純水流動相用什麼色譜柱

『壹』 高效液相色譜純化蛋白質一般都用什麼柱子

色譜柱在HPLC中是非常關鍵的部件.一台色譜儀如果沒有色譜柱幾乎什麼工作也做不了.色譜柱是消耗品,有一定壽命,使用中也非常容易出問題.普通的正相反相色譜柱使用得當可用一、兩年.使用不得當用兩、三個月就可能損壞.所以使用中應該非常注意.
1.
在使用一根新的色譜柱之前,一定要看柱說明書,將柱子的使用壓力、pH值、溫度范圍和所用流動相種類都要弄清楚.接觸最多的是C18色譜柱,它對試劑應用的范圍非常廣,甲醇、水、乙腈、四氫呋喃、三氯甲烷、正乙烷、各種緩沖鹽都適用.但其他的色譜柱所使用的試劑就有一定的要求,有的色譜柱只能使用水,不能使用有機試劑,有的色譜柱只能使用有機試劑,而且使用指定是某一種,象GPC色譜柱.這些事情一定搞清楚,如果流動相使用不對,柱子很快會損壞.另外在更換柱子時不能讓不能使用的流動相進入柱子.
2.
柱子是有方向的,柱子上箭頭的方向就是流動相流動的方向.當換新柱子時,不要馬上就接到檢測器上使用.將柱子入口處接在進樣器的出口,柱子出口處（即箭頭的一端）先不接檢測器,按箭頭方向垂直朝上,用流動相（甲醇）以1ml/min的流速沖洗1min左右.將柱子里的小氣泡全部趕走以後再接到檢測器上,否則小氣泡跑到檢測池裡,就很難趕走,檢測器產生雜訊信號,基線也就走不好.
3.
關於壓力對色譜柱的影響：常用的正反兩相色譜柱一般耐壓在12～20MPa之間,生產廠家不同,耐壓也不同,從理論上講耐壓高的色譜柱柱效就高,但柱效高低不僅與耐壓的高低有關,還有其他因素.從使用中看,在保證柱效的同時,耐壓不要太高,儀器所顯示的壓力是流路、混合器、自動進樣器、柱壓、流通池總體的壓力,檢查柱壓力應分段檢查.壓力過高不僅柱子受不了,其他的部件也會出問題,例如自動進樣器.
4.
色譜柱對pH值是有一定的使用范圍.以硅膠為擔體的柱子一般使用范圍在2～7pH.
耐鹼性能不太好,流動相的pH大於8會使硅膠溶解.有些分析條件須用鹼性流動相,這時一定要選耐鹼性好的色譜柱,流動相的PH值過高或過低,流動相使用純水,使用高濃度磷酸鹽緩沖溶液,使用離子對試劑等,均可能造成色譜柱填料被化學破壞,這種對色譜柱固定相及鍵合相的破壞通常是不可修復的.
5.
色譜柱的使用溫度不要超過說明書上規定的溫度.一般使用溫度在60℃以下,典型硅膠基質色譜柱的使用溫度在5℃與60℃之間,高溫使用會縮短柱壽命.
6.
色譜柱使用過程中壓力的驟然波動,溫度的驟然變化或機械撞擊都會對色譜柱床產生影響.進樣過程中,進樣閥轉動太慢引起壓力波動；流速的突然增大都應在日常分析中盡量避免.一般說來,在低柱壓下操作可大大減少由壓力波動造成的柱效損失.這種問題是不可修復的
7.
色譜柱內存在緩沖鹽時,如果用高濃度甲醇或其他有機溶劑沖洗色譜柱,會導致柱內緩沖鹽結晶析出,造成柱壓明顯升高.出現該問題時,反相色譜柱首先應使用20%左右有機溶劑的水溶液低流速沖洗色譜柱,使柱內的鹽全部溶解沖出,再換成高濃度甲醇或其他有機溶劑的流動相.
8.
樣品的預處理,許多樣品,特別是生物樣品與中葯材,其組分復雜,樣品預處理是影響色譜柱壽命的關鍵.樣品經過常規的前處理後,進樣前還需進行以下步驟：a.用微孔過濾膜出除去樣品中的不溶顆粒,以免賭塞柱頭篩板及柱內填充床,使柱壓升高.b.將樣品用流動相溶解或用與流動相互溶的溶劑溶解.
9.
為了保護色譜柱,在色譜柱前接了一個保護柱.保護柱通常是比較短的分析柱,通過吸附可能污染分析柱的強保留雜質,達到保護色譜柱的目的.保護柱的篩板與在線過濾器一樣可以阻擋微粒雜質.為了達到最好的保護效果同時避免導致色譜結果的改變,最好選用與分析柱相同或相似的填料填充保護柱.
10.
色譜柱用合適的溶劑保存,若為C18柱推薦用甲醇保存.在日常分析中,流動相含有的不純物質和樣品中的某些組分會吸附在色譜柱中,隨著分析時間的延長,吸附量會越多,所以柱子要經常清洗,一般柱子使用一兩個星期洗一次,柱子不同清洗的流動相就不同,C18柱子常用甲醇清洗,不要用水清洗這對柱子不好,一般清洗3～4小時,另外色譜柱長時間不用,存放時要將柱子洗干凈,臟柱子放置時間越長,柱效會大大降低.存放時,柱內應充滿溶劑（甲醇或乙腈）,兩端封死.
近幾年化驗室用的液相色譜儀是越來越多,所用色譜柱的種類也越來越多,問題出的也較多,值得注意的是,不論怎樣對色譜柱進行處理,一般都很難恢復到原有水平,因此,大家再使用色譜柱之前一定要看說明書,把以上幾項問題搞清楚後再使用,盡量避免發生如上問題.

『貳』 如何有效選擇高效液相色譜柱

使用高效液相色譜時，液體待檢測物被注入色譜柱，通過壓力在固定相中移動，由於被測物種不同物質與固定相的相互作用不同，不同的物質順序離開色譜柱，通過檢測器得到不同的峰信號，最後通過分析比對這些信號來判斷待側物所含有的物質。高效液相色譜作為一種重要的分析方法，廣泛的應用於化學和生化分析中。高效液相色譜從原理上與經典的液相色譜沒有本質的差別，它的特點是採用了高壓輸液泵、高靈敏度檢測器和高效微粒固定相，適於分析高沸點不易揮發、分子量大、不同極性的有機化合物。高效液相色譜使用粒徑更細的固定相填充色譜柱，提高色譜柱的塔板數，以高壓驅動流動相，使得經典液相色譜需要數日乃至數月完成的分離工作得以在幾個小時甚至幾十分鍾內完成。

『叄』 純水是否能通過高效液相色譜柱

看是什麼柱子，有一些做糖的柱子就是要求純水做流動相的。但一般的C8或C18柱子不行，要求最少5%有機相，以防對色譜柱傷害

『肆』 高效液相色譜儀是以什麼為流動相

甲醇或乙腈和水按比例混合，也有用純甲醇、純乙腈、純水這樣的單一成分的流動相，當然有些還會加一些微量的緩沖劑。
對應不同的色譜柱，用不同的流動相。

『伍』 液相色譜流動相用什麼ph的磷酸鹽緩沖液調ph

注意沖洗系統
注意沖洗色譜柱；
注意沖洗進樣口；
注意清洗泵頭
所有的目的都是為了不讓無極鹽析出。
因為磷酸鹽的水溶性還不錯，不過在有機物當中的溶解度就不好了。它遇到甲醇、乙腈容易析出。然後就會把液相管路堵住。
比如，你的流動相是0.05mol/L的KH2PO4-乙腈，每天早上開始使用儀器前，還有每天使用完儀器之後要用10%的乙腈水沖洗。如果流動相是甲醇，要用甲醇水。
如果系統裡面是流動相，不可以直接沖甲醇、乙腈等純有機相，需要用10%的甲醇（乙腈）水緩沖。也是防止鹽析出。
色譜柱也是一樣的意思。一般來說250mm*4.6mm的色譜柱，1.0ml/min至少沖洗30min，最好40min。然後如果需要封存的話，再用純甲醇或者純乙腈封上。
進樣口，這個其實不太重要。主要看你的溶劑。如果你使用流動相溶解的。那麼不管是手動進樣，還是自動進樣，每天實驗結束之後，打一針純水。進樣量盡量大一點。
泵頭。這個如果是老實驗員都知道，如果你的流動相裡面含有大量的鹽，尤其是有機相還是乙腈的時候，單向閥
特
別
容易堵住。如果有在線清洗泵頭的裝置的話一定記得使用。如果是手動的就沒辦法了。壞了的話就拿下來超聲吧。

『陸』 液相色譜柱merck rp18可以用100%水做流動相嗎

一般是嚴禁用純水做流動相的，對柱子傷害比較大
你可以看看你用來檢測什麼物質，然後根據對應的國標看看流動相是什麼
純水容易把填充物沖塌陷

『柒』 碳十八色譜柱能進水嗎

可以。不知道你說的「進水」是用水做流動相還是用水作為樣品，不過都是可以的。
C18是最常見的回反相色譜答柱。反相的色譜柱都是可以用水作為流動相的。
不過一般來說，至少要有10%的有機相，也就是流動相里最好加入至少10%的甲醇或者乙腈。也有色譜柱的廠家說可以耐受100%的純水相，不過如果用100%的水作為流動相，對色譜柱和的損傷有點大，會減少壽命。
樣品進水溶液就更沒有問題了，流動相那麼大體積的水溶液都可以進柱子，進樣不過幾微升的體積而已，當然也是可以的。

『捌』 液相色譜柱應該如何使用和維護

一、使用前准備

1、使用前認真閱讀色譜柱的說明書，了解色譜柱的種類，選用合適的色譜柱。

在選用色譜柱時，應充分考慮所分析樣品的極性大小、化合物的種類數量、結構特徵。根據化合物的性質，選擇合適的色譜柱和分析條件。不同類型的色譜柱使用的流動相不同，使用錯誤的流動相會降低柱效，損傷柱子。如分析極性較大的多糖類成分，應當採用親水性的反相填料。對於首次使用的色譜柱，還應按照廠家的出廠說明對色譜柱進行低流速的沖洗活化，活化後的色譜填料共價鍵鍵合力增強，柱效提高，壽命延長。

2、樣品的准備與預處理

我們的經驗是樣品純化得越干凈，色譜柱的使用壽命越長。許多樣品，尤其是生物樣品，組份非常復雜，對色譜柱的損傷性較大，不經預處理的樣品直接分析，會嚴重縮短色譜柱的使用壽命。因此，在樣品的准備時需對樣品進行預處理，包括准備溶劑的選擇、樣品過濾等。

2.1 制樣溶劑的選擇

制樣溶劑通常需要考慮樣品的溶解性、與流動相的相溶性、色譜填料的適用性等方面。這類溶劑需對樣品有較大的溶解性，而且與流動相溶，洗脫強度最好低於流動相或梯度洗脫中的起始流動相，以免影響樣品分離。目前許多手性色譜柱都禁止使用DMSO、四氫呋喃、氯仿等溶解樣品，這些溶劑會破壞固定相的結構，從而縮短色譜柱的使用壽命。此外，制樣溶劑還應與色譜系統其他部件如高壓泵、進樣器等相適用。

2.2 制樣溶劑過濾

在進樣前需過濾樣品溶液，如採用0.22μm的微孔濾膜除去不溶性微粒，以免堵塞柱頭濾片及柱內填充床。在條件允許的情況下，最好採用與色譜柱同種填料的固相萃取柱過濾進樣溶液，可以減少在色譜柱上死吸附的物質或易堵塞的大分子樣品。如生物樣品中的小極性的油脂類易於沉澱死吸附在C18反相色譜柱中，導致柱效降低、柱壓升高。採用SPE柱過濾後，可以有效減少在色譜柱中附著沉積的死吸附成分，保護色譜柱不被污染，保證其使用壽命。

2.3 其他，如溶液濃度、進樣量等

分析物的某些性質同樣能影響色譜柱的使用壽命。強酸、強鹼性物質和蛋白質類生物大分子，它們能與固定相填料作用，或生成不可逆吸附層，改變填料表面特徵，使色譜柱性能發生變化，最終導致分離失效。此外樣品的進樣量過大、超載都會影響色譜柱的分離性能和使用壽命。

二、使用過程中的維護

1、流動相的使用和分析方法的選擇

流動相的純度、溶劑的選擇、適當分析方法的使用與色譜柱的性能和壽命密切相關。

1.1 流動相的選擇

所選用的流動相應與色譜柱、待分析樣品相兼容，即樣品、樣品溶液和流動相是互溶的。流動相能夠溶解樣品，避免樣品沉澱析出；同時還要求流動相與樣品不發生化學反應，並且要求與色譜柱不能發生溶解或化學反應。

色譜分析應選擇色譜級的流動相。通常分析純的溶劑含有微量雜質，如有機溶劑中的聚乙二醇、無機鐵離子（Fe+）等，作為流動相大量使用後會引起色譜柱性能變化。最好是使用色譜純級或者更高純度的試劑，盡量降低溶劑中雜質帶來的損傷。

1.2 流動相過濾

使用色譜純試劑配製流動相，使用前需經0.45μm或者更小孔徑的濾膜過濾和超聲脫氣處理，減少灰塵、微生物等雜質堵塞色譜柱，尤其是水溶性流動相易引起微生物生長而造成色譜柱阻塞。流動相最好是現配現用，放置時間最好不要超過2天。

1.3 流動相的pH和緩沖鹽的選擇

極端pH的流動相會破壞填料內的共價鍵，「溶解」硅膠，使固定相流失，從而降低柱效，縮短使用壽命。以硅膠作基質的固定相一般要求pH在2.5~7范圍內使用。長期在pH>7或pH<2使用環境中，硅膠會逐漸溶解或者表面鍵合的官能團會逐漸流失。如果一定要用高或低pH的流動相，最好是選用相適應的色譜填料。

1.4 流速的控制

目前粒徑為1.8μm的UPLC的流速常設為0.3~0.5mL/min，粒徑為5μm的HPLC分析流速不大於1.5mL/min，粒徑為10μm半制備柱流速控制在3mL/min。流速過大，壓力升高，會引起色譜填料沖垮、塌陷。

2、色譜儀器的操作

每次開機使用分析儀器時，泵啟動太快，流速和柱壓的瞬間升高，柱床受到沖擊，引起紊亂，產生空隙，影響色譜柱的使用壽命。因此，在操作實驗開始時，應當將流速和柱壓逐漸增加。

3、保護柱的使用

「保護柱」是與所使用液相色譜柱相同填料的短型色譜柱，可以有效地阻攔容易損壞色譜柱的大分子和不溶性顆粒，過濾易沉著色譜柱上產生死吸附的物質，從而延長色譜柱使用壽命。

4、柱溫的控制

不同類型的色譜柱耐受的溫度各有差別。通常色譜柱溫維持在10～40℃之間，能夠充分、最優的發揮色譜柱的性能。超出色譜柱溫度范圍，尤其高於柱溫范圍，會增加對流動相中化學物質的吸附，引起色譜柱固定相結構的改變；此外，還可能引起柱床塌陷，改變峰形，降低柱效，產生不可逆性的損傷。

三、使用後的清洗與保存

柱子使用一段時間後，總會有一些雜質累積在柱內，保留值較弱的物質，一般能快速從色譜柱沖洗出來，不產生干擾；中等保留強度的雜質能被緩慢沖洗出來，但對分析產生一定的干擾；強保留雜質通常聚集在柱頭或色譜柱中，難以被洗脫，甚至可能與填料發生相互作用，形成新的偽固定相，改變色譜柱的分離性能。通常表現為柱壓升高、基線不平、色譜雙峰、分離性能降低等。這些被污染的色譜柱經清洗後，可恢復部分甚至大部分離能力。因此使用後認真、定期清洗，不僅能延長色譜柱的使用壽命，節省資源，還能大大降低分析的成本。以我們常用的硅膠基質色譜柱為例，簡要闡述常用色譜柱的清洗與再生。

1，色譜柱的清洗與再生

色譜柱的使用前後都需經較強的流動相沖洗。通常情況下，在使用硅膠、氧化鋁、極性鍵合相色譜柱時，每次用完後可先用二氯甲烷或正己烷等溶劑低流速長時間的沖洗；鍵合反相硅膠色譜柱、離子交換色譜柱和凝膠色譜柱可先用高比例的水（甲醇水混合溶劑）沖洗，再用100%甲醇沖洗。此外，色譜柱低流速的反相沖洗能夠有效除去堵塞在柱頭或篩板上的雜質，以及清洗聚集在柱頭部位的較強吸附物質。有些色譜柱在許多方法處理污染失效後，反過來使用，不僅柱壓降變小，柱效也可恢復如，延長了色譜柱的使用時間。

若上述常規清洗法無法清除污染物，則有必要採用更強的洗脫劑清洗，如反相材料的沖洗順序為：100%甲醇→100%乙腈→乙腈∶異丙醇(75∶25，V/V)→100%異丙醇。或者可以採用較低濃度的稀酸或稀鹼可將有機溶劑不能洗脫的污染物除去。例如採用0.05mol/L的硫酸和流動相溶液沖洗色譜柱，可取得良好效果；或者採用1%氫氧化銨或50%二甲基甲醯胺水溶液，對聚集在柱頭的污染物具有良好的清洗效果。

如果分析時流動相中含有緩沖液（通常為鹽溶液），沖洗時宜用水取代緩沖液與有機相混合沖洗色譜柱（20倍柱體積）；再用100%有機溶劑沖洗。若直接用100%有機溶劑沖洗，可造成緩沖液沉積析出，從而損壞柱子品質。同樣的，若流動相中加入酸、鹼溶液時，也應當按照上述方法，先採用高比例的水（水：甲醇10:90）沖洗20倍柱體積，防止強酸強鹼溶液導致硅膠基質填料的溶解。

蛋白質對反相色譜柱的污染已成為常見問題，尤其在分離未經處理的動物組織等生物樣品。一般情況下，純有機溶劑如乙腈或甲醇不能很有效地清洗色譜柱，因而需要一些特殊的清洗方法。首先嘗試用高比例強極性溶劑的流動相進行沖洗，如乙腈∶異丙醇（1:2,V/V）；或使用0.1%的三氟乙酸水溶液或者0.1%乙酸水溶液清洗。此外，還可以採用1%十二烷基硫酸鈉 (SDS)，然後用5%～95%乙腈/水（含0.1%TFA）梯度沖洗，去除蛋白污染物效果也較好。

若採用上述的條件清洗後色譜柱仍不能達到理想的效果，有必要將固定相從色譜柱內取出，進行清洗再生後重新裝填。具體操作是：將色譜固定相從色譜柱內打出後，用甲醇浮選，去除其中細小的破碎顆粒；然後用二甲基甲醯胺、丙酮、甲醇超聲清洗；最後乾燥固定相，重新裝填色譜柱。經該方法處理的色譜柱，性能可得到顯著提高。

2、色譜柱的保存

色譜柱的保存應按照使用說明書中所指明的溶劑進行填充，盡可能的貯存於100%有機溶劑。色譜柱不能貯存在水或含水量高的溶劑中，會引起微生物的滋生，影響色譜柱壽命。如反相色譜柱長期不用，最好採用90%~95%的有機溶劑混合水溶液保存，防止色譜柱因密封不嚴造成色譜柱兩頭乾涸、斷層引起的壽命縮短。

此外，色譜柱還應當輕拿輕放，避免劇烈碰撞引起的色譜柱填料產生塌陷、斷層，縮短使用壽命。答案來自

『玖』 色譜柱的分類

1、首先應確認柱和儀器的接頭以及管路是否匹配。為減少死體積，進樣閥、柱子、檢測器之間的連接管路內徑盡可能使用內徑較小的管線，同時控制進樣器、色譜柱和檢測器之間連接管線的長度。安裝色譜柱之前，確認流路系統中的溶劑是否正常。對分析較復雜的樣品建議安裝保護柱。
2、為了使色譜柱與儀器系統達最佳的連接效果，應盡量使用與色譜柱介面相匹配的螺帽和錐形接頭，如原來的接頭長期匹配其他類型的色譜柱，建議在連接新色譜柱前應檢查匹配情況，避免造成色譜柱的損壞或因色譜柱不匹配造成的漏液。
3、使用PEEK 材料的通用接頭，只需用手擰緊不需要特定扳手，使用壓力為5000psi；使用溫度不得超過100℃。 1、在進行樣品檢測前，至少使用20倍柱體積流動相使色譜柱充分平衡。流動相一定要使用色譜級別的溶劑。如使用水相的緩沖液應當天配製以保持新鮮避免細菌產生。
2、流動相使用前需用微孔濾膜過濾,消除流動相中顆粒對色譜系統和色譜柱的損壞。緩沖液與其他流動相混合後應重新過濾避免溶解度變化造成產生新的沉澱。不應使用純水作為流動相沖洗C18色譜柱，以免柱性能損壞（添加5%的有機溶劑沖洗色譜柱，同時可以達到對緩沖鹽清洗的作用。還可以使色譜柱更容易平衡）。
3、流動相需脫氣後使用，可避免因氣泡導致的泵和檢測器的工作不正常。如果測試時使用的流動相與色譜柱保存使用的流動相有較大區別，應該使用過度分布的形式進行平衡。避免由於流動相的突然變化造成柱壓增加過大或流動相緩沖鹽結晶造成對色譜柱和儀器系統的損壞。正相色譜柱比反相色譜柱需要更長的平衡時間。 1、樣品應當盡可能溶解在能與流動相相互溶的溶劑中。除特殊指明外，如使用強溶劑溶解樣品柱子的解析度將可能降低。
2、樣品溶液在進樣前應使用針頭式過濾器對樣品預先過濾。頻繁改變流動相組成，會加速降低柱效。
3、色譜柱由高壓勻漿法裝填，能承受較高壓力。為獲得最佳分離效果，使用時請不要超過200kgf，而且避免壓力突然上升或變化，否則會造成硅膠填料的破壞，減少色譜柱的使用壽命。除特殊要求外最高操作溫度不要超過60℃。 1、如果流動相含有酸或無機鹽，應當先用去離子水（20倍柱體積）沖洗干凈。然後用用100%乙腈或甲醇保存色譜柱。最後用柱子的接頭密封，並放在穩定的環境中存放。
2、應避免色譜柱受到直接的機械沖擊或摔落，避免造成色譜柱性能的降低。
色譜柱的再生：
用相當於20倍柱體積的溶劑按下列順序沖洗柱子，建議按柱子的箭頭方向沖洗，盡可能不反沖。沖洗時使用的的參考溶劑順序是水、甲醇、氯仿、異丙醇。

『拾』 那些HPLC色譜柱可以用純水

你問的應該是反相
色譜柱
，因為
凝膠過濾
用
純水
相是司空見慣的。
Agilent的Bonus系列，Aichorm的Aqua系列，都是可以做純水相的。
但你如果只是考慮
梯度
起點的高
水相
比例，那就不必了，普通的C18、C8都可以用純水相短時間沖洗，不超過10個
柱體積
，是沒什麼問題的。