端的不銹鋼濾片和墊片的厚度和強度也不能改變(改變這些附件的性能就促使卡套移動);
4 、接頭等組接件不要擰得過緊,適當上緊後接上泵試驗,分步擰緊,直到不漏為止。還有非常重要的是柱硬體的損壞往往會造成不可挽回的損失。
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③ 液相色譜柱柱壓很高怎麼辦
你得分析一下為什麼柱壓高。
有的色譜柱出廠的時候柱壓就很高,比如同樣是迪馬的色譜柱,一代柱壓力低,二代柱壓力高。雖然填料差不多,不過二代柱是國內填充的。可能工藝上不好。或者pH耐受范圍廣的,壓力可能會高。這種情況不能改變。只能更換色譜柱。
如果是壓力不高,而是之後實驗過程導致,那也有很多可能。反正就是堵住了。因為不通所以壓力高,處理的話通開了就好。
a.氣泡堵住了。這種情況不但柱壓高,而且波動大。用純的甲醇或者乙腈低流速沖洗,色譜柱出口朝上,盡量讓氣泡從上面流出來
b.鹽堵住了。這個只能是10-15%的甲醇水沖洗,把柱溫加到35℃。看看能不能把鹽溶出來
c.強保留物質。這個幾乎沒辦法沖洗,每一根就柱子的柱前都不是填料本身的白色,而是黃色的。這個就是……樣品溶液中的強保留物質。所以樣品進入儀器前一定要過濾!拿甲醇反沖沖沖看吧,運氣好可以沖掉。
d.微生物。一般老實驗員不會犯這種錯誤,純水或者純鹽的流動相,即便過濾了,最多放置一天。再久就會長細菌了。這個你自己看看流動相的瓶子,把裡面的流動相倒出來,摸摸瓶壁如果滑滑的,那就是長細菌了。這個挺麻煩的,先用純甲醇沖洗,然後用DMF低流速沖洗,據說可以沖掉70%的細菌和細菌屍體。
目前就想到這些,再多了只能你結合試驗情況自己分析了。
④ 怎麼看液相色譜柱柱頭塌陷怎麼辦
看一下柱子是怎麼封裝的 如果柱頭能打開 找點填料填充一下塌陷 還用用一段時間 不可拆卸的那種柱子就只能換新的了
⑤ 液相過濾試劑用的那個東西叫什麼名稱
如果過濾的是流動相:
裝置是抽濾瓶、減壓抽濾瓶或者不是漏斗。使用的時候還需要一個抽濾泵。
膜的話是微孔濾膜,0.2μm或0.45μm孔徑。
過濾樣品就用注射器就可以。用的是微孔過濾頭。
⑥ 液相樣品怎麼過濾
注射器鏈注射針吸樣品,然後移去針頭套上濾頭(0.45、0.25um)棄去初濾液4、5滴取續濾液即可;
微量注射器也能套上啊,注射頭不都是統一規格的嗎?如不行用封口膜密封
⑦ 大蝦們我想請教一下,接在液相色譜柱前的慮柱和在線過濾器的有什麼區別它們的作用一樣嗎
在線過濾放在泵和進樣閥或自動進樣器之間,紙過濾流動相,不版過濾樣品。預柱或保護柱權放在分析柱前。
但也有把在線過濾放在柱前用的,比如某公司的工程師經常把在線過濾接在GPC柱或保護柱前。
在線過濾器:過濾流動相
保護柱:抵擋樣品對柱子的損傷
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⑧ 液相色譜柱應該怎樣清洗
朋友,什麼柱子規格,新柱舊柱?
正相or反相?
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⑨ 高效液相色譜純化蛋白質一般都用什麼柱子
色譜柱在HPLC中是非常關鍵的部件.一台色譜儀如果沒有色譜柱幾乎什麼工作也做不了.色譜柱是消耗品,有一定壽命,使用中也非常容易出問題.普通的正相反相色譜柱使用得當可用一、兩年.使用不得當用兩、三個月就可能損壞.所以使用中應該非常注意.
1.
在使用一根新的色譜柱之前,一定要看柱說明書,將柱子的使用壓力、pH值、溫度范圍和所用流動相種類都要弄清楚.接觸最多的是C18色譜柱,它對試劑應用的范圍非常廣,甲醇、水、乙腈、四氫呋喃、三氯甲烷、正乙烷、各種緩沖鹽都適用.但其他的色譜柱所使用的試劑就有一定的要求,有的色譜柱只能使用水,不能使用有機試劑,有的色譜柱只能使用有機試劑,而且使用指定是某一種,象GPC色譜柱.這些事情一定搞清楚,如果流動相使用不對,柱子很快會損壞.另外在更換柱子時不能讓不能使用的流動相進入柱子.
2.
柱子是有方向的,柱子上箭頭的方向就是流動相流動的方向.當換新柱子時,不要馬上就接到檢測器上使用.將柱子入口處接在進樣器的出口,柱子出口處(即箭頭的一端)先不接檢測器,按箭頭方向垂直朝上,用流動相(甲醇)以1ml/min的流速沖洗1min左右.將柱子里的小氣泡全部趕走以後再接到檢測器上,否則小氣泡跑到檢測池裡,就很難趕走,檢測器產生雜訊信號,基線也就走不好.
3.
關於壓力對色譜柱的影響:常用的正反兩相色譜柱一般耐壓在12~20MPa之間,生產廠家不同,耐壓也不同,從理論上講耐壓高的色譜柱柱效就高,但柱效高低不僅與耐壓的高低有關,還有其他因素.從使用中看,在保證柱效的同時,耐壓不要太高,儀器所顯示的壓力是流路、混合器、自動進樣器、柱壓、流通池總體的壓力,檢查柱壓力應分段檢查.壓力過高不僅柱子受不了,其他的部件也會出問題,例如自動進樣器.
4.
色譜柱對pH值是有一定的使用范圍.以硅膠為擔體的柱子一般使用范圍在2~7pH.
耐鹼性能不太好,流動相的pH大於8會使硅膠溶解.有些分析條件須用鹼性流動相,這時一定要選耐鹼性好的色譜柱,流動相的PH值過高或過低,流動相使用純水,使用高濃度磷酸鹽緩沖溶液,使用離子對試劑等,均可能造成色譜柱填料被化學破壞,這種對色譜柱固定相及鍵合相的破壞通常是不可修復的.
5.
色譜柱的使用溫度不要超過說明書上規定的溫度.一般使用溫度在60℃以下,典型硅膠基質色譜柱的使用溫度在5℃與60℃之間,高溫使用會縮短柱壽命.
6.
色譜柱使用過程中壓力的驟然波動,溫度的驟然變化或機械撞擊都會對色譜柱床產生影響.進樣過程中,進樣閥轉動太慢引起壓力波動;流速的突然增大都應在日常分析中盡量避免.一般說來,在低柱壓下操作可大大減少由壓力波動造成的柱效損失.這種問題是不可修復的
7.
色譜柱內存在緩沖鹽時,如果用高濃度甲醇或其他有機溶劑沖洗色譜柱,會導致柱內緩沖鹽結晶析出,造成柱壓明顯升高.出現該問題時,反相色譜柱首先應使用20%左右有機溶劑的水溶液低流速沖洗色譜柱,使柱內的鹽全部溶解沖出,再換成高濃度甲醇或其他有機溶劑的流動相.
8.
樣品的預處理,許多樣品,特別是生物樣品與中葯材,其組分復雜,樣品預處理是影響色譜柱壽命的關鍵.樣品經過常規的前處理後,進樣前還需進行以下步驟:a.用微孔過濾膜出除去樣品中的不溶顆粒,以免賭塞柱頭篩板及柱內填充床,使柱壓升高.b.將樣品用流動相溶解或用與流動相互溶的溶劑溶解.
9.
為了保護色譜柱,在色譜柱前接了一個保護柱.保護柱通常是比較短的分析柱,通過吸附可能污染分析柱的強保留雜質,達到保護色譜柱的目的.保護柱的篩板與在線過濾器一樣可以阻擋微粒雜質.為了達到最好的保護效果同時避免導致色譜結果的改變,最好選用與分析柱相同或相似的填料填充保護柱.
10.
色譜柱用合適的溶劑保存,若為C18柱推薦用甲醇保存.在日常分析中,流動相含有的不純物質和樣品中的某些組分會吸附在色譜柱中,隨著分析時間的延長,吸附量會越多,所以柱子要經常清洗,一般柱子使用一兩個星期洗一次,柱子不同清洗的流動相就不同,C18柱子常用甲醇清洗,不要用水清洗這對柱子不好,一般清洗3~4小時,另外色譜柱長時間不用,存放時要將柱子洗干凈,臟柱子放置時間越長,柱效會大大降低.存放時,柱內應充滿溶劑(甲醇或乙腈),兩端封死.
近幾年化驗室用的液相色譜儀是越來越多,所用色譜柱的種類也越來越多,問題出的也較多,值得注意的是,不論怎樣對色譜柱進行處理,一般都很難恢復到原有水平,因此,大家再使用色譜柱之前一定要看說明書,把以上幾項問題搞清楚後再使用,盡量避免發生如上問題.
⑩ 高效液相用的新過濾頭可以直接用嗎
你指復的是過濾流動相的過濾頭?制
還是過濾樣品的過濾頭?
安捷倫還有一種過濾白頭。
過濾流動相的那種可以插上直接用,前提是拿來的時候是密封包裝的,別落了灰塵什麼的。然後用前需要排氣。
過濾樣品的不可以,要求規定濾掉3滴以上樣品,然後才能用。
安捷倫的過濾白頭安上就能用。