❶ OD為2的引物怎麼稀釋
1nmol用10
ul
ddh2o稀釋,飢備濃度為100
um,此濃度為儲藏濃度,工作濃度要稀釋磨肢到10
um.
訂引物時候,填10
nmol就可以爛游毀了,不用管
od
❷ 我現在想要將引物加水稀釋,OD:2.0,nmol/OD=5.17,MW=5784.83,請問我該如何加水稀釋
以下使用方法希望對你有用:
❸ 2OD的引物怎麼稀釋
生工的報判檔猜告單上應該有一個加水量,不過那個是每OD的,你對應的加上2倍的無菌水就蠢困可以了,然後是掘型100pm的母液,根據實驗要求進行進一步的稀釋。
❹ 菌液體培養基od值稀釋
OD反應了細菌的濃含羨度.
接種後隨著細菌的生長,培養基越肆灶來越渾濁,OD不斷上升.
至於調節濃度,就是加入TE稀釋啊,可以用細胞計數板計數.
不過我嚴重懷疑這個步驟裂老扮其實只需要憑經驗去稀釋,真的去數不是麻煩死,而且誰那麼准一定能調到每毫升5×108個細菌啊?顯然估計一下就行了.
❺ 微生物檢測手段及注意事項
1. 微生物計量法
1.1 體積測量法
又稱測菌絲濃度法,通過測定一定體積培養液中所含菌絲的量來反映微生物的生長狀況。方法是,取一定量肆團的待測培養液(如10 mL)放在有刻度的離心管中,設定一定的離心時間(如5 min)和轉速(如5000 rpm),離心後,倒出上清夜,測出上清夜體積為v,則菌絲濃度為(10-v)/10。菌絲濃度測定法是大規模工業發酵生產上微生物生長的一個重要監測指標。這種方法比較粗放,簡便,快速,但需要設定一致的處理條件,否則偏差很大,由於離心沉澱物中夾雜有一些固體營養物,結果會有一定偏差。
1.2稱 乾重法
可用離心或過濾法測定。一般乾重為濕重的10~20%。在離心法中,將一定體積待測培養液倒入離心管中,設定一定的離心時間和轉速,進行離心,並用清水離心洗滌1~5次,進行乾燥。乾燥可用烘箱在105 ℃或100 ℃下烘乾,或採用紅外線烘乾,也可在80 ℃或40 ℃下真空乾燥,乾燥後稱重。如用過濾法,絲狀真菌可用濾紙過濾,細菌可用醋酸纖維膜等濾膜過濾,過濾後用少量水洗滌,在40 ℃下進行真空乾燥。稱乾重發法較為煩瑣,通常獲取的微生物產品為菌體時,常採用這種方法,如活性乾酵母(Activity Dry Yeast, ADY),一些以微生物菌體為活性物質的飼料和肥料。
1.3 比濁法
微生物的生長引起培養物混濁度的增高。通過紫外分光光度計測定一定波長下的螞讓吸光值,判斷微生物的生長狀況。對某一培養物內的菌體生長作定時跟蹤時,可採用一種特製的有側臂的三角燒瓶。將側臂插入光電比色計的比色座孔中,即可隨時測定其生長情況,而不必取菌液。該法主要用於發酵工業菌體生長監測。如使用UNICO公司的紫外-可見分光光度計,在波長600 nm處用比色管定時測定發酵液的吸光光度值OD600,以此監控E.coli的生長及誘導時間。
1.4 菌絲長度測量法
對於絲狀真菌和一些放線菌,可以在培養基上測定一定時間內菌絲生長的長度,或是利用一隻一端開口並帶有刻度的細玻璃管,到入合適的培養基,卧放,在開口的一端接種微生物,一段時間後記錄其菌絲生長長度,藉此衡量絲狀微生物的生長。
2. 微生物計數法
2.1 血球計數板法
血球計數板是一種有特別結構刻度和厚度的厚玻璃片,玻片上有四條溝和兩條嵴,中央有一短橫溝和兩個平台,兩嵴的表比兩平台的表面高0.1 mm,每個平台上刻有不同規格的格網,中央0.1 mm2面積上刻有400個小方格。通過油鏡觀察,統計一定大格內微生物的數量,即可算出1 mL菌液中所含的菌體數。這種方法簡便,直觀,快捷,但只適宜於單細胞狀態的微生物或絲狀微生物所產生的孢悶雹局子進行計數,並且所得結果是包括死細胞在內的總菌數。
2.2 染色計數法
為了彌補一些微生物在油鏡下不易觀察計數,而直接用血球計數板法又無法區分死細胞和活細胞的不足,人們發明了染色計數法。藉助不同的染料對菌體進行適當的染色,可以更方便的在顯微鏡下進行活菌計數。如酵母活細胞計數可用美藍染色液,染色後在顯微鏡下觀察,活細胞為無色,而死細胞為藍色。
2.3 比例計數法
將已知顆粒(如黴菌孢子或紅細胞)濃度的液體與一待測細胞濃度的菌液按一定比例均勻混合,在顯微鏡視野中數出各自的數目,即可得未知菌液的細胞濃度。這種計數方法比較粗放。並且需要配製已知顆粒濃度的懸液做標准。
2.4 液體稀釋法
對未知菌樣做連續十倍系列稀釋,根據估計數,從最適宜的三個連續的10倍稀釋液中各取5 mL試樣,接種1 mL到3組共15隻裝培養液的試管中,經培養後記錄每個稀釋度出現生長的試管數,然後查最大或然數表MPN(Most Probable Number)得出菌樣的含菌數,根據樣品稀釋倍數計算出活菌含量。該法常用於食品中微生物的檢測,例如飲用水和牛奶的微生物限量檢查。
2.5 平板菌落計數法
這是一種最常用的活菌計數法。將待測菌液進行梯度稀釋,取一定體積的稀釋菌液與合適的固體培養基在凝固前均勻混合,或將菌液塗布於已凝固的固體培養基平板上。保溫培養後,用平板上出現的菌落數乘以菌液稀釋度,即可算出原菌液的含菌數。一般以直徑9 cm的平板上出現50~500個菌落為宜。但方法比較麻煩,操作者需有熟練的技術。平板菌落計數法不僅可以得出菌液中活菌的含菌數,而且同時將菌液中的'細菌進行了一次分離培養,獲得了單克隆。
2.6 試劑紙
在平板計數法的基礎上,發展了小型商品化產品以供快速計數用。形式有小型厚濾紙片,瓊脂片等。在濾紙和瓊脂片中吸有合適的培養基,其中加入活性指示劑2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑(TTC,無色)待蘸取測試菌液後置密封包裝袋中培養。短期培養後在濾紙上出現一定密度的玫瑰色微小菌落與標准紙色板上圖譜比較即可估算出樣品的含菌量。試劑紙法計數快捷准確,相比而言避免了平板計數法的人為操作誤差。
2.7 膜過濾法
用特殊的濾膜過濾一定體積的含菌樣品,經丫叮橙染色,在紫外顯微鏡下觀察細胞的熒光,活細胞會發橙色熒光,而死細胞則發綠色熒光。
3. 間接測定法
微生物的生長伴隨著一系列生理指標發生變化,例如酸鹼度,發酵液中的含氮量,含糖量,產氣量等,與生長量相平行的生理指標很多,它們可作為生長測定的相對值。因此可利用生理指標等間接參數來測定生物量。
3.1 測定含氮量
大多數細菌的含氮量為乾重的12.5%,酵母為7.5%,黴菌為6.0%。根據含氮量×6.25,即可測定粗蛋白的含量。含氮量的測定方法有很多,如用硫酸,過氯酸,碘酸,磷酸等消化法和Dumas測N2氣法。Dumas測N2氣法是將樣品與CuO混合,在CO2氣流中加熱後產生氮氣,收集在呼吸計中,用KOH吸去CO2後即可測出N2的量。
3.2 測定含碳量
將少量(乾重0.2~2.0 mg)生物材料混入1 mL水或無機緩沖液中,用2 mL 2%的K2Cr2O7溶液在100 ℃下加熱30分鍾後冷卻。加水稀釋至5 mL,在580 nm的波長下讀取吸光光度值,即可推算出生長量。需用試劑做空白對照,用標准樣品做標准曲線。
3.3還原糖測定法
還原糖通常是指單糖或寡糖,可以被微生物直接利用,通過還原糖的測定可間接反映微生物的生長狀況,常用於大規模工業發酵生產上微生物生長的常規監測。方法是,離心發酵液,取上清液,加入斐林試劑,沸水浴煮沸3分鍾,取出加少許鹽酸酸化,加入Na2S2O3臨近終點時加入澱粉溶液,繼續加Na2S2O3至終點,查表讀出還原糖的含量。
3.4 氨基氮的測定
離心發酵液,取上清液,加入甲基紅和鹽酸作指示劑,加入0.02 mol/L的NaOH調色至顏色剛剛褪去,加入底物18%的中性甲醛,反應數刻,加入0.02 mol/L的使之變色,根據NaOH的用量折算出氨基氮的含量。根據培養液中氨基氮的含量,可間接反映微生物的生長狀況。
3.5 其他生理物質的測定
P,DNA,RNA,ATP,NAM(乙醯胞壁酸)等含量以及產酸,產氣,產CO2(用標記葡萄糖做基質),耗氧,黏度,產熱等指標,都可用於生長量的測定。也可以根據反應前後的基質濃度變化,最終產氣量,微生物活性三方面的測定反映微生物的生長。如在BMP-2的發酵生產上,隨時監測溶氧量的變化和酸鹼度的變化,判斷細菌的長勢。
4. 商業化快速微生物檢測法
微生物的檢測,其發展方向是快速,准確,簡便,自動化,當前很多生物製品公司利用傳統微生物檢測原理,結合不同的檢測方法,設計了形式各異的微生物檢測儀器設備,正逐步廣泛應用於醫學微生物檢測和科學研究領域。例如:
4.1 試劑盒,培養基等手段
抗干擾培養基和微生物數量快速檢測技術結合解決了傳統微生物檢測手段不能解決的難題,為建立一套完整的抗干擾微生物檢測系統奠定了堅實的基礎。如:抗干擾微生物培養基,新型生化鑒定管,微生物計數卡,環境質量檢測試劑盒等,可方便的用於多項檢測。
4.2 藉助新型先進儀器
BACTOMETER全自動各類總菌數及快速細菌檢測系統可以數小時內獲得監測結果,樣本顏色及光學特徵都不影響讀數,對酵母和黴菌檢測同樣高度敏感原理是利用電阻抗法(Impedance Technology)將待測樣本與培養基置於反應試劑盒內,底部有一對不銹鋼電極,測定因微生物生長而產生阻抗改變。如微生物生長時可將培養基中的大分子營養物經代謝轉變為活躍小分子,電阻抗法可測試這種微弱變化,從而比傳統平板法更快速監測微生物的存在及數量。測定項目包括總生菌數,酵母菌,大腸桿菌群,黴菌,乳酸菌,嗜熱菌,革蘭氏陰性菌,金黃色葡萄球菌等。
微生物OD值是反映菌體生長狀態的一個指標,OD是Optical Density(光密度)的縮寫,表示被檢測物吸收掉的光密度。通常400~700 nm 都是微生物測定的范圍,需要紫外分光光度計測最大吸收波長。用得最多的是:505 nm測菌絲菌體、560 nm測酵母、600 nm測細菌。用測OD方法畫微生物生長曲線時,同一株菌的起始培養濃度可以准備多管(根據檢測點的需要,如需檢測10個點,就准備10管),然後每個點取一管出來測OD值就行了。
一般測菌體密度的OD的波長范圍是580 nm-660 nm,如枯草芽孢桿菌用600 nm,已經屬於可見光區(200 nm~400 nm為紫外光區,400 nm~800 nm為可見光區)。空白如用水做,需要離心洗滌菌體;空白如用不接種的培養基做就不需要洗滌,但是不接種的培養基要和接種的同時培養以求條件一致,最後注意一般OD值在控制在0.1~0.4最好,在這個區內的值就可靠,如果OD大於1.0,一般要稀釋後再測,因為OD太大,分光光度計的靈敏度就會顯著降低。
一般都測吸光值,而且最好是整個實驗過程中,保持發酵液或菌體的稀釋倍數一致,吸光值與稀釋倍數不一定成正比,可保證整個實驗點有可比性。且取值的時候要連續讀數,重復3次的數最好。
另,用分光光度計測微生物的OD值為什麼要把波長設為600 nm
這個波長其實只是針對濁度,而分光光度計在600 nm處對濁度的反應比較靈敏。測吸收峰的實際意義並不大,比如LB搖瓶培養過夜的大腸桿菌,其實在400多納米處的吸收最大,但那很可能是培養液的吸收峰。
❻ OD為2的引物怎麼稀釋
OD為2的引物怎麼稀釋
在引物單的正面上應數晌該寫了: to make 100uM solution ,add xxxul ddH2O,是不昌鏈是?
我們平時用的是10uM的,所以你把xxx乘以10加進去就好,別忘了薯迅鋒引物是粉末結晶,在加入雙蒸水稀釋前要先13000rpm離心3-5分鍾~
❼ 引物合成時nmol為1,OD為0.2,怎麼稀釋
稀釋引物要達到的濃度(pmol/ul)=母液濃度(pmol/ul)×汲取母液的體積(ul)÷(汲取母液的體積(ul)+加水量(ul))
引物一般來的時候是乾粉.這種狀態能儲存最長的時間.
如果用的話要先離心,5分鍾(12000轉).然後用它上面寫的nmol*1000/你的終濃度=你要加的水量
溶解液有TE和dd水.TE其實就是tris鹽酸和EDTA的混合液.理論上用TE儲存好,不容易降解.
一般配的時候要先配成儲存液(濃度是100umol/L),在配成使用液(濃度是10umol/L).這樣的好處是引物不容易降解.
引物忌諱反復凍溶,大家要注意.如果你都配成了使用液就應該分裝.使用液放在4度(2/3個月沒問題的),儲存液放在-20度.
引物稀釋很簡單,一般裝引物的管子上都標有引物的量如3.6nmol/OD,可直接往管中加360ul的無菌雙蒸水溶解就可以了,在加水之前要先高速離心管子幾分鍾,加水後要高速漩渦混勻幾分鍾就可以用了,此時的儲存濃度是10umol/L,如果體系是20ul一般加1ul引物(引物辯鎮的使用濃度最大為10pmol/ul,但一般在0.5-5pmol/ul即可 ).
引物的濃度設定,不同的人有不同習慣,有的喜歡稀釋成100uM的,有的習慣於稀釋成20uM,也有的稀釋成10uM的.建議稀釋成20uM的濃度,因為如果你稀釋成100uM,當你所做PCR的體系不是很大的時候,體積太小了引物就不好加,容易產生誤差;如果是稀釋成10uM,引物濃度過低,容易降解.不過不管你稀釋成多大濃度的,最好分裝儲存,免得反復凍融容易降解.
OD為2的引物怎麼稀釋
在引物單的正面上應該寫了: to make 100uM solution ,add xxxul ddH2O,是不是?
我們平時用的是10uM的,所以你把xxx乘以10加進去就好,別忘了引物是粉末結晶,在加入雙蒸水稀釋前要先13000rpm離心3-5分鍾~
取一份需要稀釋的母液 加入九十九份稀釋劑就可以了
做PCR嗎?看看管子上有多少nmol,然後加對應的ddH20.比如4nmol就加400μl的ddH2O,那麼終濃度就是100p
一般用OD值乘10,單位是ul的純水或TE溶解成100μM(忘了,也可能是nM)的液體。當然,開蓋前要短暫離心,溶解後最好分裝下。
你的引物合成報告單上肯定有每OD含有的DNA的量的。一般來說,如果你定的引物是1OD的話,直接加入每OD×10倍的水,就可以得到100uM的DNA溶液。
舉個例子,比如你的引物是5nmol/OD的,那麼加入50μL的水,可以得到100uM的DNA溶液。
如果需要設計定量PCR引物,可以在微信小程拿橋式搜尋「引物庫」,提供30多個植物、動物的定量PCR引物,並且列出了每一對引物所在的外顯子,並進行了非特異性擴增的檢測(ePCR)
網頁連結
列出了引物濃度計算等
s: sense 正向引物
a: anti-sense 反向引物
簡單的演演算法。比如每管的含量是10nmol,就加100微升TE配成儲存溶液,使用的時候再用水稀釋10倍,成為工作濃度。PCR時根據情況每50微升反應加1-2微升。
❽ od為1.47稀釋多少od為1
您好,要想將OD從1.47稀釋為1,需要進行逆向計算,即求出所需的稀釋倍明則數。根據比例關系,OD與稀釋倍數成反森散比,即OD越大,稀釋倍數越小。
首先,計算出OD的比值:1.47/1 = 1.47。這個比值表示需要將樣品中的濃度稀釋為原來的1/1.47。
然後,將比值轉化為稀釋倍數。稀釋倍數等於1除以比值,即1/1.47 = 0.68(保留兩位小數)。
因此,將OD為1.47的樣品稀釋0.68倍,即可得到OD為1的樣品。例如,取1 mL的OD為1.47的樣品,加入0.68 mL的稀釋液(如純水),混勻後即可得到OD為1的樣品。
需要注意的是,稀釋倍數只是一個估算值,具體的稀釋倍數還需此槐氏要根據實驗條件和目的進行調整。
❾ od為1.0大概要稀釋幾倍才能在顯微鏡下看
至少稀釋塵知20倍,因為人眼只能分旅行辨出0.1微米的細菌細胞,od為1.0,至少稀派鎮消釋20倍以上,才可以,以上僅供參考,希望能夠幫助到你
❿ 合成的引物該怎麼處理,用超純水還是什麼稀釋
如果短期內不用,不開管-20度保存就行,開管了,用超純水稀釋就可以,一般按照說明書稀釋就行,稀釋後-20度保存,我用的-20度保存5年還能用,不過沒評價效果降低到什麼程度