chelex100樹脂

⑴ 10%chelex-100溶液怎麼配，我配的為什麼溶不了，請做過的朋友詳細講一下

Chelex-100是一種樹脂，本來就無法溶解到水中的，用它來提DNA的時候，主要是能吸附一些干擾離子，用水配的目的是：讓小顆粒吸水溶脹，變成小微球。
所以，你不用費力去把它溶解了，這是沒有必要的。

⑵ 枕巾被單枕套上面能提取到dna嗎

(一)Chelex100法
原理：Chelex100是一種螯合樹脂，由苯乙烯、二乙烯苯共聚體組成，含有成對的亞氨基二乙酸鹽離子，起著螯合基團作用，對多價金屬離子有極強親和力。在低離子強度、鹼性及100℃煮沸條件下，可以使細胞膜裂解，並使與DNA結合的蛋白質變性，DNA游離。檢材基質中一般含有大量金屬離子，在低離子強度及加熱條件下，金屬離子可以輔助脫氧核糖核酸酶降解DNA，也可以抑制PCR反應，所以在提取DNA時，加入Chelex100，螯合了金屬離子，防止了DNA降解，提高了PCR擴增成功率。

方法：剪取適量血斑、精斑、汗斑、鼻涕斑、指甲、毛根、軟組織等等生物檢材，置於0.5ml離心管內，加入適量純水，室溫浸泡，13,000rpm離心5min，上清丟棄，管底留約20μl左右液體及檢材基質，加入100-200μl 5%Chelex100(有時需加適量PK)56℃15min至數10小時不等，100℃8min，13,000rpm離心5mim，上清備用。

評述：
1、 Chelex100法已經成為DNA提取的基本方法，Chelex100法是萬能的。目前，我們一切純化方法都在Chelex100法的基礎上進行，Chelex100法又不是萬能的。
2、 Chelex100法提取前的檢材清洗非常重要，因為現場檢材往往均較臟，臟東西可以抑制PCR反應，所以往往不止清洗一次，清洗檢材時可能損失部分DNA。所以應平衡清洗抑制劑與損失DNA之間的關系。特別強調清洗時應「把根留住」，很多情況下已知樣本DNA檢驗失敗的原因是把根沒有留住。DNA檢驗時還有另外一句名言：「一個蘿卜一個坑」，防止混亂檢材。肝素抑制PCR反應，血紅素抑制PCR反應，所以長時的浸泡、多次清洗往往可能洗除肝素及血紅素。在已知樣本多次無檢驗結果疑為肝素抗凝的情況下，多洗是檢驗成功所必須的。血紅素對普通Taq酶的抑製作用是明顯的，而目前mtDNA擴增一般用普通Taq酶，所以同一樣品除進行STR檢驗外尚需進行mtDNA檢測時，盡量去除干凈血紅素，顯得尤為重要。現場提取毛發或樣本毛發，用毛根進行STR檢驗時，純水清洗也非常重要，如果沒有清洗干凈，毛根DNA本身很少，很易檢出為混合型。因為現場毛發及樣本毛發很易粘附另一人成份。毛根清洗的特點為振盪洗滌，不離心，多換水。
3、 清洗後檢材中加入5%Chelex100量視檢材而定。檢材參考加入量
0.5×0.5cm血斑 150ul-200ul
二步法精斑 100ul
毛根 10ul
煙頭 30-50ul
4、 對於組織，難溶檢材，有疑問檢材，均可加入終濃度為100ug/ml左右PK，有時間隔一段時間，補加適量PK，PK(蛋白水解酶K)作用最佳pH為8.0。
5、加入Chelex100後，56℃浸泡時間，血斑≥15min;組織≥30min，二步法精斑≥1h。
6、PCR擴增前應離心。PCR擴增時不應吸入Chelex100，因為Chelex100為PCR抑制劑。
7、Chelex100使用濃度5%，有些人用10%，有些人用20%，各人愛好。配製好5%Chelex100 pH應在10—11之間，否則應丟棄，不應人為調整Chelex100懸液pH值。

(二)有機法
原理：有機法提取DNA一般是指用平衡酚(又叫飽和酚)、氯仿等按不同比例混合，採用不同方法提取DNA。DNA易溶於水，不溶於有機溶劑，蛋白質分子表面帶有親水性基因，很容易進行水合作用，並在表面形成一層水化層，使蛋白質分子能夠順利地進入到水溶液中，形成穩定的膠體溶液。在有機溶劑存在的情況下，破壞了蛋白質膠體溶液的穩定性，使蛋白質變性沉澱，離心後，有機溶劑於試管底層(有機相)，DNA繼續穩定的存在於上層水相，蛋白質沉澱存在於兩相之間。水相中的DNA在大量冷無水乙醇及單價陽離子存在的情況下，水會溶於乙醇中，而DNA從水相中析出，沉澱，通過離心回收。有機法中常用試劑為平衡酚、氯仿，酚及氯仿作用是使蛋白質變性，氯仿的另一作用是有助於水相與有機相分離，並抽提溶於水中(有時達12%)的酚。平衡酚、氯仿及乙醇，三者互溶。
方法：剪取適量檢材，置於0.5ml離心管內，清洗方法同用Chelex100法提取DNA，加入適量純水及終濃度為100μg/ml PK，37℃-56℃孵育15min至數10小時，有時間隔一段時間補加適量PK → 13,000rpm 5min→吸上清於另一管→ 加入等體積平衡酚→振盪或顛倒徹底混勻→13,000rpm 5min→吸上清水相於另一管，加入等體積1：1混合平衡酚：氯仿→振盪或顛倒徹底混勻→13,000rpm 5min→吸上清水相於另一管→加入等體積氯仿→振盪或顛倒徹底混勻→13,000rpm 5min→吸上清水相於另一管→加入2.5倍體積冷無水乙醇冷凍保存10min以上 →13,000rpm 5-10min→棄上清→室溫涼干或100℃ 5min烤乾→加入10-20μl純水→室溫溶解或100℃5min幫助溶解→離心上清備用
評述：
1、有機法是經典DNA提取方法，目前國內外仍大量採用，其提取DNA特點為雙鏈，純度高。
2、有機法缺點是應用有毒有機試劑，對人體有害，污染環境；多次換管，容易引起檢材污染及編號混亂。有機法提取DNA的另一個缺點是不能去除某些染料，血紅素等，而這些恰好是PCR抑制劑。

⑶ 重金屬形態的研究方法

從狹義上講，水、土中重金屬形態研究，指的是從分析化學的角度出發，去研究如何區別和測定在水、土壤環境中重金屬的不同形式，並利用這種形態分析去研究環境問題。重金屬形態的研究與分析方法目前尚無統一的劃分標准和分析程序，常根據研究的具體要求和實驗條件而定。通常使用陽極溶出法，0.45μm濾膜分離，Chelex-100樹脂柱和紫外光照一系列處理技術，可將重金屬區分為溶解態與顆粒態兩大類（用0.45μm孔徑濾膜）。在溶解態重金屬中再區分為不穩定態和穩定態、離子態和膠體態、有機態和無機態；把顆粒態重金屬再區分為可換態、碳酸鹽結合態、鐵錳氧化物態、成硫化合物和有機質結合態以及殘渣態等。國外有人將水體中Cu、Pb、Zn、Cd溶解態分離出9種形態。我國松花江和湘江等河流進行了重金屬的形態研究，弄清了上游與下遊河段的Cu有不同存在形態。

⑷ 論文翻譯~

材料與方法
從Sierra Madre當地漁民用電捕撈、掃網、海灘圍網、釣捕或手捉技術採集的鱒魚中抽取腹鰭組織樣(2mm2)。我們能採到20世紀50年代首次被認為有鱒魚棲息的幾座高山灌渠內的乾涸河床中棲息的鱒魚(R.R.Miller,個人通訊；圖1插圖)。由於難以進入采樣區，即使可進入的地點採集到的魚的數量也很有限，所以這些種群多數樣本容量較小。這些腹鰭組織用空氣乾燥並運回室內做DNA分析。全基因組DNA用Chelex-100樹脂(BioRad公司)或Purgene (Gentra Systems公司)遵照Nielsen、Gan和Thomas(1994)及製造商給出的方法進行提取。測定了墨西哥鱒魚的13個微衛星擴增的質量及全等位基因多樣性(表1)。 把這些結果同美國西南部其他鱒魚種群相同基因座發現的等位基因多樣性相比較(附1)。該比較把發現的墨西哥鱒魚等位基因多樣性放入標記物中來比較它們和其他南方鱒魚種群中發現的等位基因的關系，並允許我們來鑒定墨西哥鱒魚微衛星多樣性分析中合適的基因座。
由於使用標准PCR法難以獲得Rio Mayo鱒魚一致性的結果，這些分析中排除了2個基因座 (One? 和Ssa14)。採用11個高度多態性基因座 (Omy2、Omy27、Omy77、Omy207、Omy325、One?、One- ?1、Ots1、Sfo8、Ssa85和Ssa289)擴增法測定了12個墨西哥鱒魚種群 (表2) 的微衛星等位基因多樣性。微衛星擴增步驟見Nielsen、Crow和Fountain (1999) 及Nielsen和Fountain (1999)，除了在USGS-BRD分子生態實驗室我們使用LI-COR Long Reader 4200型自動測序儀和3.00版本的Gene ImagIR軟體來可視化和測定微衛星等位基因的大小。我們實驗室對所有基因座使用ABI 373型自動測序儀和LI-COR型自動測序儀獲得結果之間的等位基因進行標准化。這些結果提供給需要的作者們。

⑸ 自然界金屬存在的形態

概念：重金屬形態是指重金屬元素在環境中的某種離子、分子或其它結合方式存在的物理-化學形式。如銅在水溶液中可能以7種溶解的形態存在：Cu2+、CuCO30、Cu(OH)20、CuOH+、Cu(OH)22+、CuHCO30、Cu(CO)22-等；大氣中的汞可有元素汞、無機汞（如氯化汞）和有機汞（如甲基汞）等不同化學狀態。
分類：重金屬形態包括元素具體存在的物理的聚集狀態（physical state）（氣態、液態、固態）和化學的（原子、分子的）結合方式（chemical species）。金屬的形態與其來源和進入水體後與水中其它物質可能發生的相互作用有關，不同的形態表現出不同的生物毒性和環境行為。
研究方法：從狹義上講，水、土中重金屬形態研究，指的是從分析化學的角度出發，去研究如何區別和測定在水、土壤環境中重金屬的不同形式，並利用這種形態分析去研究環境問題。重金屬形態的研究與分析方法目前尚無統一的劃分標准和分析程序，常根據研究的具體要求和實驗條件而定。通常使用陽極溶出法，0.45μm濾膜分離，Chelex-100樹脂柱和紫外光照一系列處理技術，可將重金屬區分為溶解態與顆粒態兩大類（用0.45μm孔徑濾膜）。在溶解態重金屬中再區分為不穩定態和穩定態、離子態和膠體態、有機態和無機態；把顆粒態重金屬再區分為可換態、碳酸鹽結合態、鐵錳氧化物態、成硫化合物和有機質結合態以及殘渣態等。國外有人將水體中Cu、Pb、Zn、Cd溶解態分離出9種形態。我國松花江和湘江等河流進行了重金屬的形態研究，弄清了上游與下遊河段的Cu有不同存在形態。
重金屬危害：水體中重金屬的污染的程度與對生物危害的作用，與其存在形態的不同有直接關系；重金屬污染對生物活性及毒性的影響大小，決定於其中影響最大的某種形態的含量（或濃度），所以重金屬形態研究與分析水體中重金屬的遷移轉化、生物效應是非常重要的內容。近年來，正發展一種用計算機程序，根據熱力學平衡，計算重金屬在天然水體中存在的各種形態及其占總濃度的百分比；還考慮了吸附、沉澱及揮發等多相平衡的問題。