膜設備提取黃漿水蛋白

⑴ 細胞破碎後，用緩沖液提取蛋白質，用什麼方法能得到蛋

細胞破碎後，用緩沖液提取蛋白質，用什麼方法能得到蛋
蛋白質分離純化的一般程序可分為以下幾個步驟：

（一）材料的預處理及細胞破碎

分離提純某一種蛋白質時，首先要把蛋白質從組織或細胞中釋放出來並保持原來的天然狀態，不喪失活性。所以要採用適當的方法將組織和細胞破碎。常用的破碎組織細胞的方法有：

1. 機械破碎法

這種方法是利用機械力的剪切作用，使細胞破碎。常用設備有，高速組織搗碎機、勻漿器、研缽等。

2. 滲透破碎法

這種方法是在低滲條件使細胞溶脹而破碎。

3. 反復凍融法

生物組織經凍結後，細胞內液結冰膨脹而使細胞脹破。這種方法簡單方便，但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質不宜採用此法。

4. 超聲波法

使用超聲波震盪器使細胞膜上所受張力不均而使細胞破碎。

5. 酶法

如用溶菌酶破壞微生物細胞等。

(二) 蛋白質的抽提

通常選擇適當的緩沖液溶劑把蛋白質提取出來。抽提所用緩沖液的pH、離子強度、組成成分等條件的選擇應根據欲制備的蛋白質的性質而定。如膜蛋白的抽提，抽提緩沖液中一般要加入表面活性劑（十二烷基磺酸鈉、tritonX-100等），使膜結構破壞，利於蛋白質與膜分離。在抽提過程中，應注意溫度，避免劇烈攪拌等，以防止蛋白質的變性。

（三）蛋白質粗製品的獲得

選用適當的方法將所要的蛋白質與其它雜蛋白分離開來。比較方便的有效方法是根據蛋白質溶解度的差異進行的分離。常用的有下列幾種方法：

1. 等電點沉澱法

不同蛋白質的等電點不同，可用等電點沉澱法使它們相互分離。

2. 鹽析法

不同蛋白質鹽析所需要的鹽飽和度不同，所以可通過調節鹽濃度將目的蛋白沉澱析出。被鹽析沉澱下來的蛋白質仍保持其天然性質，並能再度溶解而不變性。

3. 有機溶劑沉澱法

中性有機溶劑如乙醇、丙酮，它們的介電常數比水低。能使大多數球狀蛋白質在水溶液中的溶解度降低，進而從溶液中沉澱出來，因此可用來沉澱蛋白質。此外，有機溶劑會破壞蛋白質表面的水化層，促使蛋白質分子變得不穩定而析出。由於有機溶劑會使蛋白質變性，使用該法時，要注意在低溫下操作，選擇合適的有機溶劑濃度。

（四）樣品的進一步分離純化

用等電點沉澱法、鹽析法所得到的蛋白質一般含有其他蛋白質雜質，須進一步分離提純才能得到有一定純度的樣品。常用的純化方法有：凝膠過濾層析、離子交換纖維素層析、親和層析等等。有時還需要這幾種方法聯合使用才能得到較高純度的蛋白質樣品。

⑵ 如何提取大豆中的蛋白質（至少兩種方法）、a、b兩種大豆蛋白如何區別其純度高低

可以使用上海生工的一步法植物活性蛋白提取試劑盒 BSP004

⑶ nf納濾膜應用在蛋白質提取的過程中有什麼優勢

蛋白質提取分離濃縮設備的特點

1、納濾膜分離設備濃縮能耗低，僅為熱濃縮的30%，為企業節約成本。

2、納濾膜分離設備操作簡單，佔地面積小，設備自動運行，維護方便。

3、納濾膜分離設備可拓展性好，容易實現工業化擴產需求。

4、前端除雜，提高膠原蛋白品質和口感。

5、納濾膜分離設備濃縮同時，脫出酶解液中的無機鹽，降低苦腥味和農殘。

6、縮短生產周期，提成生產效率。

7、納濾膜分離設備常溫濃縮，蛋白生物活性基本不受影響。

將納濾膜分離設備技術結合傳統提取、分離、濃縮工藝，對傳統工藝進行技術改造和革新，致力於為企業降低綜合生產成本，提高產品質量，優化了膜提取分離濃縮膠原蛋白工藝。

⑷ 總膜蛋白提取試劑盒的原理是什麼

外在膜蛋白為水溶性蛋白，靠離子鍵或其它較弱的鍵與膜表面的蛋白質分子或脂分子結合，因此只要改變溶液的離子強度甚至提高溫度就可以從膜上分離下來，膜結構並不被破壞。
內在膜蛋白與膜結合非常緊密，是嵌在膜中的，水溶性不好，基本方法就是用不同的離心速度去掉胞質蛋白等，然後用去污劑把蛋白從膜中釋放出來。膜蛋白分離純化的重要步驟是選擇適當的增溶用表面活性劑，一般常用的有膽酸鹽，CHAPS(一種離子去污劑），Emulgen和Lubrol等表面活性劑。 
有專門的試劑盒效果好一些

⑸ 細胞培養液中蛋白的提取方法

蛋白質濃縮技術是免疫學中常用的手段,現介紹幾種常用的濃縮技術.
1、透析袋濃縮法
利用透析袋濃縮蛋白質溶液是應用最廣的一種.將要濃縮的蛋白溶液放入透析袋（無透析袋可用玻璃紙代替）,結扎,把高分子（6 000－12 000）聚合物如聚乙二醇（碳蠟）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可.也可將吸水劑配成30％－40％濃度的溶液,將裝有蛋白液的透析袋放入即可.吸水劑用過後,可放入溫箱中烘乾或自然乾燥後,仍可再用.
2、冷凍乾燥濃縮法
這是濃縮蛋白質的一種較好的辦法,它既使蛋白質不易變性,又保持蛋白質中固有的成分.它是在冰凍狀態下直接升華去除水分.具體做法是將蛋白液在低溫下冰凍,然後移置乾燥器內（乾燥器內裝有乾燥劑,如NaOH、CaCl2和硅膠等）.密閉,迅速抽空,並維持在抽空狀態.數小時後即可獲得含有蛋白的乾燥粉末.乾燥後的蛋白質保存方便,應用時可配成任意濃度使用.也可採用凍干機進行冷凍乾燥.
3、吹乾濃縮法
將蛋白溶液裝入透析袋內,放在電風扇下吹.此法簡單,但速度慢,且溫度不能過高,最好不要超過15 ℃.
4、超濾膜濃縮法
此法是利用微孔纖維素膜通過高壓將水分濾出,而蛋白質存留於膜上達到濃縮目的.有兩種方法進行濃縮：一種是用醋酸纖維素膜裝入高壓過濾器內,在不斷攪拌之下過濾；另一種是將蛋白液裝入透析袋內置於真空乾燥器的通風口上,負壓抽氣,而使袋內液體滲出.
5、凝膠濃縮法
選用孔徑較小的凝膠,如SephadexG25或G50,將凝膠直接加入蛋白溶液中.根據干膠的吸水量和蛋白液需濃縮的倍數而稱取所需的干膠量.放入冰箱內,凝膠粒子吸水後,通過離心除去.
6、濃縮膠濃縮法
濃縮膠是一種高分子網狀結構的有機聚合物,具有很強的吸水性能.每克干膠可吸水120 ml-150 ml.它能吸收低分子量的物質,如水、葡萄糖、蔗糖、無機鹽等,適宜濃縮10000分子量以上的生物大分子物質.濃縮後,蛋白質的回收率可達80％～90％.比濃縮膠應用方便,直接加入被濃縮的溶液中即可.必須注意,濃縮溶液的pH值應大於被濃縮物質的等電點,否則在濃縮膠表面產生陽離子交換,影響濃縮物質的回收率.
（轉的!不過也希望能幫到你）

⑹ 請問，納濾膜能用於蛋白提取，蛋白濃縮嗎需要的設備有哪些

可以用特種分離膜設備對蛋白質提取，納濾可以對氨基酸進行分離濃縮了，內所以完容全可以對蛋白質進行濃縮分離。
至於設備，一般的水處理公司都會有，如果項目不大的話一般都需要增壓泵，高壓泵，濾芯，膜元件，膜管，膜架，以及對膜元件的清洗系統等。

⑺ 如何將膜上的蛋白從細胞膜上分離出來

分離細胞膜蛋白的方法：

1、冰上刮下細胞後將細胞溶於有蛋白酶抑制劑專的緩沖液屬 A 中，於室溫與液氮罐中反復凍融 2 次。

2、5000 轉 4 度離心，驅除核及未裂解的細胞。

3、取上清 12000 轉 4 度離心 10 分鍾取沉澱溶於有蛋白酶抑制劑的緩沖液 B 中。

4、12000 轉 4 度離心 10 分鍾取沉澱溶於有蛋白酶抑制劑的緩沖液 C 中提取後測蛋白濃度 ,SDS-PAGE 電泳，分裝後 -20 度保存備用。

buffer A : 1mMkcl,5mMNacl,3mM Mgcl2,50mM Hepes,1mM DTT,0.5ug/ml Leupeptin,20uM pmsf(PH=7.4)

buffer B : 1mMkcl,5mMNacl,3mM Mgcl2,50mM Hepes,1mM DTT,0.5ug/ml Leupeptin,20uM pmsf(PH=7.4) 1mM EGTA

buffer C : 0.5ug/ml Leupeptin,20uM pmsf,50mMTris-cl(PH=7.0),

⑻ 哪種蛋白提取試劑盒能同時提取膜蛋白與胞漿蛋白

免疫組化中，所染色的蛋白的位置與該蛋白的特性有關系。在現有所研究的蛋白中，不少蛋白存在核轉位的情況， 也就是說當細胞培養的環境或者刺激的因素不同，該蛋白會出現從胞漿到細胞核的表達位置的改變。有時候表達不變僅僅是從胞漿轉位到細胞核，有時候還伴有表達的上調，比如nf-kb。

⑼ 如何將膜分離技術用於蛋白質的分離在線等…

這個應該是發酵話題吧。
第一步，一般是細菌培養。
第二步，破菌
第三步，微濾除濁
第四步，超濾提純（分子量切割）
第五步，超濾濃縮或NF濃縮

一般來說，膜在第三步驟開始起到作用。

⑽ 求助：怎麼提取細胞上清液中的蛋白

怎麼提取細胞上清液中的蛋白 western blot中蛋白樣品調節濃度有很多方法 先檢測出各個蛋白樣品的濃度，根據體積通過不同單位的Loading buffer將樣品稀釋成不同的體積，即可以保證各個蛋白樣品濃度一致 或者在樣品裂解的時候，用裂解液或者PBS去稀釋蛋白樣品，達到調節濃度的。細胞比較簡單，只有細胞膜，抽提過程中，很容易破壞細胞膜，從而得到蛋白，相應蛋白中受到其他物質干擾也比較少，樣品較為干凈。但是用組織的時候，組織由細胞組成，但是從組織中抽提丹巴就要復雜，做組織勻漿以後，再分離組織碎片和蛋白，但是分離過程可能沒有那麼好，組織中含有的各種雜質，雜蛋白就比細胞中要多，要復雜。因此選擇適當的方法提取組織蛋白，對於後續的Western來說還是非常重要的，這也是為什麼細胞的蛋白做WB挺好，但是換到組織，可能有些條件就需要進一步優化了。