反相為什麼不用純水

A. 我的液相C18反相柱，用純乙腈沖洗的壓力由開始的3、4MPa上升到現在的20幾MPa，怎麼回事急需解救！

如果你接其他的柱子沒有問題的話，肯定是你的柱子之前的鹽沒有沖洗干凈導致鹽結晶了。鹽用有機相是沖不掉的，只能用水沖，但是像這種反相柱不能用純水沖，純水會溶解硅膠，導致相坍塌。

你可以視情況改變有機相與水的比例來沖。一般可用5%的甲醇溶液小流速沖洗。 不行就反沖吧。

希望對你有幫助，望採納！！

B. 反相與正相色譜法有什麼區別

反相還是正相，是根據流動相相對於固定相的極性而言的。 流動相極性強於固定相的，稱作反相色譜；流動相極性弱於固定相的，稱作正相色譜。

反相色譜流動相的極性強，容易帶著極性分子走，而留下非極性分子。這主要用於非極性樣品的分離。常用的高壓液相色譜都是這種，也有人喜歡說反相液相色譜，其實是一個意思，就是顯得博學一點。

正相色譜固定相極性強，容易把極性分子留下，故主要用於極性樣品的分離。如離子色譜。

實際應用好像沒有太注意正相還是反相，倒是都很注意柱子能承受什麼樣極性的物質。反相液相色譜柱不可以用強極性的純水，都是要加入至少5%的有機溶劑來弱化水的極性。 正相的離子色譜柱則堅決不可以進入有機物質。但是氣相色譜實際也是一種正相色譜，卻往往要求不可以有水進入。

C. 反相柱怎麼過

反相柱的具體操作方法如下：

1、基本操作和硅膠柱相同，濕法裝柱好些，勻漿液用甲醇。

2、流動相基本是水、有機相混合物，有機相可選擇甲醇、乙腈、乙醇等。不能使用乙酸乙酯，氯仿，正己烷等正相溶劑。一般C18填料怕鹼，多數C18填料使用pH范圍2-8。慎用三乙胺，氨水之類的改性劑。流動相可加0.1%三氟乙酸或醋酸改善拖尾。

3、梯度洗脫從高水相開始，但有機相比例不低於5%，最好不要用純水，有機相比例越高越容易洗脫。

4、洗脫結束用純有機相，如純甲醇沖洗。

5、使用後的填料不要乾燥，保存在純甲醇里，也方便下次裝柱。

硅膠基質鍵合反相柱的清洗：

再生被污染HPLC柱子的關鍵是知道污染物的性質並且能找到適當的溶劑來去除。如果污染是因為重復進樣時強保留物質的累積引起的，利用簡單的清洗步驟來除去這些污染物往往就能恢復其色譜性能。

經過等度運行後的色譜柱，有時用90～100％含量的溶劑B（雙溶劑反相系統中洗脫能力較強的溶劑，如甲醇、乙晴、四氫 呋喃等）沖洗20個柱體積可以清除污染物（色譜柱的柱體積和空柱管體積概念不同，一根4.6x250mm柱子的柱體積只有2.5ml，2.1x150mm的是0.28ml）。

如果使用的是緩沖鹽系統，不要直接切換到強溶劑，突然轉換到高濃度有機溶劑可能會使HPLC流動體系中的緩沖鹽沉澱，這樣會導致更大的問題，如柱頭篩板堵塞、連接管路堵塞、泵泄漏、活塞損傷或進樣閥轉軸失靈。應該先用無緩沖鹽流動相（即把緩沖液換成水），沖洗5～10個柱體積以後才切換到用強溶劑清洗。

有時候，強溶劑B也沒法把殘留在色譜柱上的污染物洗掉。那麼就需要用更強的溶劑或者是系列溶劑組合。如果污染物不是生物質的，一種強溶劑或幾種溶劑組合清洗基本能解決問題。柱子生產廠家的網頁和產品說明書上很多也有清洗方法推薦。

D. 那些HPLC色譜柱可以用純水

你問的應該是反相色譜抄柱，因為凝膠過濾用純水相是司空見慣的。
Agilent的Bonus系列，Aichorm的Aqua系列，都是可以做純水相的。
但你如果只是考慮梯度起點的高水相比例，那就不必了，普通的C18、C8都可以用純水相短時間沖洗，不超過10個柱體積，是沒什麼問題的。

E. 在沖洗高效液相C18反相柱的時候，為什麼不能用純水

相C18色譜柱（即憎水柱子）如果用純水沖洗後，如果立即停泵則由於其憎水（疏水專）的緣故使得柱子內屬的水因而流失掉，長時間停泵使得柱子幹掉（變干），會造成柱子內固定相填料表面鍵合的硅烷基結構塌陷（也說成是失去支撐倒下），柱子就這樣報廢了。那麼一旦沖洗柱子用了純水相怎麼辦呢？誒！不要驚慌，只要你不停泵，上述情況不會立即發生，我們只要保證最後用有機相沖洗柱子，停泵後使柱子內留存的是有機相，就無大礙，

F. 何為正相色譜及反相色譜在應用上有何特點

正相色譜基本上可以看作液固吸附色譜。其柱填料為吸附劑，表面有活性吸附點。溶劑和溶質分子可以吸附在活性中心。反相色譜是流動相極性大於固定相極性的色譜。

反相色譜的應用特點：反相介質性能穩定。分離效率高，它能分離蛋白質、肽、氨基酸、核酸、甾體、脂類、脂肪酸、碳水化合物、生物鹼等含有非極性基團的物質。

正相色譜法的應用特點：全多孔型的微球型或無定型硅膠，然而，球形硅膠更適合於有效分離。用球形硅膠填充的正相柱具有較好的滲透性、較低的操作壓力和較好的穩定性。

(6)反相為什麼不用純水擴展閱讀：

反相色譜中最常用的有機溶劑有甲醇和乙腈。此外，乙醇、四氫呋喃、異丙醇和二氧六環等常用作改性劑。有機溶劑的梯度也會影響解析度。梯度越小，解析度越大。

正相色譜的保留機理類似於吸附過程。極性樣品分子和溶劑分子吸附在柱填料表面的極性基團（吸附劑）上。對於常用於正相的氰基、氨基或二醇基固定相柱，吸附中心通常為鍵合配體或硅烷。在使用硅膠時，吸附位點為硅烷醇(一SiOH)。

G. 液相色譜裡面能只用水做流動相嗎

這個得看你的色譜柱。
一般的反相色譜柱不耐純水。如果用的話會特別費。專
我當初做過屬一個實驗，流動相是0.025mol/L的KH2PO4，色譜柱是C18柱，大概半個月換一根吧。
特殊的色譜柱可以耐受純水，但是可能分離效果不好，峰型也不一定好。

另外，純水很 容 易 長微生物。一般純凈水開瓶之後在25℃放置1天，過濾的速度就會緩慢，放三天就渾濁了。如果你的流動相是純水，那麼系統、色譜柱很容易堵塞。所以不建議使用。

H. 苯基鍵合硅膠色譜柱柱為什麼不能用純水沖洗

這個問題比較難回答。因為注意的東西比較多，比如：
首先是色譜柱的方向問題。大多數色譜柱會標明方向。這個傻子都知道，安裝的時候要順著方向安裝。不過也有一些色譜柱沒有方向，這些是雙相填料的色譜柱。第一次使用時的方向就是它的方向。不過所有的色譜柱都是，一旦開始使用，就不要轉換方向。這樣會損毀色譜柱。
第二個是柱壓問題。一般的色譜柱壓力最好不要超過20MPa，壓力過高會加速損毀色譜柱。
第三，柱溫。色譜柱溫度最好不要超過45℃。也是會加速損毀色譜柱。
還有pH值。色譜柱的pH值范圍是不同的。大多數色譜柱的pH值范圍是4-7左右。有些偏向酸性，有些偏向鹼性的，還有一些pH值廣泛的。這些按照說明書操作即可。

除此之外，色譜柱還有別的一些需要注意的事情。
首先，鍵合硅膠色譜柱分成幾種。比如C18、C8、苯基柱這些的使用方法都差不多。是反相色譜柱。它們的流動相中還有大量的水，還有無機鹽。這個時候需要注意，無機鹽是不能夠長時間留在色譜柱裡面的。色譜柱最好保存在純甲醇或者純乙腈裡面。但是無機鹽不能溶於純甲醇或者純乙腈。所以中間要過渡甲醇水或者乙腈水。
而有些色譜柱比較特殊，比如氨基柱、氰基柱。他們是可以用於正相，也可以用於反相。所以使用的時候注意區分。配置流動相的時候也避免使用大量的水相。

其他的暫時想不到。或者說你想問的問題可以提出來，大家討論討論。

I. 為什麼水是反相液相色譜中最弱的洗滌溶劑

極性 溶解度參數
水 10.2 21
甲醇 5.1 12.9
乙腈 5.8 11.8
四氫呋喃 4.0 9.1
反相色譜柱，就是固定相是非極性的，流動相是極性的。流動相極性越強（溶解參數），則洗脫能力越差。網路下原理吧，叫疏溶劑作用，不是很好理解。

J. 何謂正相色譜和反相色譜在應用上有什麼特點

反相還是正相,是根據流動相相對於固定相的極性而言的.流動相極性強於固定相的,稱作反相色譜；流動相極性弱於固定相的,稱作正相色譜.
反相色譜流動相的極性強,容易帶著極性分子走,而留下非極性分子.這主要用於非極性樣品的分離.常用的高壓液相色譜都是這種,也有人喜歡說反相液相色譜,其實是一個意思,就是顯得博學一點.
正相色譜固定相極性強,容易把極性分子留下,故主要用於極性樣品的分離.如離子色譜.
實際應用好像沒有太注意正相還是反相,倒是都很注意柱子能承受什麼樣極性的物質.反相液相色譜柱不可以用強極性的純水,都是要加入至少5%的有機溶劑來弱化水的極性.正相的離子色譜柱則堅決不可以進入有機物質.但是氣相色譜實際也是一種正相色譜,卻往往要求不可以有水進入.